張兵 董娟麗 楊江濱

【摘 ?要】在現(xiàn)代科技領(lǐng)域發(fā)展中，促進(jìn)了我國生物制品水平的提升，而胰酶作為生物制品生產(chǎn)中的重要原料，對生物制品的生產(chǎn)質(zhì)量起到?jīng)Q定性影響。對于細(xì)胞培養(yǎng)通常使用胰酶消化細(xì)胞，但是在胰酶制備過程中可能存在病毒污染的風(fēng)險，給生物制品生產(chǎn)帶來一定的風(fēng)險，為此，積極探索胰酶質(zhì)量控制技術(shù)具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】生物制品;胰酶質(zhì)量;控制措施

引言：

胰酶作為絲氨酸蛋白酶群體中的重要成員，其屬于肽鏈內(nèi)切酶種類，在細(xì)胞培養(yǎng)中，胰酶具有分解細(xì)胞糖蛋白和黏蛋白的作用，可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離，并且能夠和培養(yǎng)液充分接觸，更有助于培養(yǎng)。對于細(xì)胞之間的蛋白質(zhì)來說，只有是由于細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，一般分布于細(xì)胞和細(xì)胞之間，同時也存在與細(xì)胞與培養(yǎng)皿表面，從而構(gòu)建細(xì)胞骨架，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞黏附效果。胰蛋白酶的活性通?？梢酝ㄟ^酪蛋白的降解能力在表現(xiàn)，一般分為1：125和1：250兩類，意思是一份胰酶可以分解并分裂125份酪蛋白以及250份酪蛋白。

胰酶對細(xì)胞的分解能力與其濃度、溫度以及時間都有著直接關(guān)聯(lián)，而胰酶在分解不同細(xì)胞時，其分解能力也存在一定的差異，一般采用胰酶濃度為0.25%進(jìn)行分解。胰蛋白酶抑制因子包括培養(yǎng)基內(nèi)的鈣鎂離子和牛血清蛋白。這些因子能夠很好的抑制胰酶活性，減輕胰酶附著因子的功效。所以，可以在胰酶溶液中加入EDTA來提高胰酶活性。

1 胰酶對外源因子的污染風(fēng)險

對于胰酶來說，通常是利用動物胰臟滲出液制備而來的，常見的制備原料為豬胰臟和牛胰臟等等。但是在使用牛胰臟進(jìn)行胰酶制備時，還要重點(diǎn)考慮牛病毒的污染問題。所以，在進(jìn)行生物制品中，通常我們都會選擇豬胰臟來制備胰酶。但是據(jù)調(diào)查顯示，現(xiàn)如今的豬攜帶病毒數(shù)量也多達(dá)80余種，可以與人類同宿的病種也超過60余種，此外，還有一些病毒來源是以豬為中間體進(jìn)行傳播，從而也會對人造成感染。目前，我國檢測技術(shù)水平不斷提升，豬通過外源因子的攜帶也逐漸被檢測出來。在利用豬胰臟進(jìn)行胰酶制備時，雖然采用科學(xué)的工藝進(jìn)行處理，但是由于可攜帶的病毒種類眾多，因此在制備胰酶時仍然會攜帶一些外源因子，對生物制品安全帶來一定的污染風(fēng)險。

2 生物制品生產(chǎn)中胰酶對質(zhì)量的影響

對于生物制品在生產(chǎn)過程中，當(dāng)有外源因子出現(xiàn)時，就會對生物制品產(chǎn)生嚴(yán)重的變質(zhì)影響，同時也很難應(yīng)用普通工藝進(jìn)行消除。尤其是對于未經(jīng)滅活處理和純化的減毒活疫苗來說，極易引然外源因子的攜帶，從而對生物制品造成嚴(yán)重的影響。此外，由于現(xiàn)階段的檢測技術(shù)水平有限，對于生產(chǎn)工藝中間的產(chǎn)品以及產(chǎn)品外源因子檢測仍舊存在一定的困難。所以，胰酶的質(zhì)量對生物制品的安全產(chǎn)生極大的影響。現(xiàn)階段，由于生產(chǎn)過程中使用胰酶而導(dǎo)致生物制品生產(chǎn)中引發(fā)外源因子污染的現(xiàn)象比比皆是，究其根本是由于病毒序列污染對胰酶制備的病毒疫苗造成影響。

3 生物制品生產(chǎn)中胰酶質(zhì)量控制措施

3.1提高胰酶病毒外源因子檢查力度

為了做好胰酶質(zhì)量的有效控制，首先要加強(qiáng)外源因子病毒和內(nèi)源性病毒的質(zhì)量把控。隨著WHO與FDA等組織對外源因子檢測技術(shù)的不斷優(yōu)化，提高了對胰酶特性外源因子污染的檢查種類，同時也有效的排除了潛在的外源因子污染風(fēng)險。對于病毒外源因子的檢查主要包括特性外源因子檢查以及非特異性外源因子檢查。對于非特異性外源因子污染檢查來說，一般采用的方法普遍對具有某種特性病毒的篩查，而特異性外源因子污染檢查主要是對特定的病毒污染進(jìn)行篩查。相比于非特異性外源因子污染檢查來說，特異性外源因子具有更高的靈活度與準(zhǔn)確度。

據(jù)調(diào)查分析，我國在胰酶特異性外源因子污染檢測時與其他發(fā)達(dá)國家仍然存在著一定的差距，而國外許多國家都采用多種特異性外源因子污染檢查手段，尤其是對于高污染風(fēng)險的情況下，能夠?qū)崿F(xiàn)對人體具有危害的病毒準(zhǔn)確檢查，有效降低胰酶外源因子污染的風(fēng)險，同時提高胰酶使用的可靠性，保障生物制品生產(chǎn)安全。所以，我國仍然需要不斷探索更加完善的外源因子病毒檢測技術(shù)，全面豐富特異性病毒檢測種類，從而與國際檢測標(biāo)準(zhǔn)持平。

3.2構(gòu)建外源因子檢測方法

為了更好地控制胰酶外源因子污染，還可以構(gòu)建良好的外源因子檢測方法，當(dāng)前流行的檢測方法包括免疫熒光抗體法與聚合酶鏈反應(yīng)法，這兩種方法都可以實(shí)現(xiàn)特性外源因子病毒污染檢測。通過免疫熒光抗體法能夠?qū)⒐┰嚻吩诿舾邢到y(tǒng)內(nèi)培養(yǎng)，同時加入熒光標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)目贵w檢測。利用免疫熒光抗體法可以直接檢測出供試品的污染外源因子。聚合酶鏈反應(yīng)法雖然具有較高的檢測靈敏度，但是如果檢測結(jié)果呈現(xiàn)陽性，那么仍然需要對檢測信號進(jìn)行確認(rèn)。

3.3構(gòu)建完善的病毒滅活工藝

盡管我們對胰酶外源因子污染檢測不斷優(yōu)化，但是由于技術(shù)水平存在一定的局限性，導(dǎo)致胰酶中仍然存在嚴(yán)重的外源因子污染風(fēng)險。在進(jìn)行胰酶的制備過程中，必須結(jié)合相關(guān)規(guī)定，通過先進(jìn)的病毒滅活工藝，有效的殺死滅活或者去除已知外源因子，有效防止胰酶外源因子污染。現(xiàn)階段，對于胰酶的制備工藝廠常常采用加熱法或者γ射線進(jìn)行病毒滅活，但是在病毒檢測中也會影響胰酶活性。所以，在保障病毒滅活的同時，也要最大程度地減少對胰酶活性的影響，提高病毒滅活工藝。

4 結(jié)束語

綜上所述，胰酶質(zhì)量對生物制品生產(chǎn)具有重要的影響，作為動物來源的胰蛋白酶，僅憑終產(chǎn)品的檢定遠(yuǎn)不能達(dá)到對胰酶的質(zhì)量控制。所以，必須制定良好的胰酶質(zhì)量控制手段，積極引入先進(jìn)的胰酶污染檢測技術(shù)，從而有效地控制胰酶污染外源因子病毒檢測效果，保障生物制品生產(chǎn)質(zhì)量。

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（作者單位：石藥集團(tuán)巨石生物制藥有限公司）