王欣，譚詳敏，王梅竹，李紅玉

中藥砷劑治療BCR-ABL陽(yáng)性慢性髓系白血病研究進(jìn)展

王欣1，譚詳敏1，王梅竹1，李紅玉1，2

1.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000

BCR-ABL融合蛋白是慢性髓系白血?。–ML）的生物標(biāo)志物，也是目前針對(duì)CML進(jìn)行藥物開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的重要靶點(diǎn)。中藥砷劑砒霜（As2O3）和雄黃（As4S4）在治療CML方面具有良好的效果，可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或分化，但砒霜的高毒性和雄黃的難溶性對(duì)其臨床使用帶來(lái)極大的困難。本文對(duì)目前中藥砷劑及新型砷劑雄黃微生物轉(zhuǎn)化液治療CML的研究和作用機(jī)制進(jìn)行綜述，為中藥砷劑特別是雄黃的二次開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供參考。

砒霜；雌黃；雄黃；雄黃微生物轉(zhuǎn)化液；凋亡；BCR-ABL；綜述

慢性髓系白血?。╟hronic myeloid leukemia，CML）是起源于造血干細(xì)胞的惡性腫瘤，是由9號(hào)染色體和22號(hào)染色體形成的費(fèi)城染色體易位導(dǎo)致BCR和ABL基因融合，表達(dá)了BCR-ABL融合蛋白所引起的[1]。該融合蛋白能持續(xù)表達(dá)酪氨酸激酶活性，激活下游信號(hào)通路，引起細(xì)胞增殖失控[1]。目前，針對(duì)CML的藥物治療以酪氨酸激酶抑制劑為主，如伊馬替尼、達(dá)沙替尼等。這些抑制劑雖表現(xiàn)出良好的療效，但易產(chǎn)生耐藥性。砷劑是一種有毒化學(xué)物質(zhì)，但其藥用歷史悠久。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明，砷劑在治療血液系統(tǒng)腫瘤方面效果顯著，能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)細(xì)胞分化、激活自噬等多種方式發(fā)揮療效?，F(xiàn)就砷劑在治療CML中的研究進(jìn)展作一綜述。

1 砒霜

砒霜也稱(chēng)信石，有殺蟲(chóng)、截瘧、消癰功效。經(jīng)提取的純凈砒霜為白色霜狀粉末，主要成分為As2O3。2000年美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)As2O3為治療急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）一線藥物，在治療其他血液腫瘤方面也有較好效果。

1.1 抑制細(xì)胞增殖

腫瘤細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期密切相關(guān)，As2O3通過(guò)阻滯細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖。正常細(xì)胞周期由細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶和細(xì)胞周期蛋白激酶抑制物共同調(diào)控。細(xì)胞周期蛋白D1作為細(xì)胞周期的正調(diào)控因子，使細(xì)胞周期由G1期進(jìn)入S期[2]。而As2O3能顯著抑制細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，最終抑制K562細(xì)胞的增殖[3-4]。細(xì)胞周期存在G1/S期和G2/M期2個(gè)限制點(diǎn)，As2O3也能使K562細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，從而抑制細(xì)胞增殖，其機(jī)制與細(xì)胞周期抑制基因p57的上調(diào)和細(xì)胞周期促進(jìn)基因cyclinB的下調(diào)有關(guān)[5]。

1.2 促進(jìn)凋亡

1.2.1 通過(guò)去甲基化調(diào)控細(xì)胞凋亡

甲基化相關(guān)沉默靶點(diǎn)-1（TMS1）是Masumoto等[6]在對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行形態(tài)分析時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種22 kD的蛋白，該蛋白具有Caspase募集域，在細(xì)胞凋亡時(shí)聚集成斑點(diǎn)出現(xiàn)，在細(xì)胞凋亡和免疫中發(fā)揮重要作用[7]。Li等[7]研究表明，TMS1在CML細(xì)胞K562中低表達(dá)，呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)。而As2O3能以劑量依賴的方式上調(diào)TMS1的表達(dá)，通過(guò)降低DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1的活性，使TMS1去甲基化。同時(shí)誘導(dǎo)Bcl-2表達(dá)量升高，降低Bax的表達(dá)水平，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

1.2.2 直接調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)

細(xì)胞內(nèi)控制凋亡相關(guān)基因包括Tp53、Bcl-2、fas等。Tp53編碼的p53蛋白是一種腫瘤抑制因子，與細(xì)胞增殖、凋亡及腫瘤的發(fā)生有關(guān)?；罨膒53可進(jìn)入線粒體中與促凋亡蛋白相互作用，導(dǎo)致線粒體膜通透性改變而釋放細(xì)胞色素C，引起Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，也可通過(guò)抑制抗凋亡蛋白進(jìn)而促進(jìn)凋亡發(fā)生[8]。As2O3能下調(diào)p53和Bcl-2蛋白的表達(dá)，使K562細(xì)胞周期阻滯于S期而進(jìn)入凋亡程序[9]。As2O3也可調(diào)節(jié)FAS/FASL受體途徑，對(duì)多藥耐藥性細(xì)胞K562/ADM起到抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用[10]。

1.2.3 其他途徑

As2O3聯(lián)合AMN107能引起K562r細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)失衡，從而激活凋亡[11]。As2O3單獨(dú)作用于K562r細(xì)胞能降低活性氧水平，促發(fā)凋亡。與硼替佐米聯(lián)用凋亡效果更顯著[12]。另外，As2O3與組蛋白去乙?；种苿㏒AHA聯(lián)合使用也能發(fā)揮促凋亡作用，其機(jī)制可能與AKT信號(hào)通路的抑制有關(guān)[13]。

1.3 誘導(dǎo)自噬性死亡

自噬是細(xì)胞在饑餓、能量缺乏等狀態(tài)及病理過(guò)程下維持真核細(xì)胞代謝穩(wěn)態(tài)和生存的一種機(jī)制，自噬水平高低可介導(dǎo)細(xì)胞的存活和死亡，與腫瘤的發(fā)生和抑制也有密切聯(lián)系[14]。

Cheng等[15]發(fā)現(xiàn)，As2O3處理K562和K562/ADM細(xì)胞后，在熒光顯微鏡下觀察到自噬泡的形成，透射電鏡下也觀察到自噬體出現(xiàn)。RT-PCR和Western blot結(jié)果表明，自噬物Beclin1和LC3表達(dá)上調(diào)，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)。表明As2O3能通過(guò)自噬介導(dǎo)K562和K562/ADM細(xì)胞死亡，而抗凋亡蛋白Bcl-2對(duì)自噬起調(diào)控作用。

1.4 下調(diào)融合蛋白BCR-ABL水平

研究表明，As2O3對(duì)野生型和T315I突變的伊馬替尼耐藥細(xì)胞內(nèi)BCR-ABL的mRNA表達(dá)無(wú)影響，但能降低BCR-ABL的蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)凋亡[16]。由于突變體細(xì)胞株內(nèi)還原型谷胱甘肽（GSH）含量低于野生型，同劑量As2O3可完全與突變細(xì)胞株內(nèi)巰基作用，使GSH氧化還原系統(tǒng)酶失去對(duì)活性氧的代謝能力，更易促發(fā)凋亡，從而對(duì)As2O3產(chǎn)生更高的敏感性。自噬途徑是真核細(xì)胞清除衰老和崩解的細(xì)胞器或局部細(xì)胞蛋白的主要方式之一。研究證明，在K562細(xì)胞中，As2O3可誘導(dǎo)高活性的自噬降解BCR-ABL。利用RNAi干擾Beclin1、Atg7、P62/SQSMT1等基因抑制自噬，使用特異性抑制劑將溶酶體中組織蛋白酶B抑制，均能逆轉(zhuǎn)BCR-ABL降解[17]。在激光共聚焦顯微鏡下可看到BCR-ABL與P62/SQSTM1、溶酶體共定位。因此As2O3可通過(guò)自噬的方式降解BCR-ABL。

2 雌黃

雌黃也稱(chēng)石黃、黃金石，是與雄黃共生的砷類(lèi)礦石，主要成分是As2S3。《神農(nóng)本草經(jīng)》中雌黃被列為中品?！侗静菥V目》《千金翼方》等也對(duì)雌黃入藥有所記載，能解毒、殺蟲(chóng)、消腫。2000年，研究報(bào)道了首例As2S3治療APL取得血液學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)與分子生物學(xué)完全緩解[18]。近年來(lái)，針對(duì)雌黃治療CML的研究主要集中在納米雌黃上。由于傳統(tǒng)雌黃顆粒較大、不溶于水、生物利用度低，臨床運(yùn)用受限。林梅等[19]運(yùn)用納米技術(shù)將雌黃制成納米粒，采用透射電鏡、X射線能譜進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)納米粒在不改變As2S3含量基礎(chǔ)上，顯著降低雌黃粒徑，提高生物利用度。此外，納米雌黃可抑制K562細(xì)胞增殖，激活凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，調(diào)控端粒酶活性等，在抗CML方面作用優(yōu)于傳統(tǒng)雌黃[19-22]。

2.1 誘導(dǎo)凋亡

2.1.1 調(diào)控凋亡相關(guān)基因表達(dá)

Survivin是凋亡抑制因子家族成員，能直接結(jié)合Caspase-3、Caspase-7，并抑制其活性[23]。納米雌黃能抑制K562增殖并誘導(dǎo)凋亡，效果優(yōu)于雌黃[20，22]。其機(jī)制是下調(diào)抗凋亡基因Survivin和Bcl-2表達(dá)，同時(shí)上調(diào)促凋亡基因Bax表達(dá)，從而誘導(dǎo)凋亡[19-20]。

2.1.2 下調(diào)端粒酶活性

端粒酶在腫瘤細(xì)胞中被過(guò)度激活，以彌補(bǔ)細(xì)胞分裂導(dǎo)致的端粒縮短，是細(xì)胞始終維持分裂狀態(tài)而不發(fā)生凋亡。納米雌黃能抑制端粒酶基因的表達(dá)、下調(diào)端粒酶活性而誘導(dǎo)凋亡，效果優(yōu)于傳統(tǒng)雌黃[19，21]。

3 雄黃

雄黃也是一種含砷礦物藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。雄黃主要成分為As4S4，對(duì)CML也具有良好的治療效果，目前已知的作用機(jī)理如下。

3.1 促進(jìn)凋亡

3.1.1 下調(diào)miRNA表達(dá)

MicroRNA（miR）是一種內(nèi)源性非編碼的小分子RNA，直接結(jié)合靶基因，對(duì)其mRNA進(jìn)行剪切修飾或抑制翻譯過(guò)程調(diào)控基因的表達(dá)，在K562細(xì)胞中，BCR-ABL下游分子RalA是miR181a的直接靶點(diǎn)，過(guò)表達(dá)的miR181a直接靶向RalA基因下調(diào)RalA的mRNA和蛋白表達(dá)，從而抑制細(xì)胞周期并誘導(dǎo)凋亡[24]。Gong等[25]發(fā)現(xiàn)，雄黃能以劑量依賴的方式降低K562細(xì)胞中miR181的表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)Bcl-2，增強(qiáng)Casepase-3活性，誘導(dǎo)凋亡。在過(guò)表達(dá)miR181的K562中，加入雄黃可抑制miR181的過(guò)表達(dá)而使凋亡增加。

3.1.2 下調(diào)端粒酶活性

端粒是存在于染色體末端的DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體，與端粒相關(guān)蛋白共同保護(hù)染色體的完整性，還能控制細(xì)胞周期。正常細(xì)胞中端粒會(huì)隨著細(xì)胞分裂而縮短，但在腫瘤細(xì)胞中，由于端粒酶被激活，端粒始終保持較短的長(zhǎng)度使細(xì)胞不斷分裂[26]。雄黃能以劑量依賴的方式抑制K562細(xì)胞中的端粒酶活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生[27]。

3.1.3 調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子

STAT5是BCR-ABL下游蛋白分子，被JAK磷酸化后將BCR-ABL致癌信號(hào)傳到細(xì)胞核內(nèi)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡變。雄黃能降低JAK2表達(dá)，抑制STAT5的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，同時(shí)上調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá)，最終激活Caspase-3、降解PARP，引起細(xì)胞凋亡[28]。

3.2 降解BCR-ABL

3.2.1 泛素化降解BCR-ABL

泛素-蛋白酶體通路是細(xì)胞選擇性降解受體酪氨酸激酶的主要途徑，其降解過(guò)程包括2個(gè)階段：第一個(gè)階段是泛素與底物共價(jià)連接使底物帶上泛素化標(biāo)記，第二個(gè)階段是泛素化的底物通過(guò)內(nèi)吞噬進(jìn)入細(xì)胞，在蛋白酶體內(nèi)水解成多肽或氨基酸[29]。c-CBL蛋白是造血組織及其他組織中廣泛表達(dá)的主要細(xì)胞質(zhì)蛋白，該蛋白具有保守的氨基端。氨基端有2個(gè)重要的結(jié)構(gòu)域，一個(gè)是酪氨酸激酶結(jié)合（TKB）域，另一個(gè)是C3HC4鋅結(jié)合環(huán)指（RF）結(jié)構(gòu)域。TKB域主要與酪氨酸激酶或其他底物結(jié)合，RF域與泛素結(jié)合酶E2相結(jié)合，兩結(jié)構(gòu)的存在使其具有E3連接酶活性，從而介導(dǎo)泛素化，最終使底物降解[30]。

Mao等[30]研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，雄黃組c-CBL含量升高，而B(niǎo)CR-ABL含量降低。構(gòu)建c-CBL過(guò)表達(dá)的K562細(xì)胞模型，觀察到BCR-ABL含量降低，而通過(guò)siRNA敲除c-CBL的K562細(xì)胞，BCR-ABL含量升高。表明c-CBL確實(shí)影響B(tài)CR-ABL含量。為證實(shí)c-CBL介導(dǎo)BCR-ABL泛素化降解的假設(shè)，構(gòu)建野生型和c-CBL突變的K562細(xì)胞模型，野生型細(xì)胞中，BCR-ABL泛素化降解水平高于突變型。通過(guò)對(duì)c-CBL代謝情況分析，發(fā)現(xiàn)雄黃并不能促進(jìn)c-CBL表達(dá)，而是通過(guò)抑制其泛素化降解的方式升高c-CBL的水平。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，雄黃靶向于RF結(jié)構(gòu)域，證明其通過(guò)介導(dǎo)泛素化-蛋白體途徑降解BCR-ABL。

3.2.2 自噬性降解BCR-ABL

小窩蛋白（Caveolin）是由Caveolin基因家族編碼的分子量為21～24 kD膜蛋白，存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞膜[31]。Cav-1基因是Caveolin基因家族成員之一，是胞膜窖主要結(jié)構(gòu)成分，與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及多藥耐藥有關(guān)[32]。Shi等[33]發(fā)現(xiàn)，雄黃納米粒處理后K562細(xì)胞BCR-ABL和磷酸化BCR- ABL蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，雄黃納米?？赏ㄟ^(guò)抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路，提高Cav-1蛋白表達(dá)，激活K562細(xì)胞自噬，促使融合蛋白降解。

4 雄黃微生物轉(zhuǎn)化液

雄黃雖然具有良好的藥用價(jià)值，但其溶解度極低，難以應(yīng)用于臨床。為改善雄黃的難溶性，對(duì)雄黃及相關(guān)藥物進(jìn)行二次開(kāi)發(fā)和改良，本實(shí)驗(yàn)室利用氧化亞鐵硫桿菌，開(kāi)發(fā)出一整套微生物浸出工藝，成功將雄黃經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化得到雄黃微生物轉(zhuǎn)化液（RTS）[34]，顯著提高雄黃的生物利用度[35-37]，其抗肺癌、肝癌和白血病效果優(yōu)于傳統(tǒng)雄黃及As2O3[35-40]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，RTS對(duì)CML及多藥耐藥CML均有較好的生長(zhǎng)抑制效果，主要涉及調(diào)控以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。

4.1 調(diào)控多藥耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)

多藥耐藥產(chǎn)生的機(jī)理包括藥物運(yùn)轉(zhuǎn)體的改變、藥物在細(xì)胞內(nèi)代謝變化、藥物在細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)變化等。其中，P-糖蛋白（P-gp）是最受關(guān)注的靶點(diǎn)。P-gp作為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)泵，當(dāng)其構(gòu)象改變時(shí)會(huì)將藥物泵出細(xì)胞外，使胞內(nèi)藥物濃度降低，從而降低抗腫瘤效應(yīng)[41]。研究表明，0.2 μg/mL RTS作用4 h后，能下調(diào)K562/ADM細(xì)胞多藥耐藥基因1的mRNA水平，降低P-gp的表達(dá)，而As2O3和雄黃無(wú)此作用。細(xì)胞內(nèi)砷含量測(cè)定結(jié)果顯示，用0.2 μg/mL As2O3、雄黃、RTS作用K562/ADM細(xì)胞4 h，RTS處理的細(xì)胞內(nèi)砷含量分別是As2O3和雄黃的2、16倍[35]。

4.2 增加細(xì)胞對(duì)砷的敏感性

水通道蛋白9（AQP9）是一種與砷跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的水通道蛋白，與白血病細(xì)胞對(duì)砷劑的敏感性有關(guān)[42]。Wang等[35]發(fā)現(xiàn)，相較于As2O3和雄黃，RTS能顯著提高K562、K562/ADM細(xì)胞中AQP9的mRNA和蛋白表達(dá)，增加2種細(xì)胞內(nèi)砷蓄積量，且相同時(shí)間內(nèi)RTS在K562/ADM細(xì)胞中蓄積量遠(yuǎn)高于K562。

4.3 激活自噬

Wang等[37]研究發(fā)現(xiàn)，RTS、As2O3、雄黃均能以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制K562和K562/ADM細(xì)胞增殖，但RTS效果優(yōu)于As2O3和雄黃，且RTS對(duì)K562/ADM比對(duì)K562作用更顯著。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RTS可激活自噬并降解融合蛋白BCR-ABL。RTS處理K562/ADM后，自噬泡增多，LC3-Ⅱ、Beclin1和mTOR表達(dá)升高，但自噬抑制劑氯喹（CQ）可部分逆轉(zhuǎn)這些現(xiàn)象的產(chǎn)生，表明RTS可激活自噬。同時(shí)，cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)升高，Bcl-2和BCR-ABL蛋白表達(dá)下降；使用CQ抑制自噬后，這種效應(yīng)仍可被逆轉(zhuǎn)。免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RTS能增強(qiáng)LC3、P62/SQTM1與BCR-ABL的共定位，表明RTS能激活CML細(xì)胞自噬，可促進(jìn)BCR-ABL的降解，發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。

5 小結(jié)

砷劑雌黃和雄黃在白血病治療中有較好的療效，能引發(fā)包括CML細(xì)胞在內(nèi)的白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡、自噬或分化，同時(shí)不良反應(yīng)和毒副作用較As2O3略低。這些成果都使砷劑在治療白血病的研究和應(yīng)用方面受到普遍關(guān)注。雄黃和雄黃復(fù)方有較好的臨床價(jià)值，但雄黃的不溶性使其臨床應(yīng)用受到嚴(yán)重制約。本實(shí)驗(yàn)室將生物冶金技術(shù)引入雄黃炮制過(guò)程，借助特定微生物得到RTS，證實(shí)其可通過(guò)激活凋亡和自噬有效抑制CML的增殖，并且在解決耐藥性上具有較好的研究前景。我們近期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RTS對(duì)伊馬替尼耐藥的CML細(xì)胞也具有較強(qiáng)的增殖抑制作用和融合蛋白降解效應(yīng)。今后我們將結(jié)合T315I突變的BCR-ABL陽(yáng)性CML細(xì)胞模型，繼續(xù)進(jìn)行深入研究，為RTS相關(guān)研究和雄黃二次開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

[1] CHEREDA B, MELO J V. Natural course and biology of CML[J]. Annals of Hematology,2015,94(Suppl2)：S107-121.

[2] COQUERET O. Linking cyclins to transcriptional control[J]. Gene,2002,299(1/2)：35-55.

[3] 王凡平,張婧婧,房麗敏,等.三氧化二砷對(duì)K562細(xì)胞增殖作用的影響和機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2016,24(6)：1725-1729.

[4] 王愿,楊潔,李杰,等.三氧化二砷對(duì)K562細(xì)胞增殖抑制作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2017,25(1)：90-93.

[5] 陳智超,大西一功,游泳,等.三氧化二砷誘導(dǎo)慢性髓系白血病細(xì)胞G2/M周期停滯及其機(jī)理[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2003,32(6)：610-612,615.

[6] MASUMOTO J, TANIGUCHI S, AYUKAWA K, et al. ASC, a novel 22-kDa protein, aggregates during apoptosis of human promyelocytic leukemia HL-60 cells[J]. The Journal of Biological Chemistry, 1999,274(48)：33835-33838.

[7] LI H, WANG Y, XU W, et al. Arsenic trioxide inhibits DNA methyltransferase and restores TMS1 gene expression in K562 cells[J]. Acta Haematologica,2015,133(1)：18-25.

[8] YOSHIDA K, MIKI Y. The cell death machinery governed by the p53 tumor suppressor in response to DNA damage[J]. Cancer Science, 2010,101(4)：831-835.

[9] 王穎超.三氧化二砷對(duì)慢粒細(xì)胞系K562的促凋亡作用及其機(jī)理研究[D].長(zhǎng)沙：中南大學(xué),2003.

[10] WANGD H, WEI H L, ZHAO H S, et al. Arsenic trioxide overcomes apoptosis inhibition in K562/ADM cells by regulating vital components in apoptotic pathway[J]. Pharmacological Research, 2005,52(5)：376-385.

[11] XIA Y, FANG H, ZHANG J, et al. Endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis in imatinib-resistant leukemic K562-r cells triggered by AMN107 combined with arsenic trioxide[J]. Experimental Biology and Medicine (Maywood, NJ),2013,238(8)：932-942.

[12] XU W, WEI W, YU Q, et al. Arsenic trioxide and bortezomib interact synergistically to induce apoptosis in chronic myelogenous leukemia cells resistant to imatinib mesylate through Bcr/Abldependent mechanisms[J]. Molecular Medicine Reports, 2014,10(3)：1519-1524.

[13] LI N, GUAN X, LI F, et al. Vorinostat enhances chemosensitivity to arsenic trioxide in K562 cell line[J]. Peer J,2015,3：e962.

[14] ZHENG K, HE Z, KITAZATO K, et al. Selective autophagy regulates cell cycle in cancer therapy[J]. Theranostics,2019,9(1)：104-125.

[15] CHENG J, WEI H L, CHEN J, et al. Antitumor effect of arsenic trioxide in human K562 and K562/ADM cells by autophagy[J]. Toxicology Mechanisms and Methods,2012,22(7)：512-519.

[16] 劉金花.三氧化二砷對(duì)Bcr-Abl耐藥突變細(xì)胞株抑制作用及其作用機(jī)制[D].長(zhǎng)春：東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[17] GOUSSETIS D J, GOUNARIS E, WU E J, et al. Autophagic degradation of the BCR-ABL oncoprotein and generation of antileukemic responses by arsenic trioxide[J]. Blood,2012,120(17)：3555-3562.

[18] 陸道培,江濱,邱鏡瀅.三硫化二砷治療急性早幼粒細(xì)胞白血病首例報(bào)告[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,32(3)：256-257.

[19] 林梅.雌黃納米粒的研制及其體外抗腫瘤作用和分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].南京：東南大學(xué),2006.

[20] 林梅,張東生,李華,等.雌黃納米粒對(duì)K562細(xì)胞的體外治療作用及其機(jī)制[J].納米技術(shù)與精密工程,2008,6(1)：14-19.

[21] 林梅,張東生.納米雌黃對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性的影響[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2007,11(6)：5-7.

[22] LIN M, WANG Z, ZHANG D. Preparation of orpiment nanoparticles and their cytotoxic effect on cultured leukemia K562 cells[J]. Journal of Nanoscience and Nanotechnology,2007,7(2)：490-496.

[23] SHIN S, SUNG B J, CHO Y S, et al. An anti-apoptotic protein human survivin is a direct inhibitor of caspase-3 and -7[J]. Biochemistry,2001,40(4)：1117-1123.

[24] FEI J, LI Y, ZHU X, et al. miR-181a post-transcriptionally downregulates oncogenic RalA and contributes to growth inhibition and apoptosis in chronic myelogenous leukemia (CML)[J]. PloS One, 2012,7(3)：e32834.

[25] GONG J, ZHENG S, ZHANG L, et al. Induction of K562 Cell Apoptosis by As4S4via down-regulating miR181[J]. Medical Science Monitor：Iternational Medical Journal of Experimental and Clinical Research,2017,23：144-150.

[26] WANG L, XING H, ZHANG X, et al. The role of telomeres and telomerase in hematologic malignancies and hematopoietic stem cell transplantation[J]. Journal of Hematology & Oncology,2014, 7：61.

[27] 李靜,劉陜西,張梅,等.雄黃對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性和凋亡的作用[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,24(17)：1581-1583.

[28] 李俊娥,孫關(guān)林,吳英理,等.As2S2誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制初步研究[J].中華腫瘤雜志,2003,25(3)：16-20.

[29] 董合玲,徐曉陽(yáng).泛素-蛋白酶體途徑的組成及其生物功能[J].南京體育學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2011,10(3)：35-37.

[30] MAO J H, SUN X Y, LIU J X, et al. As4S4targets RING-type E3 ligase c-CBL to induce degradation of BCR-ABL in chronic myelogenous leukemia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2010,107(50)：21683- 21688.

[31] 劉艷,王洋,史丹,等.腫瘤細(xì)胞的自噬和窖蛋白-1[J].生物工程學(xué)報(bào),2012,28(8)：912-917.

[32] SHATA M, LISCOVITCH M. Caveolin-1：a tumor-promoting role in human cancer[J]. International Journal of Radiation Biology, 2008,84(3)：177-189.

[33] SHI D, LIU Y, XI R, et al. Caveolin-1 contributes to realgar nanoparticle therapy in human chronic myelogenous leukemia K562 cells[J]. International Journal of Nanomedicine,2016,11：5823- 5835.

[34] CHEN P, YAN L, LENG F, et al. Bioleaching of realgar by Acidithiobacillusferrooxidans using ferrous iron and elemental sulfur as the sole and mixed energy sources[J]. Bioresource Technology,2011,102(3)：3260-3267.

[35] WANG X, ZHANG X, XU Z, et al. Reversal effect of arsenic sensitivity in human leukemia cell line K562 and K562/ADM using realgar transforming solution[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin,2013,36(4)：641-648.

[36] SONG P, HAI Y, WANG X, et al. Realgar transforming solution suppresses angiogenesis and tumor growth by inhibiting VEGF receptor 2 signaling in vein endothelial cells[J]. Archives of Pharmacal Research,2018,41(4)：467-480.

[37] WANG X, CHEN B, ZHAO L, et al. Autophagy enhanced antitumor effect in K562 and K562/ADM cells using realgar transforming solution[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy & Biomedecine & Pharmacotherapie,2018,98：252-264.

[38] ZHANG X, XIE Q J, WANG X, et al. Biological extraction of realgar by Acidithiobacillusferrooxidans and its in vitro and in vivo antitumor activities[J]. Pharmaceutical Biology,2010,48(1)：40- 47.

[39] XIE Q J, CAO X L, BAI L, et al. Anti-tumor effects and apoptosis induction by Realgar bioleaching solution in Sarcoma-180 cells in vitro and transplanted tumors in mice in vivo[J]. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2014,15(6)：2883-2888.

[40] SONG P, CHEN P, WANG D, et al. Realgar transforming solution displays anticancer potential against human hepatocellular carcinoma HepG2 cells by inducing ROS[J]. International Journal of Oncology,2017,50(2)：660-670.

[41] 張罩沐,許長(zhǎng)江,張予.多藥抗藥性產(chǎn)生機(jī)理[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 1994,7(4)：246-249.

[42] LEUNG J, PANG A, YUEN W H, et al. Relationship of expression of aquaglyceroporin 9 with arsenic uptake and sensitivity in leukemia cells[J]. Blood,2007,109(2)：740-746.

Research Progress inTCM Arsenic for Treatment of BCR-ABL Positive Chronic Myeloid Leukemia

WANG Xin1, TAN Xiangmin1, WANG Meizhu1, LI Hongyu1,2

The BCR-ABL fusion protein is a biomarker of chronic myeloid leukemia (CML), which is currently an important target for drug development and design of CML. TCM arsenic (As2O3) and realgar (As4S4) have been proven to show significantly efficacy in the treatment of CML, which can induce apoptosis or differentiation through many approaches. However, the high toxicity of arsenic and the poor solubility of realgar hamper their clinical application. In this article, the research progress and mechanism of the current TCM arsenic and a novel arsenic agent, realgar transforming solution in the treatment of CML were reviewed, which could provide references for the secondary development and application of TCM arsenic, especially realgar.

arsenic; yellow arsenic; realgar; realgar transforming solution; apoptosis; BCR-ABL; review

R2-05；R285

A

1005-5304(2020)06-0136-05

10.3969/j.issn.1005-5304.201905205

國(guó)家自然科學(xué)基金（81403145、81560715）；國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)－重大新藥創(chuàng)制（2015ZX09501-004-008）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金（lzujbky-2018-136、lzujbky-2017-206）

李紅玉，E-mail：lihy@lzu.edu.cn

（2019-05-15）

（2019-06-06；編輯：華強(qiáng)）