李保仁 孫鳳利

北京懷柔醫(yī)院，北京101400

銀翹解表口服液是我院臨床使用多年的醫(yī)院制劑，其處方由銀花、連翹、桑葉、菊花、薄荷、淡竹葉、板藍根、蒲公英等八味中藥材組成，具有疏風清熱、瀉火解表功效，治療風熱型感冒療效顯著。為有效利用藥材資源，縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本，增加制劑中有效成分含量，提高制劑提取工藝的科學性，本研究以方中主藥金銀花、連翹中具有顯著功效的成分綠原酸［1］、連翹酯苷［2］為控制指標，在加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)、醇沉濃度等不同條件下，采用正交試驗法［3］和高效液相色譜法［4］，優(yōu)選銀翹解表口服液最佳提取工藝，為科學生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent1200 型高效液相色譜儀（美國，Agilent 公司）；Agilent 色譜工作站；BT25S 型賽多利斯電子天平。甲醇（色譜純，批號MS1923804，Merck 公司），乙腈（色譜純，批號AS184207，Merck 公司）；無水乙醇、磷酸為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；實驗用水為純化水。

銀花、連翹、桑葉、菊花、薄荷、竹葉、蒲公英、板藍根等八味中藥材（北京燕北飲片廠）

綠原酸（中國食品藥品檢定研究所，批號：110753-201817）、連翹酯苷（中國食品藥品檢定研究所，批號：111810-201806）

2 方法與結果

2.1 色譜條件

2.1.1 綠原酸。色譜柱：Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈：0.4%磷酸溶液（13：87）；檢測波長：327nm；流速：1.0mL/min。

2.1.2 連翹苷。色譜柱：Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈：水（25：75）；檢測波長：278nm；流速：1.0mL/min。

2.2 溶液制備

2.2.1 標準品。分別精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品3.26mg、連翹苷對照品15.25mg，放入25mL 的容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，各精密量取1mL，至10mL 容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度作為對照品溶液。

2.2.2 供試品。按處方10 倍量稱取各味藥材，按表1、表2 條件進行提取試驗，分別按藥材總量加8 倍、10倍、12 倍量自來水，依次煎煮0.75 小時、1 小時、1.5 小時，各煎煮1 次、2 次、3 次，以含乙醇量60%、70%、80%乙醇提取濃縮液，定容至1000mL，精密量取10mL，濃縮至干，加50%甲醇定容于50mL 容量瓶中，超聲提?。?］30 分鐘，補50%甲醇至刻度，搖勻，放置，經(jīng)0.45μm 濾膜過濾，得供試品溶液。

2.3 標準曲線的繪制 分別取以上濃度的綠原酸、連翹苷標準溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL，注入高效液相色譜儀，得其標準色譜圖見圖1、圖2，測定其峰面積，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得綠原酸回歸方程y=0.0348x+0.0004，線性相關系數(shù)0.9995；連翹苷回歸方程y=0.0618x+0.0242，線性相關系數(shù)0.9996。

2.4 樣品含量測定 取不同條件下提取得到的藥品溶液，按2.2 擬定試驗方法，得供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定其峰面積，分別由標準曲線計算被測溶液中的綠原酸、連翹苷的含量。

實驗以煎煮時間、加水量、煎煮次數(shù)、醇沉濃度為考察因素，各按3 種不同水平來考察，分別按藥材總量加8 倍、10 倍、12 倍自來水，依次煎煮0.75 小時、1小時、1.5 小時，各煎煮1 次、2 次、3 次，以含60%、70%、80%的乙醇提取。見表1。

按表2 中正交試驗設計的因素水平，分別提取、濃縮、凈化精制，按2.4 樣品含量測定方法，測得各樣品中綠原酸、連翹苷的含量。

因處方中金銀花、連翹均為主藥，其成分綠原酸、連翹酯苷皆為重要有效成分，X1、X2指標重要性相當，因此取加權系數(shù)B1=B2=1，對以上數(shù)據(jù)進行逐一分析，其中K 為各因素在各水平下的平均值，R 為極差，X 為總平均值，BR/X 為相對極差。見表3。

根據(jù)各因素相對極差BR/X 項可知，在X1中各因素從大到小依次為C-A-B-D，即各因素重要性依次為煎煮次數(shù)＞煎煮時間＞加水量＞醇沉濃度，在X2中各因素從大到小依次為A-B-C-D，即各因素重要性依次為煎煮時間＞加水量＞煎煮次數(shù)＞醇沉濃度，綜合X1，X2考慮各因素相對極差之和∑BR/X，可知各因素重要程度依次為A-C-B-D，即各因素重要性依次為煎煮時間＞煎煮次數(shù)＞加水量＞醇沉濃度。根據(jù)各因素相對極差之和，銀翹解表口服液最佳提取工藝為A3C2B2D2，即加10 倍量水，煎煮2 次，每次1.5 小時，用70%乙醇醇沉為最佳提取工藝。

圖1 綠原酸標準色譜圖

圖2 連翹苷標準色譜圖

表1 試驗因素水平表L9（34）

表2 正交試驗設計及結果

表3 各指標單一分析及綜合比較表

3 討論

在實施新工藝生產(chǎn)后，不僅縮短了產(chǎn)品生產(chǎn)周期，提高了制劑產(chǎn)量，節(jié)約了水電氣的資源，減少了乙醇的用量，降低了生產(chǎn)成本，患者在使用新工藝生產(chǎn)的制劑后，發(fā)熱、咽痛等癥狀較以往減輕明顯，病程較以往平均縮短一天，相應的用藥量也較以往減少五分之一左右。之所以出現(xiàn)這種現(xiàn)象，可能與實施新工藝后，制劑中綠原酸、連翹酯苷等有效成分含量提高呈正相關。通過對銀翹解表口服液提取工藝的優(yōu)選實驗，充分達到了有效利用藥材資源，縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本，增加制劑中有效成分含量，提高藥品療效，提高制劑提取工藝的科學性的目的，由此，本研究認為銀翹解表口服液提取工藝優(yōu)選值得推廣。