李忠浩，秦睿玲，馬旭平

(河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北 張家口 075131)

隨著飼料生物技術(shù)的發(fā)展以及抗生素殘留的危害，人們對(duì)替代抗生素的飼料添加劑日趨重視。有報(bào)道顯示，動(dòng)物飼糧中添加一定量的功能性寡糖，能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)化率和調(diào)整動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)等重要作用[1-2]。寡糖可以未降解的形式直接進(jìn)入動(dòng)物體的后段腸道，選擇性地被乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益微生物利用，從而影響動(dòng)物腸道內(nèi)微生物區(qū)系[3-4]。寡糖不僅可促進(jìn)腸道有益菌增殖，同時(shí)還可以與腸道病原菌結(jié)合，起到抑制大腸桿菌等腸道有害菌的作用[5]。

本文對(duì)納入的2002-2016年間公開(kāi)發(fā)表的，關(guān)于功能性寡糖對(duì)40-43日齡肉雞盲腸大腸桿菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌影響的相關(guān)研究文獻(xiàn)，采用Meta分析的方法綜合評(píng)價(jià)了在肉雞玉米-豆粕型飼糧中添加功能性寡糖對(duì)其盲腸微生物影響，為功能性寡糖作用效果的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

采用計(jì)算機(jī)檢索CNKI，萬(wàn)方，維普等數(shù)據(jù)庫(kù)。檢索中文關(guān)鍵詞有寡糖、肉雞、腸道菌群等。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)均為隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究；研究對(duì)象為40～43日齡AA肉雞；研究有試驗(yàn)實(shí)施及明確樣本含量；結(jié)局指標(biāo)為盲腸微生物大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

文獻(xiàn)綜述或會(huì)議論文；數(shù)據(jù)不全或無(wú)法提取數(shù)據(jù)文獻(xiàn)；試驗(yàn)結(jié)果無(wú)平均值或標(biāo)準(zhǔn)差；無(wú)對(duì)照組的試驗(yàn)；重復(fù)發(fā)表文獻(xiàn)。

1.4 分析方法

采用Stata 15.0軟件進(jìn)行Meta統(tǒng)計(jì)分析。首先對(duì)各結(jié)局指標(biāo)進(jìn)行Q檢驗(yàn)，如果P>0.05，I2≤50%說(shuō)明研究間異質(zhì)性較小，采用固定效應(yīng)模型分析；若P≤0.05，I2≥50%說(shuō)明結(jié)局指標(biāo)的異質(zhì)性較大，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。對(duì)于異質(zhì)性較大的結(jié)局指標(biāo)采用剪補(bǔ)法進(jìn)行敏感性分析，同時(shí)對(duì)納入的研究進(jìn)行發(fā)表偏倚的檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)

檢索數(shù)據(jù)庫(kù)共得到35篇相關(guān)文獻(xiàn)。按上述納入及排除文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)，最終將篩選的12篇文獻(xiàn)[5-16]24項(xiàng)RCT研究納入本次Meta分析。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

2.2 系統(tǒng)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2.1 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量的影響

對(duì)20個(gè)的肉雞盲腸微生物大腸桿菌數(shù)量研究進(jìn)行Q檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Q檢驗(yàn)為2 637.08，P<0.05，I2=99.3%，有較大異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。其中6個(gè)研究顯示大腸桿菌數(shù)量高于對(duì)照組，其余14個(gè)研究大腸桿菌數(shù)量低于對(duì)照組，合并效應(yīng)量WMD=-1.398，95% CI為(-2.075，-0.721)，P=0.000，差異極顯著。結(jié)果顯示日糧中添加功能性寡糖使肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量顯著降低了1.398×108CFU/g，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 日糧中添加功能性寡糖對(duì)大腸桿菌數(shù)量影響的森林圖

2.2.2 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量的影響

對(duì)21個(gè)肉雞盲腸微生物乳酸桿菌數(shù)量研究進(jìn)行Q檢驗(yàn)，Q統(tǒng)計(jì)量為516.05，P<0.05，I2=96.1%，研究間異質(zhì)性較大，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。其中7個(gè)研究顯示乳酸桿菌數(shù)量低于對(duì)照組，其余14個(gè)研究乳酸桿菌數(shù)量高于對(duì)照組，合并效應(yīng)量WMD=0.292，95% CI為(-0.010，0.594)，P=0.058，說(shuō)明日糧中添加功能性寡糖雖然使肉雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量提高了0.292×108CFU/g，但未達(dá)到顯著水平(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 日糧中添加功能性寡糖對(duì)乳酸桿菌數(shù)量影響的森林圖

2.2.3 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸雙歧桿菌數(shù)量的影響

對(duì)21個(gè)肉雞盲腸微生物雙歧桿菌數(shù)量研究進(jìn)行Q檢驗(yàn)，Q統(tǒng)計(jì)量為149.89，P<0.05，I2=86.7%，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。其中4個(gè)研究顯示雙歧桿菌數(shù)量低于對(duì)照組，其余17個(gè)研究雙歧桿菌數(shù)量高于對(duì)照組，合并效應(yīng)量WMD=0.283，95% CI為(0.069，0.496)，P=0.010，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明日糧中添加功能性寡糖使肉雞盲腸雙歧桿菌數(shù)量提高了0.283×108CFU/g，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 日糧中添加功能性寡糖對(duì)雙歧桿菌數(shù)量影響的森林圖

2.3 敏感性分析

運(yùn)用剪補(bǔ)法對(duì)盲腸微生物進(jìn)行敏感性分析，比較剪補(bǔ)前后合并效應(yīng)量WMD、95%CI及其相應(yīng)P值是否發(fā)生明顯變化，以判斷結(jié)果的穩(wěn)健性。

2.3.1 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量影響的敏感性分析

由圖5可見(jiàn)，運(yùn)用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算剪補(bǔ)前后大腸桿菌數(shù)量合并效應(yīng)量，剪補(bǔ)前的WMD和95%CI為[-1.398(-2.075，-0.721)，P=0.000]，剪補(bǔ)后的WSD和95%CI為[-1.582(-2.214，-0.949)，P=0.000]，發(fā)現(xiàn)結(jié)論未發(fā)生明顯變化，表明日糧中添加功能性寡糖顯著降低大腸桿菌數(shù)量的結(jié)論較為穩(wěn)健。

圖5 日糧中添加功能性寡糖對(duì)大腸桿菌數(shù)量影響的敏感性分析

2.3.2 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量影響的敏感性分析

由圖6可見(jiàn)，運(yùn)用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算剪補(bǔ)前后乳酸桿菌數(shù)量合并效應(yīng)量,剪補(bǔ)前的WMD=0.292，95%CI為(-0.010，0.594)，P=0.058；剪補(bǔ)后WMD=-0.458，95%CI為(-0.767，-0.148)，P=0.004，結(jié)論發(fā)生了明顯變化，表明日糧中添加功能性寡糖能提高肉雞盲腸微生物乳酸桿菌數(shù)量，但未達(dá)到顯著效果的結(jié)論不穩(wěn)健。

圖6 日糧中添加功能性寡糖對(duì)乳酸桿菌數(shù)量影響結(jié)論的敏感性分析

2.3.3 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸雙歧桿菌數(shù)量影響的敏感性分析

由圖7可見(jiàn)，運(yùn)用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算剪補(bǔ)前后雙歧桿菌數(shù)量合并效應(yīng)量，剪補(bǔ)前的WMD=0.283，95%CI為(0.069，0.496)，P=0.010；剪補(bǔ)后WMD=0.125，95%CI為(-0.095，0.345)，P=0.266，結(jié)論發(fā)生了明顯變化，說(shuō)明日糧中添加功能性寡糖能顯著提高肉雞盲腸微生物雙歧桿菌數(shù)量的結(jié)論不穩(wěn)健。

圖7 日糧中添加功能性寡糖對(duì)乳酸桿菌數(shù)量影響結(jié)論的敏感性分析

2.4 發(fā)表偏倚檢驗(yàn)

運(yùn)用Begg秩相關(guān)法和Egger回歸法對(duì)納入的研究進(jìn)行發(fā)表偏倚的檢驗(yàn)。分析后發(fā)現(xiàn)，對(duì)大腸桿菌數(shù)量的Begg秩相關(guān)法檢驗(yàn)結(jié)果P=0.399，顯示不存在明顯的發(fā)表偏倚P>0.05，Egger回歸法檢驗(yàn)結(jié)果顯示，回歸方程截距、截距95%CI及P值分別為[-2.998(-11.102，5.106)，P=0.447]，同樣表明不存在明顯的發(fā)表偏倚。

對(duì)乳酸桿菌數(shù)量的Begg秩相關(guān)法檢驗(yàn)結(jié)果顯示，不存在明顯的發(fā)表偏倚(P=0.415)。Egger回歸法檢驗(yàn)結(jié)果表明存在一定的發(fā)表偏倚，其回歸方程截距、截距95%CI及P值分別為[4.094(1.819，6.368)，P=0.001]，與Begg秩相關(guān)法檢驗(yàn)結(jié)果不一致。

對(duì)雙歧桿菌數(shù)量的Begg秩相關(guān)法檢驗(yàn)結(jié)果顯示不存在明顯的發(fā)表偏倚(P=0.174)。Egger回歸法檢驗(yàn)結(jié)果同樣表明不存在明顯的發(fā)表偏倚，回歸方程截距、截距95%CI及P值分別為[1.213(-1.216，3.642)，P=0.309]。

3 討論

3.1 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)量的影響

動(dòng)物腸道內(nèi)菌群平衡對(duì)于維持宿主消化功能，促進(jìn)和提高動(dòng)物體生產(chǎn)性能，抑制病原菌在腸道內(nèi)定植具有十分重要的作用[17]。動(dòng)物腸道內(nèi)的大腸桿菌等病原菌細(xì)胞表面具有外源凝集素，它能夠識(shí)別動(dòng)物腸壁細(xì)胞上的受體并與之結(jié)合，在腸壁上繁殖從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)寡糖具有與腸壁細(xì)胞受體相似的結(jié)構(gòu)，因此病原菌可與寡糖結(jié)合，從而減少了與腸壁細(xì)胞結(jié)合的機(jī)會(huì)；另外寡糖被腸道內(nèi)有益菌利用后生成的α-半乳糖苷酶將寡糖分解為乙酸和乳酸，從而降低腸道pH值，導(dǎo)致大腸桿菌等有害菌不能在腸道內(nèi)定植，產(chǎn)生抑菌的作用，能夠顯著降低雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量[18-20]。本研究結(jié)果顯示，日糧中添加功能性寡糖能顯著降低肉雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量，并且結(jié)論較為穩(wěn)健。

3.2 功能性寡糖對(duì)肉雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量的影響

寡糖可作為乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此飼料中添加寡糖能明顯的促進(jìn)動(dòng)物體腸道內(nèi)有益菌的生長(zhǎng)[21]，雙歧桿菌和乳酸桿菌等有益菌能與腸道上皮細(xì)胞保持和諧共生的關(guān)系，它與腸壁緊密結(jié)合從而形成了一道生物膜保護(hù)屏障以阻止有害菌的入侵。另外有益菌的代謝產(chǎn)物能夠刺激腸道蠕動(dòng)，使得食糜在腸道中停留時(shí)間較短，這樣不利菌對(duì)機(jī)體的損傷也會(huì)大大降低。雙歧桿菌還能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，提高機(jī)體的抗體水平，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。目前較多報(bào)道稱(chēng)飼料中添加寡糖提高了腸道有益菌的數(shù)量，本次Meta分析結(jié)果顯示，日糧中添加功能性寡糖可以提高肉雞盲腸乳酸桿菌的數(shù)量，但結(jié)果差異不顯著，敏感性分析發(fā)現(xiàn)結(jié)論不夠穩(wěn)健，存在一定的發(fā)表偏倚。日糧中添加功能性寡糖能夠顯著的提高肉雞盲腸雙歧桿菌的數(shù)量，但是結(jié)論不夠穩(wěn)健，這與之前報(bào)道的研究結(jié)果存在較大差異。因此分析結(jié)果表明，功能性寡糖對(duì)于提高肉雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量的結(jié)論，尚需在生產(chǎn)中通過(guò)后續(xù)研究繼續(xù)觀察其效果。

3.3 Meta分析的局限性

由于Meta分析的研究是建立在已發(fā)表的文獻(xiàn)基礎(chǔ)之上的，因此結(jié)果的可靠程度取決于納入文獻(xiàn)的質(zhì)量，然而本次納入的12篇文獻(xiàn)24項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照研究均來(lái)自于中文，文獻(xiàn)資料偏少同時(shí)缺乏外文文獻(xiàn)；文獻(xiàn)中涉及的寡糖類(lèi)型包括異麥芽糖、復(fù)合寡糖、殼寡糖、甘露寡糖和果膠寡糖螯合鋅等，文獻(xiàn)中均提到了最適寡糖濃度以及作用時(shí)間，然而個(gè)文獻(xiàn)中寡糖提取的含量不盡相同，因此無(wú)法提取到統(tǒng)一的寡糖濃度及作用時(shí)間進(jìn)行深入的Meta分析中；另外一些相關(guān)研究的設(shè)計(jì)也缺乏一致的飼養(yǎng)環(huán)境及飼糧標(biāo)準(zhǔn)，而且在部分研究中試驗(yàn)動(dòng)物樣本含量偏小，同時(shí)缺乏既定的質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)從而無(wú)法對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)，這都會(huì)影響評(píng)價(jià)結(jié)果；本次Meta分析部分結(jié)局指標(biāo)的異質(zhì)性較大，可能也與一些陰性試驗(yàn)結(jié)果發(fā)表受限有關(guān)。因此提示本次系統(tǒng)評(píng)價(jià)尚存在一定的局限性，仍需要規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)后采用高質(zhì)量、大樣本的RCT研究結(jié)果以獲得更為清晰準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)結(jié)論。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)24項(xiàng)對(duì)照試驗(yàn)的Meta分析發(fā)現(xiàn)，日糧中添加功能性寡糖使肉雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量顯著降低了1.398 ×108CFU/g，并且結(jié)論穩(wěn)定；而日糧中添加功能性寡糖雖然使肉雞盲腸乳酸桿菌的數(shù)量提高了0.292 ×108CFU/g、雙歧桿菌的數(shù)量提高了0.283 ×108CFU/g，但是其結(jié)論不穩(wěn)定，不能得出日糧中添加功能性寡糖能使42日齡肉雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量提高的結(jié)論，仍需進(jìn)一步研究。