廖麗芬，曾 丹

(桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院 a.檢驗科；b.優(yōu)生遺傳科，廣西 桂林 541001)

地中海貧血又名海洋性貧血(簡稱“地貧”)，是我國最常見的血紅蛋白病，由于合成血紅蛋白的珠蛋白鏈異常所致。該病屬常染色體溶血性貧血疾病，具有單基因隱性遺傳特征。進行婚前和產(chǎn)前地貧篩查，預防基因缺陷和提前干預是其重要手段[1]。目前篩查較為理想的方法是進行血紅蛋白電泳，能初步判斷結果為正?；蚴菙y帶者。由于地貧受出生環(huán)境、地域分布及種族等因素影響，不同地區(qū)人群存在差異，故有必要建立適宜當?shù)氐难t蛋白電泳參考區(qū)間。HbA2相對的含量檢測在地中海貧血篩查中是重要指標，是受檢者的表型特征之一[2]。當女性結果為陰性時，其出生的孩子一般不存在重型血紅蛋白病的風險；當女方結果是陽性時，要求告知其配偶進行篩查[3-4]；若男方與女方為同型地貧，則要進行產(chǎn)前診斷。認真做好地貧篩查工作，防止重型患兒的出生，對家庭和社會都具有重要意義[5]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2017年9月至2019年9月到桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院優(yōu)生咨詢及產(chǎn)前檢查的人群中隨機選擇符合條件588例(血常規(guī)正常、血紅蛋白電泳正常、地貧篩查正常、血清鐵蛋白正常等)為調查組，其中女306例，男282例，年齡21～45歲。另隨機選擇體檢、婚檢、孕檢320例作為驗證組，其中女174例，男146例，年齡22～43歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義，有可比性。

1.2 儀器與試劑

法國Sebia Capillarys2 Flex型毛細管電泳儀及配套的質控品和檢測試劑。每次按SOP文件開機，再室內質控，結果在控后進行標本檢測。在控判斷依據(jù)：Z1到Z15共15個區(qū)，各個區(qū)圖像背景干凈，HbA和HbA2條帶清晰且未出現(xiàn)其他條帶，HbA的尖峰在Z9區(qū)，HbA2的尖峰在Z3區(qū)，圖像無峰偏移等。

1.3 方法

清晨抽取3管EDTA-K2抗凝的全血各2 ml，分別進行血紅蛋白電泳、血常規(guī)以及基因檢測；血紅蛋白電泳在Capillarys2 flex全自動毛細管電泳儀檢測；血常規(guī)在XN2800儀器檢測；地貧基因采用亞能生物公司(深圳)全血DNA提取試劑盒，用gap-PCR方法和PCR-反向印記雜交法對基因缺失及點突變情況進行檢測；血清鐵蛋白用血清標本在羅氏E601進行電化學發(fā)光檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 調查組各年齡段HbA參考范圍

對588例婚前和產(chǎn)前人群的HbA進行分析，年齡組間及同年齡組男女間的HbA值比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 調查組各年齡段HbA參考范圍

2.2 調查組各年齡段HbA2參考范圍

各年齡組間HbA2值比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而相同年齡組間男女性HbA2值比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 調查組各年齡段HbA2參考范圍

2.3 調查組HbA、HbA2參考范圍

把無顯著性差異的年齡段合并后分析，HbA男與女比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但男女組間HbA2差異有統(tǒng)計學意義(t=-3.717,P<0.01)，且男性高于女性。詳見表3。

表3 調查組HbA、HbA2參考范圍

與女性比較，*P>0.05；P<0.01

2.4 對結果進行驗證

應用本次新建立的參考范圍對驗證組進行驗證，3例HbA2結果在新范圍內，但基因檢測為異常，其中1例為αβ復合型地貧，另外2例為靜止型α-地貧(αwSα/αα和-α3.7/αα)。 3例HbA2大于參考值上限，基因檢測為β-地貧(β17M/βN)，9例HbA2小于參考值下限，基因檢測為α-地貧(-SEA/αα或αcSα/αα)。符合317例，符合率達99.06%；不符合3例，類型主要為靜止型α-地貧。

3 討論

血紅蛋白電泳能夠定量檢測HbA和HbA2等含量，通過對比正常參考范圍可以初步判斷結果是否正常，如果異常，可以初分為α-地貧或β-地貧，快速地篩查高危夫婦(同型地貧)。地貧是單基因隱性遺傳，同型夫婦生育重型患兒的概率為每次每胎25%，中間型為50%，輕型為25%。所以，第一次初篩判斷攜帶者，是婚前產(chǎn)前檢查最有效的干預措施之一。

廣西實施免費婚檢后，為當?shù)剡m宜人群減輕了部分經(jīng)濟負擔，由于桂林地區(qū)經(jīng)濟條件相對落后，以及遺傳知識的相對缺乏，以至于仍然有部分人群未進行篩查，加大了中、重型地貧患兒出生的風險，加重了家庭和社會的負擔[6]。統(tǒng)計分析適宜當?shù)鼗榍昂彤a(chǎn)前的血紅電泳參考范圍，為是否需要進行產(chǎn)前診斷提供指導[7]。本調查顯示，男性HbA2水平均高于女性組，原因可能為成年健康男性血紅蛋白含量高于女性。HbA2若低于參考值下限，則α-地貧及缺鐵性貧血可能性大；HbA2若高于參考值上限，主要考慮為β地貧的可能。由于HbA是機體血紅蛋白比例最大的組成部分，若降低則考慮是否存在血紅蛋白病或β地貧的可能。目前很多用此儀器的醫(yī)院采用的參考范圍[8]為：HbA：96.5%～97.5%；HbA2：2.5%～3.5%，HbF:0～2.0%，但李顯航等[9]建立了當?shù)鼐唧w研究對象的參考值范圍，我室新建立的孕前及婚前人群的參考范圍與之較有不同。對無顯著性差異的各年齡組間HbA、HbA2分別進行合并后建立的孕前及婚前人群參考范圍，通過驗證組結果分析，新建立的參考范圍可以作為桂林地區(qū)婚前和產(chǎn)前人群地貧篩查的參考指標。地貧不可根治，但可防可控，嚴把初篩防線，降低出生缺陷率，可提高健康人口出生率。