王騰飛，陳胤宏，劉 濤，石炎林，肖安菊

(湖北理工學院 醫(yī)學院，湖北 黃石 435003)

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f.)屬于衛(wèi)矛科，多年生藤本植物。雷公藤味苦、辛、性涼、有大毒，具有祛風除濕、消腫止痛、清熱解毒等功效。臨床常用制劑有雷公藤多苷片、雷絡酯片等。

急性銅中毒會使患者出現(xiàn)惡心、嘔吐、上腹部痛、腹瀉等胃腸刺激癥狀和頭痛、眩暈、虛弱等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀[1-2]?！吨袊幍洹?005年版首次規(guī)定了5種中藥材中Cu的含量不得高于20.0 mg/kg。該限量標準與《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》中所規(guī)定的綠色藥用植物及制劑的重金屬及砷鹽的限量指標相一致。近年來，筆者檢測雷公藤根中Cu的含量，結果發(fā)現(xiàn)Cu的含量超標約1倍，檢測方法是依據(jù)《中國藥典》第1部(2015版)記載[3]。

查閱文獻資料，國內(nèi)尚未報道過雷公藤根中鉛、鎘、銅、汞、砷5種重金屬的含量檢測情況。那么，雷公藤根中高含量的Cu來源于哪個方面？是土壤中Cu的含量高，還是雷公藤對Cu有富集作用？為了保證雷公藤用藥安全，本文擬研究雷公藤種植地的土壤、種植地常見的一年生草本植物青葙、雷公藤制劑工藝第一步85%乙醇提取液和藥渣中Cu的含量[4]，進而評價雷公藤制劑的安全性。

1 材料與儀器

1.1 試驗材料

湖北理工學院種植地的土壤；青葙(種植地里最常見的一年生草本植物)；雷公藤根(扦插生長3年的樣品)；雷公藤根用85%乙醇回流提取的提取液和剩余藥渣。將各樣品平鋪于桌面，自然晾干，粉碎備用；提取液30 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇后，殘留物用甲醇定容10 mL，備用。

1.2 儀器與試劑

儀器：智能樣品處理器(VB24 UP，天津泰斯特儀器有限公司)；消解罐(ETHOS UP，Milestone公司)；原子吸收分光光度計(ICE 3000 SERIES，賽默飛世爾科技公司)。

試劑：硝酸，優(yōu)級純(國藥集團化學試劑有限公司)；銅標準溶液(標準值1 000 μg/mL GBW(E)080121)；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 儀器條件

銅的測定：采用火焰原子吸收分光光度法測定Cu的含量，檢測波長為324.7 nm，工作燈電流為15 mA，帶寬為0.2 nm，采用空氣-乙炔火焰。

2.2 Cu貯備液的制備

精密量取1 000 μg/mL的銅標準溶液適量，用2%的硝酸分別配成每1 mL含銅10 μg的貯備液。

2.3 樣品溶液的制備

取供試品粗粉0.2 g，精密稱定，置于聚四氟乙烯消解管內(nèi)，加硝酸8 mL混勻，在智能樣品處理器上90 ℃進行預處理，待不再有棕黃色煙冒出時取出，蓋好內(nèi)蓋旋緊外套，并擦干外壁水，置于微波消解儀內(nèi)按照儀器規(guī)定程序進行消解[5-8]。消解完全后，取消解罐置于處理器上90 ℃緩緩加熱，濃縮至液體只剩2～3 mL，冷卻，用水轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻即得供試品，同法制備試劑空白溶液。

2.4 方法學考察

1)線性關系考察。分別精密吸取銅貯備液適量，用2%硝酸將銅配成每1 mL分別含銅0，0.05，0.2，0.4，0.6，0.8 μg的溶液對銅進行測定，以吸光度y對濃度x求出線性回歸方程為：y=0.1753x+0.0016，R2= 0.9998，結果表明銅元素濃度在0～0.8 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關系。銅的標準曲線如圖1所示。

圖1 銅的標準曲線

2)精密度試驗。精密吸取同一對照品溶液20 μL，連續(xù)進樣5次，計算銅濃度的相對標準偏差RSD為1.54%，表明儀器的精密度良好。

3)穩(wěn)定性試驗。取同一供試品溶液，分別于0，4，8，12，24 h進樣測定，計算銅濃度的RSD為1.39%，表明供試品溶液在配制后的24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4)重復性試驗。分別精密稱取雷公藤根樣品粉末5份，每份約0.2 g，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算銅濃度的RSD為2.36%，表明本法重復性良好。

5)加樣回收試驗。雷公藤根粉末0.2 g，共6份，精密稱定，精密加入銅貯備液1 mL，2 mL各3份[7]，按“2.3”方法制備供試液。分別代入銅回歸方程，計算銅的平均回收率為99.74%，RSD為1.53%，銅加樣回收試驗結果見表1。

表1 銅加樣回收試驗結果(n=3)

2.5 樣品含量測定

稱取土壤、雷公藤根、雷公藤根85%乙醇回流提取后的藥渣、青葙等樣品粗粉0.2 g和提取液1 mL，精密稱定，按“2.3”方法制備供試液，按“2.1”儀器條件測定，分別代入銅的回歸方程。各樣品中Cu的含量見表2。

表2 各樣品中Cu的含量(n=3)

3 討論

3.1 測定方法的影響

相對砷汞而言，銅離子2%硝酸溶液性質(zhì)穩(wěn)定，用火焰原子吸收分光光度法測定，操作簡便，重現(xiàn)性好。

3.2 Cu超標原因

由表2數(shù)據(jù)可知，種植地土壤、生長3年的雷公藤根及基地常見的1年生草本植物青葙中的Cu含量都已超出《中國藥典》標準，但是符合土壤環(huán)境質(zhì)量二級標準(≤50 mg/kg)。雷公藤藥材中銅偏高的主要原因是土壤中含銅量偏高所致。數(shù)據(jù)顯示3年生雷公藤根中Cu含量高出一年生青葙13.571 mg/kg，說明雷公藤根對土壤中的銅也有一定的富集作用。

3.3 雷公藤制劑安全性評價

由表2數(shù)據(jù)可知，盡管藥材中Cu的含量超標，但提取液中Cu的含量在安全范圍內(nèi)。因為雷公藤的生長周期是6年，而本研究選取的是生長3年的雷公藤根，故應嚴密關注雷公藤生長過程中Cu的富集情況，確保雷公藤制劑用藥安全。

4 結束語

測定結果顯示，Cu在雷公藤種植基地的土壤中含量為26.282 8 mg/kg，青葙中含量為23.171 6 mg/kg，3年生雷公藤根中含量為36.742 2 mg/kg，藥渣中含量為20.883 3 mg/kg，提取液中含量為6.975 0 mg/kg。除提取液外，其他樣品中Cu的含量均超出了《中國藥典》標準20 mg/kg，超標的主要原因是土壤中銅的含量過高，但雷公藤制劑中Cu含量在安全范圍內(nèi)。

在藥材種植中，土壤、環(huán)境中有毒重金屬的含量超標會影響藥材的質(zhì)量。因此，在種植藥材選址過程中，應該加大對土壤、水中有毒重金屬含量的檢測和控制[9]。