王建榮 林詩(shī)瑤

福州市第二醫(yī)院藥劑科，福建福州 350007

蘆薈作為藥用植物被應(yīng)用的歷史已經(jīng)達(dá)幾千年[1]，在2015年版《中國(guó)藥典》一部中記載蘆薈為百合科植物庫(kù)拉索蘆薈Aloe barbadensis Miller、好望角蘆薈Aloe ferox Miller或其他同屬近緣植物葉的汁液濃縮干燥物。蘆薈的原產(chǎn)地在非洲干燥沙漠地帶，如今在熱帶及亞熱帶地區(qū)有著較廣泛的分布[2]。蘆薈是在唐代中期傳入中國(guó)，現(xiàn)今我國(guó)主要的種植地區(qū)集中在廣東、海南、福建、云南等熱帶亞熱帶地區(qū)。蘆薈中的蘆薈苷，又稱蘆薈大黃素苷或蘆薈素，是蘆薈的主要活性成分[3-4]。一種傳統(tǒng)的中藥制劑以蘆薈和甘草為主要原料制成的蘆薈散，主要具有清熱下泄、消炎解毒等功效，主要用于治療濕癬抓搔有黃汁[5]。目前檢測(cè)含有蘆薈苷成分的方法主要有紫外分光光度法、薄層色譜法及高效液相色譜法[6-7]，蘆薈苷的檢測(cè)方法主要采用HPLC法，該中藥制劑成分簡(jiǎn)單，采用HPLC法能夠準(zhǔn)確有效的對(duì)制劑中蘆薈苷進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行方法學(xué)研究，進(jìn)一步驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確有效性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器

實(shí)驗(yàn)用蘆薈散由實(shí)驗(yàn)室提供；蘆薈苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇均為色譜級(jí)，其余實(shí)驗(yàn)用溶劑為分析級(jí)，實(shí)驗(yàn)用水均為純凈水。實(shí)驗(yàn)用儀器為戴安 Ultimate3000高效液相色譜儀（Thermo四元泵，紫外檢測(cè)器），電子天平產(chǎn)自梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司，超聲提取器產(chǎn)自濟(jì)寧天華超聲電子儀器有限公司。

1.2 方法

觀察指標(biāo)包括：線性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、檢出限試驗(yàn)及測(cè)定樣品含量。

表1 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取蘆薈苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并制成每1mL含0.4mg的對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備 取蘆薈散粉末（過(guò)120目篩）約0.2g，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲振提處理（功率250W，頻率33k Hz）30min，放置至室溫，以甲醇定容至刻度。搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1.2.3 測(cè)定 分別將對(duì)照品液與供試品液取上清液，過(guò)0.45μm濾膜，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算。1.2.4 色譜條件 色譜柱：ACE C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（25∶75）；柱溫：30℃；波長(zhǎng)：355nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

1.2.5 計(jì)算 試樣中蘆薈苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X，數(shù)值以g/100g表示：

式中：

X—試樣中蘆薈苷的含量（g/100g）；A1—試樣中蘆薈苷的峰面積；C—標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；A2—標(biāo)準(zhǔn)液中蘆薈苷的峰面積；V—試樣定容體積（mL）；m—試樣的質(zhì)量（g）。

2 方法學(xué)考察

2.1 線性關(guān)系考察

精密稱取蘆薈苷對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并定容至10mL，混勻，制成0.4mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)液，配制成 0.04，0.08，0.10，0.15，0.20，0.25mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)液，按1.2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=192.84x+1.2883，R2=0.9996，表明線性關(guān)系良好。見(jiàn)表1。

圖1 線性關(guān)系圖

2.2 重復(fù)性考察

分別稱取6個(gè)蘆薈散樣品，按1.2.2項(xiàng)下項(xiàng)下供試品溶液制備，并按1.2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果：RSD=1.56%，證明此方法重復(fù)性良好。

2.3 加樣回收率考察

分別稱取蘆薈散樣品約0.1g，共6份，精密稱定，分別精密加入相應(yīng)對(duì)照品，按上述方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果：回收率均在92%～105%，RSD=0.92%，證明此方法的回收率良好。見(jiàn)表2。

2.4 耐用性試驗(yàn)

分別考察不同流速（0.8、1.0、1.2mL/min）、不同柱溫（25℃、30℃、35℃）、不同色譜柱條件下樣品的含量變化。結(jié)果：RSD分別為0.79%、0.17%、0.57%，表明此方法耐用性較好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

考察樣品在24h內(nèi)的穩(wěn)定性，同一樣品每2h進(jìn)樣一次測(cè)定峰面積，結(jié)果：RSD為2.07%，表明此方法在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.6 檢出限試驗(yàn)

分別稀釋對(duì)照品濃度為 0.004、0.01、0.02μg/mL，進(jìn)樣分析。試驗(yàn)結(jié)果：空白峰高為0.004，為空白峰高3倍的濃度為0.01μg/mL，故蘆薈苷的檢出限為0.01μg/mL。見(jiàn)圖 1 。

2.7 不同批次樣品含量測(cè)定

精密稱定6個(gè)蘆薈散樣品0.1g，按1.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備，并按1.2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果表明：蘆薈苷平均含量為9.31g/100g。

3 討論

醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)τ谔J薈的研究由來(lái)已久，歷經(jīng)時(shí)間累積的研究證實(shí)，蘆薈中含有幾十種生物活性成分，對(duì)人體具有積極有益的藥理作用，具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合、潤(rùn)腸通便、抗菌消炎等藥理作用[8-11]，因此又被稱為“多效良藥”“天然美容醫(yī)生”“植物大夫”等。隨著現(xiàn)代科學(xué)的進(jìn)步及發(fā)展，人類對(duì)蘆薈的研究與開(kāi)發(fā)也在不斷的進(jìn)步和深化。由于蘆薈具備的多種藥用價(jià)值，現(xiàn)今在藥品、保健食品、化妝品及其他工農(nóng)業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用[12]。綜上，蘆薈目前是極具研究與開(kāi)發(fā)前景的一種藥用植物，因此對(duì)蘆薈的化學(xué)成分研究也是重中之重，那么構(gòu)成蘆薈主要藥用價(jià)值的蘆薈苷的測(cè)定具有一定的研究?jī)r(jià)值及意義。

我國(guó)在20世紀(jì)80年代初才開(kāi)始了對(duì)蘆薈的研究，當(dāng)時(shí)的研究主要集中在蘆薈的分布情況、特性、栽培技術(shù)及生態(tài)環(huán)境需求等方面，而在化學(xué)成分、生物活性組成成分、產(chǎn)品生產(chǎn)加工工藝及臨床試驗(yàn)等方面的發(fā)展研究與國(guó)外相比發(fā)展較慢，因此對(duì)蘆薈苷這種單一的成分測(cè)定及方法學(xué)研究分析也是目前鑒別及衡量蘆薈品質(zhì)的一項(xiàng)重要手段[13]。

本研究應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)蘆薈散中蘆薈苷進(jìn)行含量測(cè)定及方法學(xué)研究，試驗(yàn)結(jié)果為：蘆薈苷在0.04～0.25mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=192.84x+1.2883，R2=0.9996；重復(fù)性RSD為1.56%，重復(fù)性良好；回收率平均值為96.52%，RSD為0.92%，回收率良好；耐用性考察不同流速、不同柱溫、不同色譜柱條件下樣品的含量，RSD分別為0.79%、0.17%、0.57%，耐用性良好；蘆薈苷的檢出限為0.01μg/mL。經(jīng)研究證明，該方法準(zhǔn)確可靠、切實(shí)可行，在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在對(duì)供試品和對(duì)照品進(jìn)行處理時(shí)，必須采用現(xiàn)用現(xiàn)配原則，而且需要避光進(jìn)行試驗(yàn)，在超聲過(guò)程當(dāng)中，超聲提取的時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，建議在超聲過(guò)程中控制溫度，可以適當(dāng)加些冰塊進(jìn)行超聲，試驗(yàn)前期處理完成后應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)時(shí)間最好不要超過(guò)1d，避免因?yàn)椴僮鬟^(guò)程中時(shí)間延長(zhǎng)使蘆薈苷不穩(wěn)定導(dǎo)致測(cè)定數(shù)值不準(zhǔn)確[14]。

有研究表明，蘆薈苷大部分是蘆薈苷A和蘆薈苷B的混合體，其中蘆薈苷A具有較高的藥用價(jià)值[15]，對(duì)于蘆薈苷A產(chǎn)生藥用價(jià)值的機(jī)理，仍需進(jìn)一步研究。