呂鳳霞，韓露，郭盛洋，李靈娟，劉聯(lián)盟，卜仕金

(1. 河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司，河南 鄭州 451162；2. 河南省畜牧總站，河南 鄭州 451162；3. 寬甸滿族自治縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 丹東 118200；4. 揚(yáng)州大學(xué)，江蘇 揚(yáng)州 225009；5. 江蘇高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚(yáng)州 225009)

雞球蟲病是雞常見的急性流行性寄生蟲病，在田間廣泛存在，嚴(yán)重危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[1-2]?；前仿冗拎衡c是一種抗球蟲藥，在動(dòng)物體內(nèi)吸收快、分布廣、維持時(shí)間長(zhǎng)，且不影響宿主對(duì)球蟲的免疫力，被廣泛應(yīng)用于雞球蟲病的治療。但隨著耐藥性的增加，其臨床效果逐漸不佳[3-4]。為解決球蟲病市場(chǎng)需求問題，開發(fā)了新的抗球蟲藥組方，在磺胺氯吡嗪鈉基礎(chǔ)之上增加增效劑，提升治療效果，以適應(yīng)當(dāng)下養(yǎng)殖情況。增效劑和抗寄生蟲藥聯(lián)合應(yīng)用，可有效減少藥物用量，降低用藥成本，具有廣泛的市場(chǎng)前景。本試驗(yàn)通過提供有關(guān)磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉在雞的臨床血液學(xué)、血液生化和組織病理學(xué)方面的數(shù)據(jù)，以確定磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉在靶動(dòng)物雞的安全性，為臨床安全用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉：含量規(guī)格為20%(磺胺)+4%(TMP)；批號(hào)為20150909。河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供。用于控制雞球蟲病，臨床推薦用法與用量為：混飲，每1 L飲水300 mg(以磺胺氯吡嗪鈉計(jì))，連用7 d。

瑞士染液、結(jié)晶紫染液、中性紅染液，均購(gòu)自上海士鋒生物科技有限公司；冰醋酸購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)試劑有限公司；蒸餾水，生理鹽水，磷酸鹽緩沖液，自制。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

1日齡的黃羽肉雞，購(gòu)自江蘇省家禽研究所。試驗(yàn)前于動(dòng)物房?jī)?nèi)適應(yīng)型環(huán)境15 d，采用翅號(hào)隨機(jī)編號(hào)及分籠識(shí)別。飼料委托江蘇省家禽研究所養(yǎng)殖基地代加工，不含抗菌藥物。受試雞采用網(wǎng)上飼養(yǎng)，自由采食和飲水，每天清理雞糞，雞舍自然通風(fēng)、保溫。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

挑選飼養(yǎng)至15日齡的健康黃羽肉雞40只，體重分布在(200±5)g，隨機(jī)分成4組。每組10只，公母各半。采用多劑量水平飲水給藥進(jìn)行靶動(dòng)物安全性研究，其中各劑量組分別按0(0 mg/L)、1(300 mg/L，以磺胺氯吡嗪鈉計(jì))、3(900 mg/L，以磺胺氯吡嗪鈉計(jì))和5(1 500 mg/L，以磺胺氯吡嗪鈉計(jì))倍的推薦劑量混飲給藥。連續(xù)飲水給藥7 d。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.4.1 一般臨床觀察

試驗(yàn)期間每日對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行密切監(jiān)控，以描述靶動(dòng)物對(duì)藥物有毒劑量產(chǎn)生的反應(yīng)。具體觀察項(xiàng)目取決于藥物的已知特性和受試家禽的種類。觀察并記錄各組動(dòng)物的一般臨床狀況，如死亡率情況、排便、飲水和采食情況等，主要指標(biāo)如下：

(1)每日飲水量、攝食量。

(2)試驗(yàn)期間與藥物有關(guān)的發(fā)病率和死亡率。

(3)試驗(yàn)期間動(dòng)物增重和飼料轉(zhuǎn)化，試驗(yàn)前和試驗(yàn)結(jié)束后各測(cè)定一次。

(4)對(duì)羽毛生長(zhǎng)的影響，弄濕墊料以及其他不良反應(yīng)。

1.4.2 臨床病理學(xué)檢測(cè)

給藥7d結(jié)束后對(duì)每只雞進(jìn)行心臟采血2 mL，其中全血作血液學(xué)指標(biāo)檢驗(yàn)，檢測(cè)參數(shù)包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)、血紅蛋白(HGB)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、紅細(xì)胞壓積(HCT)等[5]；血清用作生化指標(biāo)檢測(cè)，檢測(cè)參數(shù)包括總膽紅素(TBIL)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺基轉(zhuǎn)移酶(GGT)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(CHO)、血清淀粉酶(AMY)、鉀、鈉、氯、鈣等指標(biāo)[6]。

1.4.3 組織病理學(xué)檢查

組織病理學(xué)檢查方法：采集新鮮的心臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、小腸迅速用10%的福爾馬林固定。經(jīng)脫水、浸蠟、包埋后進(jìn)行切片和貼片，用HE染色法，經(jīng)脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、固定后在顯微鏡40×10倍鏡頭下進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.4.4 臟器系數(shù)

根據(jù)每只雞的體重及其主要臟器(包括心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟)的重量，計(jì)算各臟器的相對(duì)重量(臟器重與體重的比值)，即臟器系數(shù)。

1.4.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS22.0應(yīng)用軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)[7]。采用t檢驗(yàn)比較各組間動(dòng)物增重、血液學(xué)和血液生化學(xué)等各項(xiàng)指標(biāo)的顯著性差異，當(dāng)P>0.05，表示差異不顯著，當(dāng)P<0.05，為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

整個(gè)試驗(yàn)期間，空白對(duì)照組和各劑量組中所有受試動(dòng)物健康狀況良好，未出現(xiàn)死亡；各組動(dòng)物飲水和采食正常。在受試動(dòng)物的飲水量上統(tǒng)計(jì)分析表明，空白組與1倍推薦劑量組、1倍推薦劑量組與3倍推薦劑量組、3倍推薦劑量組與5倍推薦劑量組間飲水量存在顯著差異。1倍推薦劑量組與5倍推薦劑量組受試動(dòng)物的飲水量明顯高于空白組(1倍推薦劑量組與5倍推薦劑量組籠架靠油汀較近，可能影響飲水量的測(cè)量)，但都處于正常范圍。試驗(yàn)各組的采食量及飲水量見表1。

檢測(cè)指標(biāo)空白組1倍劑量組3倍劑量組5倍劑量組采食量(g/羽/天)58.41±3.4854.80±10.8650.13±3.8958.42±2.98飲水量(mL/羽/天)76.86±9.4889.29±11.75*71.71±5.7780.43±7.46

注：*表示與空白組比較，差異顯著(P<0.05)。下同

2.2 增重與飼料利用率

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組平均增重及飼料利用率見表2。由表2可見1倍劑量組及3倍劑量組動(dòng)物增重較對(duì)照組明顯，5倍劑量組動(dòng)物增重低于空白組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異不顯著(P>0.05)，料重比均在合理范圍內(nèi)。5倍劑量組受試動(dòng)物的料重比大于1倍及3倍劑量組，提示磺胺氯吡嗪鈉甲氧芐啶可溶性粉使用劑量過高時(shí)會(huì)影響動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。

檢測(cè)指標(biāo)空白組1倍劑量組3倍劑量組5倍劑量組給藥前每羽均重/g204.31±9.19200.43±5.59201.62±8.58200.91±5.87第7天給藥后羽均重/g389.06±26.20376.32±30.09360.37±33.95357.56±31.67*均增重(g/羽)184.75±23.47175.89±21.53158.75±27.26156.65±30.12*均耗料(g/羽)417.5383.4350.8408.9料重比2.262.182.212.61

注：料重比=均耗料/均增重

2.3 臟器系數(shù)

受試動(dòng)物連續(xù)飲用磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉溶液至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)后，各組臟器系數(shù)指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果見表3。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉各劑量組的臟器系數(shù)與空白組相比差異不顯著(P>0.05)。

檢測(cè)指標(biāo)空白組1倍推薦劑量組3倍推薦劑量組5倍推薦劑量組心臟0.9±0.50.7±0.20.7±0.10.6±0.2肝臟3.1±1.52.8±0.32.7±0.82.9±0.7脾臟0.3±0.10.2±0.10.3±0.10.2±0.1肺臟1.0±0.40.9±0.20.9±0.20.9±0.2腎臟1.1±0.50.9±0.21.1±0.11.1±0.1

2.4 血液生理指標(biāo)及血清生化指標(biāo)

各組于試驗(yàn)結(jié)束后(第8天)的血液生理指標(biāo)和血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果分別見表4-5。血液學(xué)及血液生化參數(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：盡管1倍及5倍推薦劑量組受試動(dòng)物的白細(xì)胞總數(shù)在平均水平上略低于空白組，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3倍推薦劑量組受試動(dòng)物的白細(xì)胞總數(shù)在平均水平上高于空白組，差異顯著(P<0.05)。各用藥組的谷丙氨酸酶及天冬氨酸酶含量較空白組升高，但僅1倍推薦劑量組與空白對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。5倍劑量組與空白組動(dòng)物雞在尿素氮上差異顯著(P<0.05)，提示高劑量時(shí)藥物對(duì)腎臟功能可能有影響。在5倍最大推薦劑量時(shí)平均堿性磷酸酶與空白對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。

檢測(cè)指標(biāo)空白組1倍推薦劑量組3倍推薦劑量組5倍推薦劑量組紅細(xì)胞數(shù)總數(shù)/(1012·L-1)2.32±0.152.42±0.122.33±0.332.41±0.30白細(xì)胞數(shù)總數(shù)/(109·L-1)56.87±11.3438.58±18.8562.54±28.67*39.84±29.87血紅蛋白/(g·L-1)82.35±3.4082.79±2.7779.55±10.5179.56±8.92紅細(xì)胞壓積/(L·L-1)28.04±2.1528.68±1.1627.57±3.3328.02±3.21血小板總數(shù)/(109·L-1)4.20±2.095.90±2.42*5.00±3.335.20±3.26異嗜性粒細(xì)胞含量/%6.5±2.13.4±2.34.0±2.23.2±1.3*嗜酸性粒細(xì)胞含量/%3.5±0.72.0±1.42.3±1.21.4±0.5嗜堿性粒細(xì)胞含量/%0000淋巴細(xì)胞含量/%87.5±13.288.6±7.987.0±4.790.6±0.9單核細(xì)胞含量/%14.3±10.86.4±4.47.0±2.24.8±0.8

檢測(cè)指標(biāo)空白組1倍推薦劑量組3倍推薦劑量組5倍推薦劑量總膽紅素/(μmol·L-1)1.0±0.11.1±0.11.0±0.11.1±0.1谷丙轉(zhuǎn)氨酶/(U·L-1)2.7±1.94.5±2.83.9±2.33.8±2.6天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶/(U·L-1)179.4±20.8247.8±60.3*235.2±74.2252.5±108.6總蛋白/(g·L-1)34.2±7.232.3±3.431.7±3.731.9±2.6白蛋白/(g·L-1)11.2±0.911.8±1.111.2±1.311.1±1.6球蛋白/(g·L-1)23.2±6.620.5±2.620.6±3.120.8±1.6堿性磷酸酶/(U·L-1)1530.9±457.41658.5±814.61435.5±441.01139.3±293.3*谷氨酰胺基轉(zhuǎn)移酶/(U·L-1)26.0±3.224.8±2.524.4±3.623.6±3.8肌酐/(μmol·L-1)11.9±4.89.1±1.110.3±1.210.2±2.0尿素氮/(μmol·L-1)0.8±0.10.9±0.20.9±0.21.0±0.2*葡萄糖/(μmol·L-1)15.2±1.114.9±1.615.7±1.515.8±1.5總膽固醇/(μmol·L-1)2.9±0.43.0±0.52.9±0.32.9±0.3鉀/(μmol·L-1)5.9±0.85.8±0.45.9±0.35.7±0.4鈉/(μmol·L-1)141.3±1.8142.2±1.9141.1±1.4142.6±1.7氯/(μmol·L-1)111.3±2.1111.0±2.2110.0±2.4111.2±2.4鈣/(μmol·L-1)2.8±0.12.8±0.12.8±0.12.8±0.1血清淀粉酶(μmol/L)342.1±157.3343.5±72.7377.2±89.9446.1±223.2

2.5 病理學(xué)變化

對(duì)經(jīng)過飼喂磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉7 d后的雞剖檢后，經(jīng)肉眼觀察各劑量組均未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)的異?；蚩梢刹∽?圖略)。對(duì)各組受試動(dòng)物采集樣品做組織學(xué)檢查，所有受試動(dòng)物的各臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理組織學(xué)變化(圖略)。

3 討論

磺胺氯吡嗪鈉是臨床常用的抗球蟲藥，主要是通過干擾敏感蟲株的葉酸代謝而抑制其生長(zhǎng)繁殖。甲氧芐啶(TMP)抗球蟲作用機(jī)理為抑制二氫葉酸合成酶，使二氫葉酸不能還原成四氫葉酸，影響輔酶形成，妨礙球蟲核酸合成，進(jìn)而抑制球蟲生長(zhǎng)繁殖。TMP與磺胺氯吡嗪鈉合用時(shí)，可以從兩個(gè)不同環(huán)節(jié)同時(shí)阻斷球蟲葉酸代謝而起協(xié)同作用，本復(fù)方制劑抗球蟲效果較各自單方均顯著增強(qiáng)[8]。

有文獻(xiàn)報(bào)道[9-11]，磺胺類藥物的急性中毒多見于注射磺胺類鈉鹽時(shí)，速度過快或劑量過大。表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀，如共濟(jì)失調(diào)、痙攣性麻痹、嘔吐、昏迷、食欲降低和腹瀉等。嚴(yán)重者迅速死亡。TMP毒性較低，副作用小，偶爾引起白細(xì)胞、血小板減少等，但孕畜和出生仔畜應(yīng)用易引起葉酸攝取障礙，宜慎用。

本研究主要通過臨床表現(xiàn)、血液生理生化指標(biāo)及病理學(xué)變化評(píng)價(jià)磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉對(duì)雞的安全性。本試驗(yàn)從臨床表現(xiàn)、增重及飼料利用率、血液常規(guī)檢測(cè)、血清生化指標(biāo)檢測(cè)、組織病理學(xué)檢查等多方面對(duì)以磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉1倍、3倍、5倍劑量飲水給藥的受試動(dòng)物進(jìn)行了安全性研究和評(píng)估。結(jié)果顯示磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉通過飲水給藥，連續(xù)混飲7 d，試驗(yàn)期間所有受試動(dòng)物均未死亡且健康狀況良好，表明磺胺氯吡嗪鈉甲氧芐啶可溶性粉對(duì)靶動(dòng)物雞在推薦劑量下使用具有較高的安全性。

綜上，磺胺氯吡嗪鈉-甲氧芐啶可溶性粉，按推薦劑量300 mg/L(以磺胺氯吡嗪鈉計(jì))飲水給藥，連用5天，對(duì)靶動(dòng)物雞具有較大的安全性。