熊 前，王春亮，余 盼，吳 衍，李川武

（1.公安部 南昌警犬基地，南昌 330100；2.江西省警犬良種繁育與行為科學研究重點實驗室，南昌 330100）

母犬性成熟后，其行為、卵巢、生殖道等會發(fā)生諸多生理變化，并表現(xiàn)出周期性的變化規(guī)律，即發(fā)情周期。根據母犬的發(fā)情征候和行為特點，發(fā)情周期一般分為發(fā)情前期（持續(xù)時間為5～20 d，平均9 d）、發(fā)情期（持續(xù)時間為5～15 d，平均9 d）、發(fā)情后期（持續(xù)時間為45～70 d，平均60 d）、休情期（持續(xù)時間為80～240 d，平均150 d）。犬發(fā)情周期不同階段主要生殖激素水平不同，受生殖激素作用的影響，其陰道上皮細胞、陰道黏膜及外陰部特征均會產生變化，并呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律［1］?？梢酝ㄟ^母犬陰道臨床外觀及陰道內部形態(tài)觀察對發(fā)情階段進行有效判斷。試驗通過對母犬不同發(fā)情階段陰道外觀及內部形態(tài)進行觀察，探討母犬發(fā)情周期規(guī)律性變化，以準確判斷犬發(fā)情周期的不同階段，為確定母犬最適交配期及提高配種母犬受胎率和窩產仔數(shù)提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

3～5歲德國牧羊犬6頭，公安部南昌警犬基地2019年11月份發(fā)情并經同期發(fā)情的健康母犬。犬只嚴格按照《公安部警犬繁育工作規(guī)則》《警犬飼養(yǎng)管理操作規(guī)程》等要求統(tǒng)一開展飼養(yǎng)管理及疾病防治［2］。

1.2 試驗器材

犬用TCI內窺鏡系統(tǒng)，購自寧波智光機電科技有限公司；EOS7D相機，佳能（中國）公司；Beckman AccessTM全自動化學發(fā)光檢測系統(tǒng)，購自美國貝克曼庫爾特有限公司；開膣器、無添加劑一次性使用真空采血管、醫(yī)用棉簽、醫(yī)用超薄乳膠手套等。以上器材由江西省警犬良種繁育與行為科學研究重點實驗室提供。

1.3 測定項目

1.3.1 臨床外觀觀察 自母犬外陰部出現(xiàn)血樣分泌物開始，每天由飼養(yǎng)員牽犬并使其背向下成半直立狀態(tài)，試驗人員用溫濕毛巾對母犬外陰部周圍進行清潔，一只手托住母犬臀部，用拇指和食指將陰門分開，觸摸陰唇，判斷外陰腫脹及陰唇柔軟程度；用食指和拇指將陰門張開，暴露陰道腹側壁，觀察陰道內壁顏色、毛細血管充血程度，以及陰門分泌物的量、黏稠度及顏色；觸摸外陰部，觀察尾根的偏移情況，同時由試驗助手對外陰部進行拍照。

1.3.2 陰道內部形態(tài)觀察 由飼養(yǎng)員牽犬保定，用開膣器將母犬陰門分開，用TCI內窺鏡系統(tǒng)探頭與水平方向呈約60°角插入陰道，再水平插入陰道深處，直達子宮頸口。通過圖像傳感器獲取陰道內壁褶皺、黏膜顏色、光滑度及子宮頸口等內部形態(tài)圖像。

1.3.3 生殖激素的測定 以母犬外陰部開始出現(xiàn)血樣分泌物作為第1天，早晨空腹狀態(tài)下采集前肢內側靜脈血5 mL，在37℃水浴鍋內靜置20 min，3 600 r／min離心10 min，收集血清，并將其分為兩份，一份用于檢測雌二醇激素（E2）濃度，另一份于－20℃低溫保存。E2采用Beckman AccessTM全自動化學發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測，具體操作步驟按照試劑盒說明書進行。

2 結果與分析

2.1 臨床外觀觀察結果

通過發(fā)情母犬外陰部拍照（結果見圖1）進行觀察可知，發(fā)情前期母犬外陰部腫脹明顯，觸摸陰唇發(fā)硬，排出血樣分泌物顏色較深，外陰內壁充血，觸摸尾根無明顯偏尾現(xiàn)象。進入發(fā)情期后，母犬外陰部腫脹程度達到最大，陰唇柔軟，出現(xiàn)皺橫現(xiàn)象，分泌物顏色逐漸變?yōu)榈S色。將外陰暴露，內壁泛白發(fā)亮，尾根出現(xiàn)偏尾現(xiàn)象。此時采用試情法，母犬愿意接受交配。而進入發(fā)情后期，母犬外陰部逐步收縮，陰唇變柔軟，皺紋變得明顯，外陰偶見少量黑褐色分泌物排出。休情期母犬外陰完全收縮，無充血、腫脹，陰道內也無分泌物排出。

2.2 陰道內部形態(tài)觀察結果

見圖2。

母犬陰道內部形態(tài)觀察結果表明，發(fā)情前期母犬陰道內壁有圓形褶皺，褶皺黏膜水腫，表面光滑但無光澤，呈粉紅色，子宮頸口微張，有明顯血樣分泌物排出。進入發(fā)情期后，陰道內壁圓形褶皺萎縮變小，褶皺頂部形成尖銳角度，褶皺黏膜水腫，表面光滑，有強光澤和滑潤感，呈粉紅色；子宮頸口松弛、開張，分泌物顏色變淡，為淡黃色。而進入發(fā)情后期，陰道褶皺為扁平、不光滑狀態(tài)，黏膜呈紅色，色澤變淡，子宮頸口開始閉合，偶見無色、黏稠分泌物排出。休情期母犬陰道內壁褶皺呈不光滑的平扁狀態(tài)，無光澤，子宮頸口閉合，無分泌物排出。

2.3 生殖激素檢測結果

見圖3。

由圖3可以看出：發(fā)情期間E2濃度呈上升趨勢，從剛開始的較低水平（53.63±11.75）pmol／L增加到最高峰值（220.42±15.35）pmol／L，此時為第9天；之后迅速下降，直到第14天后降至儀器可檢測的最低臨界值（18.35 pmol／L）。

3 分析與討論

1）犬生殖激素主要包括E2、孕酮（P4）和促黃體素（LH），變化較復雜，但仍有一定的規(guī)律性，可為犬的繁殖計劃提供理論參考。P.N.Olson等［3］、王新蕾等［4］的研究表明，E2是母犬發(fā)情周期分泌的重要生殖激素，其變化伴隨母犬發(fā)情的臨床癥狀（陰道壁、外陰的腫脹及血性分泌物的發(fā)生）。P.W.Concannon等［5］研究發(fā)現(xiàn)，E2在母犬發(fā)情前期會持續(xù)升高，由18.35～36.70 pmol／L升高到最高值（165.15～440.40 pmol／L），其峰值一般出現(xiàn)在LH峰值前的1～3 d，即在LH脈沖式波動出現(xiàn)前的0.5～2.0 d。本試驗結果也表明，母犬發(fā)情前期E2濃度在第9天達到峰值，其后迅速下降至儀器可檢測的最低臨界值；母犬E2濃度變化伴隨外陰部及陰道內部結構均發(fā)生一定的變化，E2濃度變化規(guī)律與前人研究結果基本一致，但個體之間存在較大差異。因此對母犬的生殖激素進行監(jiān)測，可為提高無明顯發(fā)情癥狀母犬的發(fā)情鑒定準確率提供參考。

2）正常母犬在進入發(fā)情前期時，E2濃度上升導致母犬外陰漸腫脹、變大，并伴有血樣分泌物排出。分泌物組成包括由子宮中滲出的完整或溶解的紅細胞漿液及血紅蛋白［6］。本試驗結果表明，母犬發(fā)情前期陰道外部充血、腫脹，陰唇逐漸增大、變硬；進入發(fā)情期后外陰腫脹程度達到最大，陰唇變軟；到發(fā)情后期外陰腫脹逐漸消退，陰唇仍然柔軟，皺紋現(xiàn)象明顯；直到休情期外陰完全收縮、無腫脹。外陰流出的分泌物顏色由發(fā)情前期暗紅色逐漸變淺，進入發(fā)情期逐漸變?yōu)榈S色，甚至明亮無色，發(fā)情后期、休情期基本無分泌物排出。分泌物的量在發(fā)情前期先增多后減少，進入發(fā)情期繼續(xù)逐漸減少，直到發(fā)情后期、休情期基本無分泌物流出。這與范泉水等［7］的研究結果基本一致，說明德國牧羊犬品種與其他品種在發(fā)情周期中的臨床癥狀一致，發(fā)情周期中不同階段具有不同的臨床癥狀特征變化，可以根據這些變化規(guī)律來判斷母犬所處的發(fā)情階段。

3）本試驗通過內窺鏡系統(tǒng)對母犬陰道內部形態(tài)進行觀察，揭示了不同發(fā)情階段陰道內部形態(tài)的變化規(guī)律，為犬的人工授精及陰道檢查提供了有效依據。研究表明，母犬生殖激素的變化與行為及生理活動之間存在一定的關系［8］，但對生殖道內部形態(tài)的變化機制還有待于進一步研究。

4）在實際工作中，母犬發(fā)情鑒定更多的是依據外陰部的變化來判斷；生殖激素檢測和陰道內部形態(tài)觀察法主要用于輔助發(fā)情鑒定。由于品種和個體差異較大，特別對于發(fā)情異?；蛲怅幉坑^察難以準確判斷的犬，采取與生殖激素檢測及陰道內部形態(tài)觀察法相結合的方法進行綜合判斷具有很好的效果。