亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        過(guò)敏性哮喘患兒外周血ORMDL3 mRNA與T細(xì)胞亞群Th1/Th2失衡的關(guān)系

        2020-07-15 11:51:12麥朗君饒雪梅曾學(xué)文張龍奕林烈桔
        疑難病雜志 2020年7期
        關(guān)鍵詞:亞群過(guò)敏性外周血

        麥朗君,饒雪梅,曾學(xué)文,張龍奕,林烈桔

        過(guò)敏性哮喘是一種常見慢性炎性疾病,主要病理學(xué)特征是呼吸道炎性反應(yīng)和氣道重塑,臨床表現(xiàn)為咳嗽、喘鳴及呼吸困難,80%以上過(guò)敏性哮喘發(fā)病起始于兒童時(shí)期,因此早期診斷和治療對(duì)于降低過(guò)敏性哮喘發(fā)病率十分重要[1-2]。血清類黏蛋白1樣蛋白3(ORMDL3)基因是ORMDL基因家族成員之一,是一種能引起兒童哮喘的易感基因[3-4],其作用機(jī)制是激活T淋巴細(xì)胞、負(fù)性調(diào)節(jié)神經(jīng)鞘脂類產(chǎn)生、增加未折疊蛋白反應(yīng)。該基因在人體多處組織中普遍表達(dá),其中肝臟和外周血淋巴細(xì)胞中表達(dá)最高[5]。輔助性T細(xì)胞(Th)與哮喘炎性反應(yīng)和免疫應(yīng)答有密切聯(lián)系,且在兒童哮喘中發(fā)揮重要作用[6]。許多研究表明,輔助性T細(xì)胞亞群1/輔助性T細(xì)胞亞群2(Th1/Th2)狀態(tài)失衡與哮喘發(fā)病密切相關(guān),Th2參與的嗜酸粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)在哮喘發(fā)生的過(guò)程中有重要作用[7-8]。ORMDL、Th1/Th2與哮喘發(fā)病都有一定聯(lián)系,但目前關(guān)于兩者在過(guò)敏性哮喘患兒外周血中表達(dá)水平相關(guān)性的研究較少。因此,本研究通過(guò)檢測(cè)過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3、Th1/Th2水平,探討過(guò)敏性哮喘患兒外周血ORMDL3與T細(xì)胞亞群Th1/Th2失衡的關(guān)系,為過(guò)敏性哮喘的預(yù)防和評(píng)估提供重要依據(jù),報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選取2018年3月—2019年10月海南省儋州市人民醫(yī)院兒科治療過(guò)敏性哮喘患兒83例(哮喘組)為研究對(duì)象,其中男44例,女39例;年齡3~13(7.38±4.59)歲;就診時(shí)合并癥,鼻炎16例,蕁麻疹5例;病情程度,無(wú)癥狀8例,輕癥12例,中癥36例,重癥27例;既往過(guò)敏史:鼻炎16例,蕁麻疹5例,藥物過(guò)敏2例;家族遺傳史18例。選取同期于醫(yī)院健康體檢兒童76例作為對(duì)照組,其中男32例,女44例;年齡3~12(6.79±4.96)歲。2組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),符合倫理學(xué)要求,受試對(duì)象或其家長(zhǎng)知情同意并簽署知情同意書。

        1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合過(guò)敏性哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[9];②年齡3~13歲;③入組前1周未使用抗白三烯、抗組胺類藥物;④入組前4周無(wú)全身糖皮質(zhì)激素應(yīng)用。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①患其他呼吸系統(tǒng)疾病;②有糖皮質(zhì)激素和β2受體激動(dòng)劑過(guò)敏史;③有其他心肺疾病及精神異常;④入組前4周患呼吸道感染。

        1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

        1.3.1 樣品采集及保存:于就診或健康體檢當(dāng)天清晨抽取2組兒童空腹外周靜脈血6 ml,其中4 ml 用于ORMDL3、Th1/Th2指標(biāo)檢測(cè);2 ml離心收集血清,置于-80℃保存,用于IgE檢測(cè)。

        1.3.2 外周血ORMDL3 mRNA水平檢測(cè): 以RNA提取試劑盒(北京天根生化有限公司)提取外周血總RNA,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(寶生物工程大連有限公司)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA;采用qRT-PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司,型號(hào)Bio-Rad iQ5)和miScript SYBR Green qPCR Kit試劑盒(德國(guó)QIAGEN公司)對(duì)ORMDL3進(jìn)行擴(kuò)增;qRT-PCR反應(yīng)體系共10 μl:miScript SYBR Green Mix 5 μl,cDNA(50 ng/μl)1 μl,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl,ddH2O 3.0 μl。反應(yīng)條件:95℃、90 s,95℃、30 s,63℃、30 s,40個(gè)循環(huán);72℃、10 min。ORMDL3及內(nèi)參GAPDH引物由上海生工生物公司合成,序列見表1。采用2-△△CT法對(duì)外周血ORMDL3 mRNA表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。

        表1 qRT-PCR引物序列

        1.3.3 外周血Th1/Th2水平檢測(cè): RPMI 1640(不含小牛血清FBS)培養(yǎng)基等體積稀釋外周血100 μl,加入刺激劑10 μl,37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4~6 h。混勻,加入CD8-PC7和CD3-PC5各10 μl,室溫下避光孵育15 min;加入 100 μl Fix&Perm破膜劑(美國(guó)Beckman公司)中的Reagent 1(即固定液),室溫避光孵育15 min;加入PBS 3 ml,離心5 min,棄上清。每管中加入 100 μl Fix&Perm中的Reagent 2(即破膜和溶血液),各管加入IFN-γ-FITC單克隆抗體和IL-4-PE單克隆抗體(美國(guó)Beckman公司生產(chǎn))10 μl,室溫下避光孵育15 min。每管中加入PBS 3 ml, 離心棄除上清; PBS 0.5 ml重懸細(xì)胞,流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司,型號(hào)FACSCalibur)檢測(cè)。每個(gè)樣本每次檢測(cè)1×104個(gè)細(xì)胞。

        1.3.4 肺功能指標(biāo)、EOS、血清IgE水平檢測(cè):利用肺功能儀(日本美能公司,型號(hào)AS-507)檢測(cè)患兒安靜睡眠時(shí)達(dá)峰時(shí)間比(TPTEF/TE)、達(dá)峰容積比(VPEF/VE);一氧化氮測(cè)定儀(廣州瑞普醫(yī)療科技有限公司,型號(hào)6900)檢測(cè)呼出氣一氧化氮(FeNO);血細(xì)胞分析儀(濟(jì)南童鑫生物科技公司,型號(hào)HB7501)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)并計(jì)算EOS百分比;ELISA試劑盒(上海冠導(dǎo)生物工程有限公司)測(cè)定血清IgE水平。

        2 結(jié) 果

        2.1 2組外周血中ORMDL3 mRNA、Th1、Th2表達(dá)水平比較 哮喘組外周血中ORMDL3 mRNA、Th2表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.01),Th1、Th1/Th2水平顯著低于對(duì)照組(P<0.01),見表2。

        2.2 2組肺功能指標(biāo)、EOS、血清IgE水平比較 哮喘組FeNO、EOS、血清IgE水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),TPTEF/TE、VPEF/VE顯著低于對(duì)照組(P<0.05),見表3。

        表2 2組外周血中ORMDL3、Th1、Th2表達(dá)水平比較

        2.3 外周血ORMDL3 mRNA與Th1/Th2水平相關(guān)性分析 Pearson分析結(jié)果顯示,過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3與Th1/Th2水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.587,P<0.05),見圖1。

        圖1 過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3 mRNA 與Th1/Th2水平相關(guān)性

        2.4 ORMDL3 mRNA、Th1/Th2與肺功能指標(biāo)、EOS、血清IgE水平相關(guān)性分析 Pearson法分析結(jié)果顯示,過(guò)敏性哮喘患兒ORMDL3與TPTEF/TE、VPEF/VE呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),與FeNO、EOS、血清IgE水平呈正相關(guān)(P<0.01)。Th1/Th2與TPTEF/TE、VPEF/VE呈正相關(guān)(P<0.01),與FeNO、EOS、血清IgE水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),見表4。

        表3 2組肺功能指標(biāo)、EOS、血清IgE水平比較

        表4 過(guò)敏性哮喘患兒ORMDL3、Th1/Th2與肺功能指標(biāo)、 EOS、血清IgE水平相關(guān)性分析

        2.5 影響過(guò)敏性哮喘的多因素Logistic回歸分析 將是否發(fā)生過(guò)敏性哮喘作為因變量,以O(shè)RMDL3、Th1/Th2、TPTEF/TE、VPEF/VE、FeNO、EOS、血清IgE為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示ORMDL3、血清IgE是影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)因素,Th1/Th2是影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生的保護(hù)因素,見表5。

        表5 影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生的多因素分析

        3 討 論

        過(guò)敏性哮喘多發(fā)于兒童時(shí)期,是哮喘發(fā)病初期,其發(fā)病特征主要為反復(fù)喘息、胸悶、咳嗽、氣促[10-12]。過(guò)敏性哮喘發(fā)病的外部原因主要有接觸變應(yīng)原、物理化學(xué)誘因、冷空氣等,而內(nèi)部原因主要是機(jī)體免疫耐受功能受損,致使免疫細(xì)胞對(duì)自身組織結(jié)構(gòu)破壞,而T淋巴細(xì)胞在此過(guò)程中發(fā)揮十分重要的作用[13-15]。

        ORMDL3是首個(gè)被鑒定出的哮喘易感基因,序列高度保守,編碼一種跨膜蛋白[16]。 許多過(guò)敏原能導(dǎo)致ORMDL3基因表達(dá)上調(diào),最終導(dǎo)致哮喘發(fā)生[17]。且有研究表明,某些哮喘治療藥物可通過(guò)下調(diào)ORMDL3基因表達(dá)達(dá)到治療哮喘的目的[18]。Kothari等[19]研究17q21號(hào)染色體上與哮喘高度相關(guān)的一個(gè)基因發(fā)現(xiàn),ORMDL3表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致氣道平滑肌增殖和收縮能力增強(qiáng),從而提高哮喘患者的氣道高反應(yīng)性,使哮喘加重。本研究中哮喘組外周血中ORMDL3表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組,提示過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3表達(dá)水平高于健康兒童,ORMDL3可能通過(guò)在過(guò)敏性哮喘患兒外周血中高表達(dá)來(lái)作用某些哮喘相關(guān)基因位點(diǎn),進(jìn)一步參與過(guò)敏性哮喘發(fā)生發(fā)展,本研究與Kothari等[19]研究結(jié)果基本一致。

        Th在氣道慢性變應(yīng)性炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,而Th1和Th2分泌細(xì)胞因子,彼此相互抑制,Th1/Th2狀態(tài)失衡在哮喘發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[20]。Th2分泌的細(xì)胞因子可促進(jìn)血清IgE合成、誘導(dǎo)EOS前體分化、激活和趨化EOS。Hwang等[21]研究表明,污染物鄰苯二甲酸二異壬酯在體外抑制Th1極化,增強(qiáng)Nave CD4+T細(xì)胞Th2的極化,且鄰苯二甲酸二異壬酯通過(guò)產(chǎn)生IL-4、IL-5、血清IgE、IgG1,以及減少IFN-γ、IgG2A誘導(dǎo)過(guò)敏性哮喘,增加哮喘患者Caspase-1和Caspase-3的表達(dá),從而證明Th1/Th2的失衡能增加過(guò)敏性哮喘的發(fā)生幾率。本研究中哮喘患兒外周血中Th1、Th2、Th1/Th2水平與健康兒童比較有顯著差異。提示過(guò)敏性哮喘患兒外周血中Th1/Th2處于失衡狀態(tài),而Th1/Th2細(xì)胞因子活化平衡表現(xiàn)為免疫保護(hù),此時(shí)的失衡可能引起機(jī)體免疫紊亂并誘發(fā)免疫介導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘。進(jìn)一步提示哮喘的發(fā)作可能與Th1亞群功能低下,Th2亞群功能亢進(jìn)有關(guān)。本研究與張如幸等[22]研究結(jié)果基本一致。

        許多研究表明,哮喘患者ORMDL3、Th1/Th2與EOS水平都具有一定的相關(guān)性,兩者通過(guò)相互作用影響過(guò)敏性哮喘患者體內(nèi)EOS水平,最終影響過(guò)敏性哮喘的嚴(yán)重程度[23-24]。本研究結(jié)果中哮喘患兒FeNO、EOS、血清IgE、TPTEF/TE、VPEF/VE等肺部指標(biāo)水平均與健康兒童有較大差異。提示過(guò)敏性哮喘患兒呼吸道免疫炎性反應(yīng)水平相對(duì)升高,氣道內(nèi)大量附著黏性液體,患兒小氣道阻力上升,肺功能可能受損,導(dǎo)致TPTEF/TE、VPEF/VE等指標(biāo)水平明顯下降,與田軍等[25]研究結(jié)果基本一致。過(guò)敏性哮喘患兒ORMDL3、Th1/Th2與TPTEF/TE、VPEF/VE、FeNO、EOS、血清IgE等指標(biāo)水平均呈現(xiàn)一定的相關(guān)性,提示ORMDL3、Th1/Th2可能通過(guò)相互作用影響過(guò)敏性哮喘患兒機(jī)體內(nèi)炎性反應(yīng)水平,導(dǎo)致患兒氣道炎性反應(yīng)加重,使TPTEF/TE、VPEF/VE等指標(biāo)水平明顯異常,進(jìn)一步影響過(guò)敏性哮喘的嚴(yán)重程度。Logistic回歸分析結(jié)果顯示,ORMDL3、血清IgE是影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)因素,Th1/Th2是影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生的保護(hù)因素。提示ORMDL3、血清IgE、Th1/Th2水平高低影響過(guò)敏性哮喘發(fā)生,且隨ORMDL3、血清IgE水平升高及Th1/Th2水平降低,過(guò)敏性哮喘發(fā)生幾率升高。

        綜上所述,過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3與T細(xì)胞亞群Th1/Th2水平呈負(fù)相關(guān),ORMDL3在外周血中的表達(dá)水平對(duì)Th1/Th2狀態(tài)失衡有影響。臨床上應(yīng)密切關(guān)注過(guò)敏性哮喘患兒外周血中ORMDL3 mRNA、Th1/Th2的水平,及時(shí)做出診斷及預(yù)防。但ORMDL3基因的多態(tài)性與哮喘發(fā)生之間的關(guān)系仍需進(jìn)一步研究。

        猜你喜歡
        亞群過(guò)敏性外周血
        TB-IGRA、T淋巴細(xì)胞亞群與結(jié)核免疫的研究進(jìn)展
        甲狀腺切除術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群的變化與術(shù)后感染的相關(guān)性
        過(guò)敏性鼻炎別再吃冰了
        不可小覷過(guò)敏性哮喘
        說(shuō)說(shuō)過(guò)敏性紫癜
        謹(jǐn)防過(guò)敏性休克
        外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的價(jià)值
        白血病外周血體外診斷技術(shù)及產(chǎn)品
        結(jié)腸炎小鼠外周血和結(jié)腸上皮組織中Gal-9的表達(dá)
        慢性蕁麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表達(dá)及臨床意義
        国产激情在观看| 国产三级一区二区三区在线观看| 在线观看免费人成视频国产| 永久免费中文字幕av| 久久想要爱蜜臀av一区二区三区| 成人性生交大片免费5| 一区二区三区在线观看视频精品| 日韩美腿丝袜三区四区| 欧洲乱码伦视频免费| 人妻丰满熟av无码区hd| 亚洲国产成人精品无码区在线秒播| 视频在线观看免费一区二区| 国产一区二区三区在线蜜桃| 亚洲第一网站免费视频| 鲁丝片一区二区三区免费| 国产尤物av尤物在线观看| 久久99精品久久久久久秒播 | 亚洲精品一区二区在线播放| 性一交一乱一乱一视频亚洲熟妇| 国产精品自拍视频免费看| 久久精品色福利熟妇丰满人妻91| 精品久久有码中文字幕| 一区二区三区内射美女毛片| 欧美成人猛片aaaaaaa| 台湾无码av一区二区三区| 国产亚洲一区二区手机在线观看| 精品久久久久久无码不卡 | 8090成人午夜精品无码| 婷婷开心五月亚洲综合| 国产免费一区二区在线视频| 人妻 偷拍 无码 中文字幕| 日日碰狠狠躁久久躁9| 女的把腿张开男的猛戳出浆| 人妻精品久久中文字幕| 在线亚洲妇色中文色综合| 国产白色视频在线观看| 亚欧中文字幕久久精品无码| 香蕉久久人人97超碰caoproen| 亚洲av中文无码乱人伦在线咪咕| 少妇被猛男粗大的猛进出| 免费无码又爽又刺激高潮的视频网站 |