史曉敏 毛莉 仇曉霞

1.西北民族大學(xué)附屬醫(yī)院/甘肅省第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州730000；2.浙江省舟山醫(yī)院，浙江 舟山316000

近年來(lái)不孕患者逐漸增多，其中女性不孕癥較常見(jiàn)，其臨床表現(xiàn)為卵子發(fā)育成熟及排出障礙。研究表明，某些中藥組方對(duì)卵巢排卵、助孕、安胎具有較好效果；其中種子湯可通過(guò)上調(diào)子宮、卵巢等重量，增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，提高受孕率［1-2］。本研究探討種子湯對(duì)不孕大鼠生殖內(nèi)分泌功能、性激素及EmAb 水平的影響。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。SPF 級(jí)雌性未孕未產(chǎn)SD 大鼠30 只，6～8 周齡，體質(zhì)量（200±20）g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（甘）2004-2006-0000449。適應(yīng)性飼養(yǎng)2 周，自由進(jìn)食飲水。

1.1.2 試劑。種子湯：白芍、熟地、黨參、菟絲子15g，當(dāng)歸、白術(shù)、杜仲、續(xù)斷、鹿角霜12g，黃芪24g，甘草6g（均購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房，由藥房代煎為終濃度150g/200mL）；右歸丸購(gòu)自北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z11021040。

丙酸睪丸酮：購(gòu)自Sigma 公司，批號(hào)：H310205241；EmAb 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法試劑盒，購(gòu)自江蘇科寶生物有限公司；電子天平購(gòu)自上海恒平有效公司，型號(hào)FB224。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型建立方法。將1.25mg 丙酸睪丸酮溶于0.05mL 的中性茶油中，在大鼠背頸部進(jìn)行皮下注射；于第15d 后每天進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片檢查，當(dāng)大鼠陰道上皮細(xì)胞連續(xù)11d 持續(xù)角化，說(shuō)明大鼠處于未動(dòng)情周期，不孕大鼠模型建立成功。

1.2.2 動(dòng)物分組及處理。從造模后第15d 起開(kāi)始給予大鼠相應(yīng)藥物灌胃?？瞻捉M不做任何處理，模型組給予0.9%的生理鹽水；中藥復(fù)方高劑量組給予種子湯15g/kg，中藥復(fù)方低劑量組給予種子湯7.5g/kg；陽(yáng)性對(duì)照組給予右歸丸4.5g/kg，各6 只。五組大鼠均連續(xù)用藥4 周期，頸椎脫臼處死。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察大鼠卵巢及子宮大小，使用電子天平秤進(jìn)行稱重并記錄；子宮指數(shù)=子宮重量/體重，卵巢指數(shù)=卵巢重量/體重。取大鼠腹主動(dòng)脈血，將其血清分離后，使用全自動(dòng)生化分析儀（貝克曼，DXI800）測(cè)定血清促卵泡生成激素（FSH）、促黃體生成激素（LH）、雌二醇（E2）水平；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定EmAb，檢測(cè)方法按試劑操作說(shuō)明書進(jìn)行，計(jì)算陽(yáng)性/陰性血清比值，若比值超過(guò)2.1 且待測(cè)血清OD 超過(guò)0.4 則判為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS20.0 軟件分析數(shù)據(jù)，內(nèi)分泌功能、性激素水平用（±s）表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別內(nèi)分泌功能的比較 模型組卵巢及子宮指數(shù)低于其他各組（P＜0.05）。且種子湯高劑量組高于種子湯低劑量組（均P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 不同組別性激素水平的比較 模型組FSH、LH、E2 水平均低于其他各組（P＜0.05），且種子湯高劑量組高于種子湯低劑量組（均P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 不同組別內(nèi)分泌功能比較（±s）

表1 不同組別內(nèi)分泌功能比較（±s）

注：與模型組比較，#P＜0.05；與高劑量組比較，*P＜0.05

組別 卵巢指數(shù) 子宮指數(shù)空白組 38.41±1.87# 193.72±12.08#模型組 31.82±0.56 149.16±13.92種子湯高劑量組 38.26±1.64# 192.86±12.11#種子湯低劑量組 36.81±1.59#* 184.36±9.28#*右歸丸組 37.58±1.67#* 180.74±6.63#*

表2 不同組別性激素水平的比較（±s）

表2 不同組別性激素水平的比較（±s）

注：與模型組比較，#P＜0.05；與高劑量組比較，*P＜0.05

組別 FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） E2（ng/mL）空白組 1.39±0.20# 6.07±1.64# 964.52±118.72#模型組 0.67±0.21 4.72±0.81 573.92±65.24種子湯高劑量組 1.34±0.22# 6.04±1.62# 963.89±117.89#種子湯低劑量組 1.16±0.18#* 5.76±0.94#* 780.19±151.27#*右歸丸組 1.12±0.11#* 5.12±0.84#* 759.04±150.03#*

2.3 不同組別EmAb 陽(yáng)性率比較 模型組EmAb 陽(yáng)性表達(dá)低于其他各組（P＜0.05），且種子湯高劑量組高于種子湯低劑量組和右歸丸組（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不同組別EmAb 陽(yáng)性率比較

3 討論

研究表明，提高內(nèi)分泌及EmAb 水平、增強(qiáng)機(jī)體的免疫力可以調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸的功能，糾正紊亂的內(nèi)分泌環(huán)境及EmAb，改善子宮的受孕環(huán)境［3］。文獻(xiàn)報(bào)道，某些中藥復(fù)方具有調(diào)節(jié)卵巢軸和腎上腺軸功能作用，其通過(guò)多途徑、多環(huán)節(jié)的綜合作用，從而提高了受孕率，帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益［4］。本研究顯示，種子湯灌胃后的子宮、卵巢表達(dá)量顯著上調(diào)，大鼠卵巢重量比模型組顯著增加，提示子宮、卵巢指數(shù)間具有一定相關(guān)性，說(shuō)明種子湯能明顯提高卵巢組織表達(dá)量，提高卵巢對(duì)FSH、LH、E2 及EmAb 反應(yīng)敏感性，表明種子湯能促進(jìn)不孕模型大鼠的內(nèi)分泌系統(tǒng)［5］。

近年來(lái)，對(duì)卵泡發(fā)育及卵巢排卵的復(fù)雜生理過(guò)程有了更深入的了解，其中包括對(duì)細(xì)胞增殖、分化、卵子成熟至卵泡并破裂、釋放卵子及黃體生成等一系列過(guò)程。卵泡發(fā)育、成熟與促性腺激素存在直接依賴關(guān)系，LH 能誘導(dǎo)卵泡細(xì)胞生成雄激素，F(xiàn)SH 可促使卵泡旁間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)為卵泡膜并使其增殖，同時(shí)使顆粒細(xì)胞增殖分化，激活該細(xì)胞中芳香化酶系統(tǒng)，將雄激素轉(zhuǎn)為雌激素［6］。腎上腺源于雄激素，通過(guò)腎上腺皮質(zhì)網(wǎng)狀帶分娩的化合物，在羥化酶的作用下合成睪酮及雄烯二酮。種子湯使不孕大鼠卵巢形態(tài)變的正常，有成熟卵泡生成，卵巢間質(zhì)有少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)［7］，其中FSH、LH、E2 含量明顯上升，說(shuō)明垂體能增加下丘腦敏感性，增加機(jī)體分泌FSH、LH、E2，促進(jìn)卵泡生長(zhǎng)發(fā)育、顆粒細(xì)胞增生，從而使卵子成熟，具有排卵效果。種子湯給予不孕大鼠后其睪酮等含量下降，可能與卵巢分泌雄激素和腎上腺等減少有關(guān)，使卵巢中局部高雄激素得到緩解，解除性腺干擾，有助于改變卵泡閉鎖現(xiàn)象［8］。

總之，種子湯通過(guò)活血補(bǔ)腎以調(diào)節(jié)大鼠小丘腦、垂體、卵巢功能，恢復(fù)卵巢部分功能?？赡苁峭ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，促進(jìn)其恢復(fù)下丘腦、垂體、卵巢功能，具有綜合且多方面作用，需要進(jìn)一步研究［9］。