何殷萍 裴波

綿陽市食品藥品檢驗所 四川綿陽 621000

當前，食品工程中，脫氫乙酸測定方法主要是氣相色譜法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質譜法。其中，高效液相色譜儀測定方法最為廣泛。

1 脫氫乙酸概述

脫氫乙酸（DHA）已被批準在中國食品工業(yè)中用作食品添加劑，具有防腐和保鮮作用，并且對酵母和霉菌具有顯著的抑制作用。但是，在食品中過量使用脫氫乙酸對人體有害。脫氫乙酸被人體組織迅速完全吸收，進入人體后，分散在血漿和許多器官中，具有抑制體內(nèi)各種氧化酶的作用。1973年，日本報道了這種防腐劑引起了腎結石等問題，出于對其安全性的懷疑，逐漸被山梨酸替代。脫氫乙酸毒性是山梨酸的十倍。日本目前限制使用此類防腐劑，歐洲共同體禁止使用此類防腐劑。大鼠口服脫氫乙酸的LD為1g/kg，每公斤體重的每日可接受攝入量（ADI值）未指定。中國的《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》規(guī)定，脫氫乙酸可用于發(fā)酵豆腐，咸菜和橙汁中，最高用量為0.30克/千克。盡管唯一支持的標準測試方法是氣相色譜法，但該方法的缺點是操作復雜且對所用試劑有劇毒。50%的甲醇溶液用于超聲提取，食品中的脫氫乙酸可通過高效液相色譜法直接測量[1]。

2 材料及方法

2.1 原理

用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸，經(jīng)脫脂，去蛋白處理，過膜，用ThermoU3000紫外檢測器測定，以色譜峰的保留時間定性，外標法定量。

2.2 儀器與試劑

（1）儀器。ThermoU3000配紫外檢測器，十萬分之一天平，粉碎機。（2）試劑。甲醇（色譜純）、0.02mol·L-1乙酸銨溶液、50g·L-1氫氧化鈉溶液、10%甲酸溶液、120g·L-1硫酸鋅溶液、70%甲醇溶液、正己烷（色譜純）、脫氫乙酸標準品（編號：21680，批號：171011，含量：99.90%）、脫氫乙酸鈉標準品（編號：BW4067，批號：T160352，含量：99.40%）、脫氫乙酸標準溶液（編號：SB05-261-2011，批號：201902，含量：1000μg·mL-1），所有標準品均在有效期內(nèi)。（3）色譜條件。色譜柱：依利特C184.6mm×250mm，5μm；流動相：甲醇+0.02molL-1乙酸銨溶液（10+90，體積比）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：20μL；檢測波長：293nm。

3 樣品處理

3.1 蛋糕

用粉碎機將蛋糕粉碎，混勻。稱取試樣2g（精確至0.001g），置于25mL離心管中，加入10mL水、5mL硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉移至25mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，超聲提取10min，轉移到分液漏斗中，加入10mL正己烷，振搖1min，靜置分層，棄去正己烷層，加入10mL正己烷重復進行一次，取下層水相置于離心管中，4000r·min-1離心10min，取上層清液過膜上機待測[1]。

3.2 橙汁飲料

樣品混勻后，稱取試樣5g（精確至0.001g），置于50mL離心管中，加入10mL水，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，4000r·min-1離心10min。取20mL上清液用10%的甲酸溶液調(diào)pH至5，定容至25mL。取5mL過已活化的C18固相萃取柱（500mg，6mL），用5mL水淋洗，2mL 70%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液2mL，渦旋混合，取上清液過膜上機待測。

4 結果與分析

4.1 樣品預處理

（1）蛋糕。樣品在調(diào)pH至7.5時，因臨界點不好掌握，用20g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時，因加入量在5～8mL，加入量較大，后期混勻較難，故在國家標準方法基礎上相應提高氫氧化鈉溶液的濃度，用50g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時，加2.75～3.00mL氫氧化鈉溶液將其pH值控制在6.8～8.2。（2）橙汁飲料。因在處理前測得原樣pH值在4.6，樣品中脫氫乙酸含量為未檢出，故在加標測定時，對調(diào)pH和不調(diào)pH做了相應的比對，在處理過程中固相萃取柱必需保持濕潤狀態(tài)，通過反復實驗，在經(jīng)過固相萃取柱凈化后用2mL洗脫液洗脫存在洗脫不完全現(xiàn)象，故對方法進行相應調(diào)整，將洗脫液提高至5mL，以確保洗脫完全[2]。

4.2 線性范圍與最低檢出限

（1）線性范圍。在本實驗室條件下，脫氫乙酸含量在0.4～200μg·mL-1內(nèi)，標準含量（x）與峰面積（y）有良好的線性關系，其相關系數(shù)為1.0000，回歸方程為y=0.5215x+0.1729。（2）最低檢出限取濃度0.08、0.20、0.40μg·mL-1標準樣品分別進樣10次，最低檢出限：0.4+3S=0.44μg·mL-1。

4.3 方法提取回收率實驗與精密度實驗

取2g左右的蛋糕勻樣分別加入1.0mg·mL-1的標準液0.075、0.300、1.500mL，各測定6次，其平均回收率為84.8%～111.2%，RSD值在5.14%～7.39%；取5g混勻后的橙汁飲料分別加入1.0mg·mL-1的標準液 0.025、0.200、1.00mL，其平均回收率為79.2%～100.2%。各測定5次，RSD值在2.65%～8.36%，見表1。

表1 橙汁飲料加標樣結果匯總表

5 結語

總之，通過本方法對脫氫乙酸的測定，方法線性范圍寬，基質干擾少，靈敏度高，前處理簡單，準確度高。