陳素平 ，譚曉宇，何錫然，黃小桃，郭家钘，鄺偉鍵，劉華敏

（1.廣東丁沃生醫(yī)療器械有限公司，廣東 佛山 528311；2.中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院肝膽外科，廣東 廣州 510010；3.廣東順德工業(yè)設(shè)計(jì)研究院/廣東順德創(chuàng)新設(shè)計(jì)研究院，廣東 佛山 528311）

大量科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，經(jīng)過多世代近交選育出小型豬具有穩(wěn)定的遺傳性、解剖結(jié)構(gòu)、代謝、生理生化指標(biāo)均與人類生理指標(biāo)存在頗高的相似度，是人類疾病研究理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，同時(shí)也是器官移植科學(xué)研究的重要?jiǎng)游锬Ｐ停?-2］。小型豬的血液生理生化指標(biāo)是創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型以及醫(yī)學(xué)疾病研究的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，是病理、藥理等科學(xué)研究工作的基礎(chǔ)性參考指標(biāo)，同時(shí)也是判斷小型豬基礎(chǔ)生理狀態(tài)的主要依據(jù)［3-4］。我國小型豬資源豐富，其中以廣西巴馬豬，南海五指山豬，西藏小型豬等其他小型豬作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣?dòng)物推進(jìn)我國各醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究具有重要意義［5-7］。我國三元雜交豬育種始于20 世紀(jì)70年代中后期，是將任意兩品種豬雜交的后代再與第三種品種豬進(jìn)行雜交得到的后代。三元雜交豬組合三類豬品種的優(yōu)點(diǎn)，抗病性強(qiáng)、育成率高、酮體品質(zhì)也得到明顯改善［8］。近年來許多小型豬動(dòng)物模型在醫(yī)學(xué)研究取得一定的成果，潘明星使用重慶小型版納豬在非轉(zhuǎn)流條件下進(jìn)行肝移植手術(shù)，建立了穩(wěn)定的肝移植模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明肝移植的關(guān)鍵為無肝期時(shí)間縮短與穩(wěn)定的血液動(dòng)力學(xué)，從而改善了肝移植的技術(shù)并且提高對(duì)肝移植術(shù)后護(hù)理的關(guān)注［9］。田忠利用巴馬豬建立糖尿病模型，在此基礎(chǔ)上成功建立糖尿病急性心梗死模型進(jìn)而發(fā)現(xiàn)治療糖尿病急性心梗死的治療關(guān)鍵為必須脂肪酸花生四烯酸［10］。在科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中各類型的實(shí)驗(yàn)小型豬的血液生理生化基礎(chǔ)研究也比較充足，然而使用三元雜交豬為動(dòng)物模型及分析其血液基礎(chǔ)指標(biāo)的研究較少，本試驗(yàn)測定三元雜交豬麻醉狀態(tài)下14 項(xiàng)靜脈血?dú)狻? 項(xiàng)血清生化指標(biāo)，比較三元雜交豬與其他小型豬血液生化的差異。分析不同品種小型豬基礎(chǔ)血液檢測值的差異，創(chuàng)建三元雜交豬的血液基礎(chǔ)資料，從而豐富實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種選擇進(jìn)而挖掘不同品系小型豬在醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

雅培i-STAT300 便攜式血?dú)夥治鰞x，iSTAT CG4+血?dú)鉁y試片，iSTAT CHEM8+血?dú)鉁y試片，為美國雅培公司生產(chǎn)；Pointcare V2 微納芯全自動(dòng)生化分析儀，微納芯肝功檢查盤片，北京拓瑞檢測技術(shù)有限公司生產(chǎn)；GE-歐美Aespire7100 麻醉呼吸機(jī)，北京邁潤醫(yī)療醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)；M-9000S 心電監(jiān)護(hù)儀，為深圳艾瑞康公司生產(chǎn)。

1.2 藥品與試劑

阿托品、舒泰、丙泊酚、肝素、曲馬多、阿曲庫銨；美國雅培iSTAT CG4+血?dú)鉁y試卡片，iSTAT CHEM8+血?dú)鉁y試卡片；天津微納芯肝功檢測盤。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

動(dòng)物基礎(chǔ)情況：3～4 月齡，30～40 kg 實(shí)驗(yàn)用三元雜交豬20 頭，實(shí)驗(yàn)豬術(shù)前實(shí)驗(yàn)豬禁食24 h，禁水12 h。

1.4 動(dòng)物麻醉

1）基礎(chǔ)麻醉：阿托品2 mg 肌肉注射，由于豬的脂肪比較厚，針頭進(jìn)針3/4 以上。

2）誘導(dǎo)麻醉：阿托品注射15 min 后，把舒泰5 mL與阿托品1 mg 混合，取混合藥2 mL 肌肉注射。

3）保定及建立耳緣靜脈通道：麻醉后稱重，記錄真實(shí)體重，溫水擦拭干凈豬身體、使用電動(dòng)剪幫豬剃毛，然后豬仰臥手術(shù)臺(tái)上并進(jìn)行綁定，在豬耳朵上使用留置針建立耳緣靜脈通路。

4）建立維持麻醉：留置針處接上微量注射泵以2～5 mg/kg/h 泵注丙泊酚。

5）插氣管：檢查豬口腔是否有異物、清理豬口腔中異物：將豬頸部墊高，進(jìn)行氣管插管，打開豬上下頜、用舌鉗把豬舌往一側(cè)拉開，完全暴露豬聲門。術(shù)者左手持喉鏡右手持無菌氣管導(dǎo)管，喉鏡片移到口腔中間，慢推喉鏡片，使其頂端抵達(dá)舌根，即可見到會(huì)厭，挑起會(huì)厭后可見聲門（看不到聲門時(shí)不能盲目插管），沿喉鏡片壓舌板凹槽放入，到聲門時(shí)輕旋導(dǎo)管進(jìn)入氣管內(nèi)，拔出喉鏡，拔出導(dǎo)絲，氣囊打氣，大約8～9 mL 的空氣，按壓氣囊如捏鼻尖的感覺，隨后進(jìn)行氣管插管連接呼吸機(jī)控制呼吸。

6）維持麻醉與注射鎮(zhèn)痛肌松藥：耳緣靜脈推注曲馬多1～2 mg/kg 和順式阿曲庫銨5 mg，此時(shí)丙泊酚的用量為2 mg/kg/h，若不注射曲馬多和阿曲庫銨，丙泊酚用量為5 mg/kg/h。

7）連接檢測儀器：豬嘴唇或豬尾連接血氧飽和度探頭檢測脈搏、血氧飽和度。

1.5 血樣采集和血?dú)?、生化指?biāo)測定

使用注射器在頸靜脈留置針抽取血樣，抽取2mL 靜脈血液用于血?dú)鈾z測。用美國雅培血?dú)夥治鰞x測定血?dú)庵笜?biāo)，使用前棄去注射器前端2～3 滴血后，根據(jù)使用規(guī)范把血分別注入iSTAT CG4+血?dú)鉁y試片，iSTAT CHEM8+血?dú)鉁y試片，注入檢測卡片時(shí)應(yīng)進(jìn)行排氣避免氣泡進(jìn)入。抽取 5 mL 血液注入EDTA 抗凝采血管，用于生化檢測。

1.6 測定指標(biāo)

檢測測定共23 項(xiàng)，包括：血液血?dú)?4 項(xiàng)、生化9 項(xiàng)、血液酸堿度（pH）、靜脈血二氧化碳分壓（PaCO2）、靜脈血氧分壓（PO2）、靜脈血氧飽和度（SaO2）、剩余堿（BE）、血糖（Glu）、乳酸（Lac）、血細(xì)胞積壓（HCT）、碳酸氫根（HCO3-）電 解 質(zhì)（Na+、K+、CL-、Ca2+）、血 紅 蛋白總濃度（HB）、總膽紅素（TBIL）、結(jié)合膽紅素（DBIL）、非結(jié)合膽紅素（IBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）。

1.7 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 23 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，將試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，如果數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，則其95% 參考值范圍用公式1.96S表示；如呈偏態(tài)分布，則用中位數(shù)、四分位數(shù)間距、極值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。

2 結(jié)果與分析

1）靜脈血?dú)獾闹笜?biāo)測定結(jié)果與分析。

對(duì)pH 值、HCO3-、BE、PCO2、SaO2、Na+、K+、CL-、Ca2+、Glu、HCT、HB 進(jìn) 行 正 態(tài) 性 檢 驗(yàn)，結(jié)果P＞0.05，呈分布正態(tài)分布。因此其95% 參考值范圍用公式X±1.96S表示，結(jié)果見表1、2。Lac、PaO2、K-、Glu 呈偏態(tài)分布，則采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距、極值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，結(jié)果見表3。

表1 pH 值、HCO3-、BE、PCO2、SaO2 95% 參考值范圍計(jì)算表

表2 Na+、CL-、Ca2+、HCT、HB 95% 參考值范圍計(jì)算表

表3 Lac、PaO2、K+、Glu 95% 參考值范圍計(jì)算表

2）血液生化指標(biāo)。

ALT、ALP、ALB、AST、GGT、TP、TBIL、DBIL、IBIL 進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，ALT、TP、ALP、ALB 的數(shù)據(jù)結(jié)果P＞0.05，呈正態(tài)分布，因此，其95% 參考值范圍用公式X± 1.96S計(jì)算，結(jié)果見 表4；AST、GGT、TBIL、DBIL、IBIL 正 態(tài) 性檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，呈偏態(tài)分布，因此采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距、極值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，結(jié)果見表5。

3）與其他文獻(xiàn)報(bào)道的比較本試驗(yàn)結(jié)果（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）與其他文獻(xiàn)報(bào)道的小型豬血?dú)?、生化指?biāo)的比較分別見表6、表7、表8。

表4 ALT、TP、ALP、ALB 95% 參考值范圍計(jì)算表

表5 AST、GGT、TBIL、DBIL、IBIL 95% 參考值范圍計(jì)算表

表6 動(dòng)脈血液分析比較

表7 血液離子含量比較

表8 血液生化指標(biāo)比較

3 討論

本次靜脈血?dú)夥治鰯?shù)據(jù)中BE、HCO3-檢測值與Wellborn 文獻(xiàn)資料相似，均大于人類正常生理值。本次實(shí)驗(yàn)顯示三元雜交豬的ph 值符合人類正常生理值，PaCO2與PaO2值與人生理指標(biāo)參考值區(qū)別較小與呼吸機(jī)調(diào)節(jié)呼吸有關(guān)。因?yàn)椴煌潭鹊碾娊赓|(zhì)紊亂從而影響患者圍術(shù)期恢復(fù)及預(yù)后情況，電解質(zhì)異常嚴(yán)重的可能危及生命，因此血液電解質(zhì)的檢測也是不容忽視。本實(shí)驗(yàn)的三元雜交豬電解質(zhì)測定值與黃國勇的實(shí)驗(yàn)值相似同時(shí)符合人的血液正常生理參考值。

三元雜交豬生化指標(biāo)內(nèi)ALT、ALB、TP 與夏欣［16］研究的長白豬生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果均相似與許多豬血液生化文獻(xiàn)報(bào)道一致高于人類生化參考值。ALB 與TBIl 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與楊李廠文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，ALP 實(shí)驗(yàn)結(jié)果范圍與楊李廠的巴馬豬數(shù)據(jù)有較大出入但接近于人類ALP正常生理值［15］。

血?dú)鈹?shù)據(jù)中14 項(xiàng)有9 項(xiàng)與巴馬豬、藏豬、長白豬血?dú)鈹?shù)據(jù)較接近，生化9 項(xiàng)中有6 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均相似。與人類血液血?dú)鈪⒖贾迪啾扔? 項(xiàng)相近，生化9 項(xiàng)有4 項(xiàng)范圍相近。結(jié)果表明麻醉狀態(tài)下三元雜交豬血液指標(biāo)參考值與其他品種豬血液指標(biāo)參考值均在較大程度上相似，并且與人臨床生理指標(biāo)接近，豐富了小型豬品種作為科學(xué)研究疾病動(dòng)物模型也有一定參考意義。