何殷萍 裴波

綿陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所 四川綿陽(yáng) 621000

當(dāng)前，食品工程中，脫氫乙酸測(cè)定方法主要是氣相色譜法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。其中，高效液相色譜儀測(cè)定方法最為廣泛。

1 脫氫乙酸概述

脫氫乙酸（DHA）已被批準(zhǔn)在中國(guó)食品工業(yè)中用作食品添加劑，具有防腐和保鮮作用，并且對(duì)酵母和霉菌具有顯著的抑制作用。但是，在食品中過(guò)量使用脫氫乙酸對(duì)人體有害。脫氫乙酸被人體組織迅速完全吸收，進(jìn)入人體后，分散在血漿和許多器官中，具有抑制體內(nèi)各種氧化酶的作用。1973年，日本報(bào)道了這種防腐劑引起了腎結(jié)石等問(wèn)題，出于對(duì)其安全性的懷疑，逐漸被山梨酸替代。脫氫乙酸毒性是山梨酸的十倍。日本目前限制使用此類(lèi)防腐劑，歐洲共同體禁止使用此類(lèi)防腐劑。大鼠口服脫氫乙酸的LD為1g/kg，每公斤體重的每日可接受攝入量（ADI值）未指定。中國(guó)的《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，脫氫乙酸可用于發(fā)酵豆腐，咸菜和橙汁中，最高用量為0.30克/千克。盡管唯一支持的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法是氣相色譜法，但該方法的缺點(diǎn)是操作復(fù)雜且對(duì)所用試劑有劇毒。50%的甲醇溶液用于超聲提取，食品中的脫氫乙酸可通過(guò)高效液相色譜法直接測(cè)量[1]。

2 材料及方法

2.1 原理

用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸，經(jīng)脫脂，去蛋白處理，過(guò)膜，用ThermoU3000紫外檢測(cè)器測(cè)定，以色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

2.2 儀器與試劑

（1）儀器。ThermoU3000配紫外檢測(cè)器，十萬(wàn)分之一天平，粉碎機(jī)。（2）試劑。甲醇（色譜純）、0.02mol·L-1乙酸銨溶液、50g·L-1氫氧化鈉溶液、10%甲酸溶液、120g·L-1硫酸鋅溶液、70%甲醇溶液、正己烷（色譜純）、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（編號(hào)：21680，批號(hào)：171011，含量：99.90%）、脫氫乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（編號(hào)：BW4067，批號(hào)：T160352，含量：99.40%）、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號(hào)：SB05-261-2011，批號(hào)：201902，含量：1000μg·mL-1），所有標(biāo)準(zhǔn)品均在有效期內(nèi)。（3）色譜條件。色譜柱：依利特C184.6mm×250mm，5μm；流動(dòng)相：甲醇+0.02molL-1乙酸銨溶液（10+90，體積比）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm。

3 樣品處理

3.1 蛋糕

用粉碎機(jī)將蛋糕粉碎，混勻。稱(chēng)取試樣2g（精確至0.001g），置于25mL離心管中，加入10mL水、5mL硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，超聲提取10min，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入10mL正己烷，振搖1min，靜置分層，棄去正己烷層，加入10mL正己烷重復(fù)進(jìn)行一次，取下層水相置于離心管中，4000r·min-1離心10min，取上層清液過(guò)膜上機(jī)待測(cè)[1]。

3.2 橙汁飲料

樣品混勻后，稱(chēng)取試樣5g（精確至0.001g），置于50mL離心管中，加入10mL水，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，4000r·min-1離心10min。取20mL上清液用10%的甲酸溶液調(diào)pH至5，定容至25mL。取5mL過(guò)已活化的C18固相萃取柱（500mg，6mL），用5mL水淋洗，2mL 70%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液2mL，渦旋混合，取上清液過(guò)膜上機(jī)待測(cè)。

4 結(jié)果與分析

4.1 樣品預(yù)處理

（1）蛋糕。樣品在調(diào)pH至7.5時(shí)，因臨界點(diǎn)不好掌握，用20g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時(shí)，因加入量在5～8mL，加入量較大，后期混勻較難，故在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法基礎(chǔ)上相應(yīng)提高氫氧化鈉溶液的濃度，用50g·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH時(shí)，加2.75～3.00mL氫氧化鈉溶液將其pH值控制在6.8～8.2。（2）橙汁飲料。因在處理前測(cè)得原樣pH值在4.6，樣品中脫氫乙酸含量為未檢出，故在加標(biāo)測(cè)定時(shí)，對(duì)調(diào)pH和不調(diào)pH做了相應(yīng)的比對(duì)，在處理過(guò)程中固相萃取柱必需保持濕潤(rùn)狀態(tài)，通過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，在經(jīng)過(guò)固相萃取柱凈化后用2mL洗脫液洗脫存在洗脫不完全現(xiàn)象，故對(duì)方法進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，將洗脫液提高至5mL，以確保洗脫完全[2]。

4.2 線性范圍與最低檢出限

（1）線性范圍。在本實(shí)驗(yàn)室條件下，脫氫乙酸含量在0.4～200μg·mL-1內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)含量（x）與峰面積（y）有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為1.0000，回歸方程為y=0.5215x+0.1729。（2）最低檢出限取濃度0.08、0.20、0.40μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)樣品分別進(jìn)樣10次，最低檢出限：0.4+3S=0.44μg·mL-1。

4.3 方法提取回收率實(shí)驗(yàn)與精密度實(shí)驗(yàn)

取2g左右的蛋糕勻樣分別加入1.0mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)液0.075、0.300、1.500mL，各測(cè)定6次，其平均回收率為84.8%～111.2%，RSD值在5.14%～7.39%；取5g混勻后的橙汁飲料分別加入1.0mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)液 0.025、0.200、1.00mL，其平均回收率為79.2%～100.2%。各測(cè)定5次，RSD值在2.65%～8.36%，見(jiàn)表1。

表1 橙汁飲料加標(biāo)樣結(jié)果匯總表

5 結(jié)語(yǔ)

總之，通過(guò)本方法對(duì)脫氫乙酸的測(cè)定，方法線性范圍寬，基質(zhì)干擾少，靈敏度高，前處理簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度高。