萬浩宏，劉俊卿，張萍，藍(lán)婷英，陳龍，楊曉農(nóng)*

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 610041；2.雅安碧峰峽野生動(dòng)物園，四川 雅安 625000）

東北虎又稱西伯利亞虎、阿穆爾虎［1］，主要棲息在人類干擾少、有蹄類獵物密度高的森林生態(tài)系統(tǒng)中［2］。是世界現(xiàn)存虎種中體型最大、分布最北的亞種［3］，屬國家Ⅰ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物［4］。目前，關(guān)于虎屬血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的研究多集中在不同虎亞種之間的橫向比較，可能存在不同的缺點(diǎn)，如研究對(duì)象的數(shù)量較少［5-6］，且多為幼體［7-9］，或者實(shí)驗(yàn)時(shí)間長達(dá)數(shù)年［10］，或者檢測對(duì)象僅為血常規(guī)或者血液生化指標(biāo)當(dāng)中的幾項(xiàng)［7-11］。由于技術(shù)限制［10，12-15］，以前的測定數(shù)據(jù)已經(jīng)不能適應(yīng)現(xiàn)代動(dòng)物園對(duì)圈養(yǎng)東北虎飼養(yǎng)繁殖、疾病診療的需要。

本試驗(yàn)以15 只圈養(yǎng)于雅安碧峰峽野生動(dòng)物園的健康東北虎為研究對(duì)象，研究圈養(yǎng)東北虎的血常規(guī)和血液生化指標(biāo)與其年齡、性別之間的相關(guān)性，并初步篩選出東北虎血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的參考范圍，對(duì)今后圈養(yǎng)東北虎提供飼養(yǎng)繁殖、疾病診療等方面的參考，也為野生東北虎的救護(hù)起一定的參考作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 圈養(yǎng)于雅安碧峰峽野生動(dòng)物園虎山區(qū)內(nèi)，均為純種的東北虎子一代和子二代。選取營養(yǎng)狀況良好、無眼觀病理狀態(tài)、無妊娠情況的東北虎為試驗(yàn)動(dòng)物。其中，成年東北虎均為一年齡以上的雄性東北虎3 只；亞成體東北虎為一月齡至一年齡的子二代東北虎，雄性7只，雌性5只。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn) 于2018 年4 月10～17 日在雅安碧峰峽野生動(dòng)物園虎山區(qū)內(nèi)完成血液采樣，于4月18日送至雅安市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行分析測定。

1.3 采樣方法 在化學(xué)保定的情況下用75.0%醫(yī)用酒精棉球消毒穿刺部位皮膚后，經(jīng)靜脈穿刺用真空采血管采集后肢靜脈血。普通血清管采集血液樣本2.0 mL，用于血液生化指標(biāo)檢測；EDTA 抗凝管采集血液樣本2.0 mL，用于血常規(guī)指標(biāo)檢測。

1.4 樣品的保存與處理 將收集完成的血樣輕輕顛倒數(shù)次，混合均勻后立即放入4 ℃低溫保存箱中，待采樣完成后送到雅安市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的檢測。

1.5 測定指標(biāo)與方法 血常規(guī)指標(biāo)由US-1800全自動(dòng)五分類血常規(guī)分析儀測定；血液生化指標(biāo)由HITCH 7600-20 型分析儀測定。具體操作步驟參照各試劑盒和檢測儀器的使用說明書，同一樣本連續(xù)測定三次，取其平均值作為檢測數(shù)據(jù)計(jì)入結(jié)果。

1.6 數(shù)據(jù)處理 用SPSS 21.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行均值分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；用Duncan 法對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)作多重比較，結(jié)果用P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 圈養(yǎng)東北虎血常規(guī)指標(biāo)的測定及分析 通過對(duì)采樣于雅安碧峰峽野生動(dòng)物園圈養(yǎng)東北虎的15個(gè)血樣進(jìn)行血常規(guī)檢驗(yàn)、分析后，結(jié)果顯示：平均血小板體積指標(biāo)，各年齡段的差異極顯著（P＜0.01），紅細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積指標(biāo)，各年齡、性別之間差異顯著（P＜0.05），其余檢測指標(biāo)的差異不顯著（P＞0.05）。具體見表1。

表1 雅安碧峰峽圈養(yǎng)東北虎的血常規(guī)指標(biāo)

2.2 圈養(yǎng)東北虎血液生化指標(biāo)的測定及分析 通過對(duì)采樣于雅安碧峰峽野生動(dòng)物園圈養(yǎng)東北虎的15 個(gè)血樣進(jìn)行血液生化檢測、分析后，發(fā)現(xiàn)白蛋白指標(biāo)存在極顯著的年齡、性別差異（P＜0.01），總蛋白、球蛋白、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、無機(jī)磷指標(biāo)存在顯著的年齡、性別差異（P＜0.05），其余檢測指標(biāo)的差異不顯著（P＞0.05）。具體見表2。

表2 雅安碧峰峽圈養(yǎng)東北虎的血液生化指標(biāo)

2.3 圈養(yǎng)東北虎血常規(guī)、血液生化指標(biāo)與年齡、性別的相關(guān)性分析 雄性亞成體東北虎的紅細(xì)胞數(shù)（9.00±1.58）顯著高于雌性亞成體東北虎（6.97±0.44）和雄性成年東北虎（7.35±0.70）（P＜0.05）。雄性亞成體東北虎的紅細(xì)胞壓積（47.11±5.90）顯著高于雄性成年東北虎（38.57±3.19）和雌性亞成體東北虎（37.86±2.70）（P＜0.05）。雄性成年東北虎的平均血小板體積（12.17±0.42）極顯著低于雌性亞成體東北虎（13.36±0.47）和雄性亞成體東北虎（13.27±0.53）（P＜0.01）。

雄性成年東北虎的總蛋白指標(biāo)（62.50±6.09）顯著低于雌性亞成體東北虎（80.22±10.55）和雄性亞成體東北虎（78.30±10.67）（P＜0.05）。雄性成年東北虎和雌性亞成體東北虎的白蛋白指標(biāo)（45.37±2.93、47.16±3.63）極顯著高于雄性亞成體東北虎（35.91±3.19）（P＜0.01）。雄性成年東北虎的球蛋白指標(biāo)（17.13±6.17）顯著低于雄性亞成體東北虎（41.49±12.38）（P＜0.05）。雄性成年東北虎和雌性亞成體東北虎的谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶指標(biāo)（0.53±0.15、0.50±0.10）顯著高于雄性亞成體東北虎（0.20±0.26）（P＜0.05）。雄性亞成體東北虎的無機(jī)磷指標(biāo)（1.56±0.18）極顯著低于雄性成年東北虎（2.02±0.33）和雌性亞成體東北虎（2.13±0.20）（P＜0.01）。

其余檢測指標(biāo)與年齡、性別的差異性不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 年齡、性別因素對(duì)血常規(guī)、血液生化指標(biāo)的影響 雄性亞成體東北虎的紅細(xì)胞數(shù)（9.00±1.58）顯著高于雌性亞成體東北虎（6.97±0.44），這種差異推測與性腺的成熟有一定關(guān)系，雄性激素可刺激機(jī)體加速有核紅細(xì)胞的分裂和血紅蛋白合成，刺激腎臟產(chǎn)生紅細(xì)胞生成酶［16］。平均血紅蛋白含量（190.73±23.14）和平均紅細(xì)胞數(shù)（8.00±1.47）與成年貓科動(dòng)物的正常血液學(xué)值［12］有差別，分別高于其對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)（135±17）和（6.6±1.0），推測是由于飼養(yǎng)地的海拔差異和測定方法不同造成的。紅細(xì)胞壓積有助于了解紅細(xì)胞的增多與減少。雄性亞成體東北虎的紅細(xì)胞壓積（47.11±5.90）顯著高于雄性成年東北虎（38.57±3.19）和雌性亞成體東北虎（37.86±2.70），可能與采樣時(shí)的天氣及應(yīng)激造成的飲水減少有關(guān)。4 月17 日采集雄性亞成體東北虎的血樣時(shí)，天氣晴朗、氣溫升高，并且由于該日采樣數(shù)量多、持續(xù)時(shí)間長，導(dǎo)致東北虎機(jī)體應(yīng)激加強(qiáng)。雄性成年東北虎的總蛋白指標(biāo)（62.50±6.09）顯著低于雌性亞成體東北虎（80.22±10.55）和雄性亞成體東北虎（78.30±10.67），與張紅緒等［7］的試驗(yàn)結(jié)果差異明顯，推測與投喂飼料的營養(yǎng)成分不同有關(guān)。雅安碧峰峽野生動(dòng)物園內(nèi)圈養(yǎng)的成年東北虎日糧以冷凍雞骨架為主，并且每周五停食一天，可能存在日糧中蛋白質(zhì)攝入不足的情況，而亞成體東北虎日糧以精牛肉為主。

3.2 非年齡、性別因素對(duì)血常規(guī)、血液生化指標(biāo)的影響 本次檢測除5項(xiàng)血液生化指標(biāo)和3項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)有顯著差異外，其余數(shù)據(jù)均無顯著差異，具有一定的參考價(jià)值。但血紅蛋白含量和紅細(xì)胞數(shù)指標(biāo)與成年貓科動(dòng)物的正常血液學(xué)值［12］有差別，推測是由于飼養(yǎng)地的海拔差異造成的，但明顯高于張錫然等［5］研究的結(jié)果，與趙廣英等［14］研究的結(jié)果也不符合，推測是由于兩者的檢測時(shí)間相差多年，所采用的檢測方法存在差異所致，具體原因還有待于進(jìn)一步考究。關(guān)于血液生化指標(biāo)的檢測，鉀、鈉、氯、鈣、鎂、無機(jī)磷的檢測結(jié)果均與張錫然等［5］、凌銘德等［17］研究的結(jié)果相符合。它們參與維持體液滲透壓和酸堿平衡，維持神經(jīng)肌肉的正常興奮性，其在血液中濃度的穩(wěn)定有利于各種生化反應(yīng)進(jìn)行?？偟鞍?、白蛋白、球蛋白的檢測數(shù)據(jù)均低于張錫然等［5］的試驗(yàn)結(jié)果，這值得深入研究，初步推斷是由于各個(gè)動(dòng)物園內(nèi)的飼養(yǎng)方法不同、日糧構(gòu)成差異和兩次試驗(yàn)所采用的檢測方法不同所造成的。高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白的檢測在圈養(yǎng)東北虎的血液生化檢測中還是首次報(bào)道，鮮有參考資料。

總的來說，本次試驗(yàn)達(dá)到了預(yù)期的目標(biāo)，所取得的血常規(guī)和血液生化指標(biāo)對(duì)碧峰峽圈養(yǎng)東北虎后續(xù)的疾病預(yù)防、診斷和治療提供了有效的參考資料。但同時(shí)由于樣本量較小和缺少相應(yīng)的參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)還有進(jìn)一步優(yōu)化的空間，如紅細(xì)胞、白蛋白等指標(biāo)在個(gè)體間的差異極顯著，在后續(xù)研究中還有待深究。