李筱玲，鄧寒霜，侯雯倩，徐 航

(商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西 商洛 726000)

消暑丸處方來(lái)源于《太平惠民和劑局方》卷二，其傳統(tǒng)制法為半夏(醋3 L，煮干)、甘草(生)、茯苓(去皮)各24 g，研為細(xì)末，以生姜汁煮面糊為丸，如梧桐子大，每次服50粒，用溫開(kāi)水沖服。消暑丸是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)中的經(jīng)典中藥制劑之一，具有明確的化痰消飲、健脾利濕之功效可以用于治療夏日飲水過(guò)多、脾失健運(yùn)、痰濕內(nèi)阻、嘔逆瀉利等癥，對(duì)因傷暑而發(fā)熱頭痛的患者療效優(yōu)佳，具有良好的推廣開(kāi)發(fā)價(jià)值。

丸劑是最古老的中藥劑型之一，是以蜂蜜等輔料為黏合劑將中藥提取液或中藥粉末搓成球形的固體制劑[1]，由于制備工藝簡(jiǎn)單，療效確切而沿用至今。丸劑因易霉變、吸收慢，口味不佳，用藥周期長(zhǎng)，服用量大，攜帶、貯藏、運(yùn)輸不便等缺陷，限制了其推廣應(yīng)用[2]。中藥顆粒劑是在湯劑和糖漿劑的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的劑型。顆粒劑是將中藥提取液濃縮后制成清膏，再加以適當(dāng)輔料、潤(rùn)濕劑等制成的干燥顆粒狀制劑，具有服用、攜帶、貯藏、運(yùn)輸方便等特點(diǎn)[3～5]。相較于有糖顆粒，中藥無(wú)糖顆粒劑還具有不易潮解、軟化變質(zhì)，存放時(shí)限較長(zhǎng)，藥物單劑包裝質(zhì)量減小，藥物服用、攜帶更為方便等優(yōu)點(diǎn)；使許多兒童、老年人和禁糖患者的用藥限制得以解除[6～8]。本文初步探索了將消暑丸改進(jìn)為無(wú)糖顆粒的基本工藝條件。

1 材料與方法

1.1 材料與藥品

半夏、甘草、茯苓購(gòu)自陜西省商洛市康天大藥房，經(jīng)商洛學(xué)院鄧寒霜執(zhí)業(yè)藥師鑒定為天南星科植物半夏(Pinelliaternate(Thunb.) Breit.)的干燥塊根、豆科甘草屬植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根、多孔菌科臥孔菌屬真菌茯苓(Poriacocos(Schw.) Wolf)的干燥菌核。醋制半夏為實(shí)驗(yàn)室自制。

D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品(廣州分析測(cè)試中心科力技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，批號(hào)160525)、蘆丁對(duì)照品(合肥博美生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)153-18-4)、L-纈氨酸對(duì)照品(合肥博美生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)72-18-4)；乙醇(利安隆博華天津醫(yī)藥化學(xué)有限公司)、硫酸(西隴化工股份有限公司)、亞硝酸鈉(天津博迪化工有限公司)、苯酚(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)、硝酸鋁(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)、磷酸二氫鉀(天津大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站)、氫氧化鈉(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)、茚三酮(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)等。

1.2 儀器與設(shè)備

電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司 型號(hào)LA230S)、微型粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司 型號(hào)FW80)、恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司 型號(hào)HH-66)、超聲提取器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司 型號(hào)KH5200E)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司 型號(hào)R206D)、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司 型號(hào)UV-1780)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 炮制方法 按一斤半夏四升醋的比例，取半夏適量，加入米醋，置適宜容器內(nèi)煮至醋干為止，即得醋制半夏。

1.3.2 藥材提取物的制備 按原處方比例取醋制半夏、甘草、茯苓適量，加10倍量水，超聲提取1 h后以細(xì)紗布進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；濾渣加原藥5倍量水，再次超聲提取30 min后，以細(xì)紗布進(jìn)行過(guò)濾，濾渣另行存放備用，濾液收集后與前次濾液合并濃縮至相對(duì)密度為1.3左右，即得藥材水提物。

取前項(xiàng)提取后殘?jiān)?，加原?0倍量乙醇，超聲提取1 h后以細(xì)紗布進(jìn)行過(guò)濾，濾液收集備用；濾渣中按原來(lái)藥材總量1 ∶5的比例加入乙醇，再次用超聲波處理30 min后以細(xì)紗布進(jìn)行過(guò)濾，棄去濾渣，濾液收集后與前次濾液合并濃縮至相對(duì)密度為1.3左右，即得藥材醇提物。藥材水提物與醇提物混合均勻即得藥材提取物[9～11]。

表1 消暑丸顆粒制備工藝優(yōu)選試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

表2 消暑丸顆粒制備工藝優(yōu)選試驗(yàn)方案

1.3.3 無(wú)糖顆粒制備工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 取藥材提取物適量，以可溶性淀粉為輔料，以不同濃度的乙醇為潤(rùn)濕劑，照表1、表2中規(guī)定，混入適量輔料與潤(rùn)濕劑，不斷攪拌至混合物呈現(xiàn)“手捏成團(tuán)、輕壓即散”的狀態(tài)后，以標(biāo)準(zhǔn)制粒篩進(jìn)行制粒。收集所得顆粒，置恒溫干燥箱中，在不高于50℃的溫度下進(jìn)行干燥，干燥后即為消暑丸無(wú)糖顆粒成品。詳細(xì)制備工藝參數(shù)優(yōu)選正交試驗(yàn)因素和試驗(yàn)水平設(shè)計(jì)及試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)見(jiàn)表1、表2。

1.3.4 含量測(cè)定方法

(1)茯苓多糖檢測(cè)[12]

供試品溶液的制備 精密稱定消暑丸無(wú)糖顆粒0.5 g，加入0.5 mol·L-1的氫氧化鈉 50 mL，超聲提取0.5 h，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液2 mL于50 mL量瓶中，加水搖勻并定容，即得供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)恒重處理后的D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品約50 mg，用水溶解并定容至50 mL，搖勻，精密量取2 mL置于25 mL容量瓶?jī)?nèi)，加水搖勻并定容，即得對(duì)照品溶液。

校準(zhǔn)曲線的制作 精密量取對(duì)照品溶液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，加5%的苯酚1 mL，混勻，再加入濃硫酸5 mL，混勻，于45℃水浴保溫30 min，取出，冷卻至室溫，以488 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)量各不同濃度對(duì)照品溶液的吸光度。用對(duì)照品溶液的濃度作為X值，用不同濃度對(duì)照品溶液吸光度的檢測(cè)結(jié)果為Y值，制作校準(zhǔn)曲線，得曲線方程為：Y=68.136X-0.0268，R2=0.9964，詳細(xì)情況見(jiàn)圖1。

測(cè)定方法 精密吸取供試品溶液0.2 mL，加水0.8 mL，5%的苯酚1 mL，混勻，加入濃硫酸5 mL，混勻，于45℃水浴保溫30 min，取出，冷卻至室溫，于488 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

含量計(jì)算 茯苓多糖含量(%)=(C×a×V/w)×100%，式中C為提取液中多糖濃度；a為稀釋倍數(shù)；V為提取液體積；w為無(wú)糖顆粒的質(zhì)量。

(2)甘草總黃酮檢測(cè)[13]

供試品溶液的制備 精確稱取消暑丸無(wú)糖顆粒1.0 g，加入60%乙醇30 mL，超聲提取30 min，抽濾，殘?jiān)陨倭?0%的乙醇沖洗，收集濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，以60%乙醇定容至刻度，即得。

對(duì)照品溶液的制備 精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品5 mg，置50 mL容量瓶中，用濃度為60%的乙醇溶液為溶劑溶解對(duì)照品并進(jìn)行定容，即得。

校準(zhǔn)曲線的制作 精密吸取對(duì)照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置于5只容積為10 mL的容量瓶?jī)?nèi)，向上述容量瓶?jī)?nèi)分別加入0.4 mL濃度為5%的亞硝酸鈉溶液，靜止放置6 min后，再向容量瓶?jī)?nèi)分別加入0.4 mL濃度為10%硝酸鋁溶液，靜止放置6 min后，再向各容量瓶?jī)?nèi)加入4 mL濃度為4%的氫氧化鈉溶液，最后加濃度為60%的乙醇溶液到10 mL刻度線，再次靜止放置15 min后，以510 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，用對(duì)照品溶液的濃度作為X值，用不同濃度對(duì)照品溶液吸光度的檢測(cè)結(jié)果為Y值，制作校準(zhǔn)曲線，得曲線方程為：Y=9.702X+0.0019，R2=0.9958 詳細(xì)情況見(jiàn)圖2。

測(cè)定方法 精密量取前述供試品溶液1 mL置于容積為10 mL的容量瓶?jī)?nèi)，加入0.4 mL濃度為5%的亞硝酸鈉溶液，靜止放置6 min后，再加入0.4 mL濃度為10%硝酸鋁溶液，靜止放置6 min后，再加入4 mL濃度為4%的氫氧化鈉溶液，最后加濃度為60%的乙醇溶液到10 mL刻度線，再次靜止放置15 min后，以510 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)量其吸光度。

含量計(jì)算 甘草總黃酮含量(%)=(C×a×V/w)×100%，式中C為提取液中總黃酮濃度；a為稀釋倍數(shù)；V為提取液體積；w為無(wú)糖顆粒的質(zhì)量。

(3)半夏氨基酸檢測(cè)

供試品溶液制備 精密稱取無(wú)糖顆粒1.0 g，以20 mL濃度為50%的乙醇為提取溶劑，在70℃溫度下，用水浴加熱連續(xù)回流提取0.5 h，取出，待冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；濾渣再次以20 mL濃度為50%的乙醇為提取溶劑，在70℃溫度下，用水浴加熱連續(xù)回流提取0.5 h，取出，待冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，將兩次所得濾液進(jìn)行合并，水浴蒸發(fā)溶劑至干。以適量水為溶劑，超聲波處理上述殘?jiān)疗淙咳芙?，再用水做溶劑將其定容?0 mL，即為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的配制 以纈氨酸為對(duì)照品。取對(duì)照品約10 mg，精密稱定重量后，置100 mL容量瓶?jī)?nèi)，以適量水為溶劑溶解，再加水至刻度，即得對(duì)照品溶液。

測(cè)定方法 取容量為50 mL的容量瓶2只，分別精密加入2 mL對(duì)照溶液和4 mL供試品溶液，再向上述容量瓶中分別加入濃度為2.0%的茚三酮溶液1 mL，pH值為6.8的磷酸鹽緩沖溶液2 mL，混合均勻后在沸水中水浴處理15 min，待其冷卻后，以水為溶劑定容到刻度。以568 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)其吸光度。

總氨基酸含量計(jì)算 照下式計(jì)算總氨基酸含量。

總氨基酸含量(mg·g-1)=(C×D×1.024)/W

式中：W為無(wú)糖顆粒質(zhì)量；C為供試品溶液中纈氨酸濃度；D為供試品溶液稀釋倍數(shù)；1.024為以纈氨酸為對(duì)照品，計(jì)算總氨基酸含量的轉(zhuǎn)換系數(shù)[14]。

1.3.5 顆粒劑質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)2015版《中國(guó)藥典》對(duì)顆粒劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的相關(guān)規(guī)定，對(duì)每組處理樣品進(jìn)行檢測(cè)評(píng)分?？偡譃?00分，其中氨基酸含量占30分，總黃酮含量、多糖含量各占15分，顆粒劑的性狀、粒度、水分和溶化性的檢查結(jié)果各占10分，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3[15]。

2 結(jié)果與分析

2.1 顆粒劑質(zhì)量檢查結(jié)果

2.1.1 性狀 不同試驗(yàn)處理所得無(wú)糖顆粒外觀有細(xì)微差異，但均基本符合干燥，粒度、色澤均勻，呈淺紅棕色，無(wú)吸潮、軟化、結(jié)塊、潮解現(xiàn)象等顆粒劑性狀要求，各處理顆粒劑外觀見(jiàn)圖3，具體評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表4。

2.1.2 粒度 取供試品20 g，稱定重量，置于五號(hào)藥篩中，保持水平狀態(tài)過(guò)篩，左右往返，邊篩邊輕叩3 min；將未通過(guò)五號(hào)篩的供試品置于一號(hào)藥篩中，使用方法相同，邊篩邊輕叩3 min。能通過(guò)一號(hào)篩且不能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒為合格品，粒度檢測(cè)不合格率不得大于15%[16]，檢查結(jié)果見(jiàn)表4。

2.1.3 水分 按照《中華人民共和國(guó)藥典》水分測(cè)定法項(xiàng)目規(guī)定進(jìn)行檢查，無(wú)糖顆粒的水分含量不能大于8.0%[16]，檢查結(jié)果見(jiàn)表4。

2.1.4 溶化性 取供試品各5 g，加熱水100 mL，攪拌5 min，立即觀察?？扇茴w粒應(yīng)全部溶化或輕微渾濁[16]，檢查結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 無(wú)糖顆粒質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4 顆粒劑外觀、粒度、水分、溶化性檢查及評(píng)分結(jié)果

2.2 含量測(cè)定

照1.3.4項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行各活性成分含量測(cè)定并評(píng)分，結(jié)果見(jiàn)表5。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

照1.3.5項(xiàng)下規(guī)定，對(duì)各處理所得顆粒進(jìn)行質(zhì)量檢查并評(píng)分，以各處理所有項(xiàng)目得分之和為最終評(píng)價(jià)指標(biāo)做正交分析，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表6、表7。

分析表6、表7數(shù)據(jù)處理結(jié)果可得出，對(duì)顆粒劑質(zhì)量影響最大的試驗(yàn)因素是輔料用量，其次為潤(rùn)濕乙醇的濃度，而潤(rùn)濕劑的用量對(duì)顆粒劑質(zhì)量影響最小。三個(gè)因素的最優(yōu)水平組合應(yīng)為A1B3C3，即消暑丸的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)室制備工藝為：用占輔料與浸膏總量的15%的濃度為65%的乙醇作潤(rùn)濕劑，按輔料與藥物提取浸膏量1 ∶1的比例加入輔料與浸膏，將三者混合至“手捏成團(tuán)，輕壓即散”狀后，制粒，干燥后即得。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

為驗(yàn)證正交試驗(yàn)篩選所得最優(yōu)工藝的可靠性，以上述最優(yōu)工藝制備消暑丸無(wú)糖顆粒3批，并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表8 。

從表8驗(yàn)證試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果可看出，驗(yàn)證試驗(yàn)各批樣品各項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果與原正交試驗(yàn)中最優(yōu)組合處理檢測(cè)結(jié)果相近，所得顆粒劑性狀等檢測(cè)結(jié)果均符合藥典規(guī)定，證明正交試驗(yàn)優(yōu)選所得最優(yōu)工藝可行、可靠。

表5 顆粒劑含量測(cè)定及評(píng)分結(jié)果

表6 消暑丸無(wú)糖顆粒制備工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)分析結(jié)果

表7 消暑丸無(wú)糖顆粒制備工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

表8 消暑丸無(wú)糖顆粒制備最優(yōu)工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

藥物常用提取方法有水煎法、回流法、超聲波法、超臨界流體萃取等。鑒于超聲波提取時(shí)間短、效率高、提取溫度低，適用于熱不穩(wěn)定、易水解、易氧化的成份，同時(shí)考慮到其提取設(shè)備相對(duì)于超臨界流體萃取來(lái)說(shuō)造價(jià)更低，因此，筆者選用超聲波法作為藥物提取手段。為盡可能將藥材中活性成分提取出來(lái)，以確保原處方療效，筆者采用水、乙醇雙溶劑法對(duì)藥物進(jìn)行了多次提取以制備藥材提取物。中藥無(wú)糖顆粒常用輔料有糊精、纖維素、可溶性淀粉等，文章前期試驗(yàn)對(duì)幾種輔料進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)以可溶性淀粉為輔料所得顆粒劑性狀好且輔料用量少，因此以可溶性淀粉為最終研究所用輔料。最終得到消暑丸無(wú)糖顆粒最優(yōu)制備工藝為，取藥材提取物適量，以可溶性淀粉為輔料，輔料用量為藥材提取物的1倍；以65%的乙醇為潤(rùn)濕劑，潤(rùn)濕劑用量為藥材提取物與輔料總量的15%；將藥材提取物、輔料及潤(rùn)濕劑充分混合制成軟材后，擠壓通過(guò)制粒篩，制粒，50℃烘干，即得消暑丸無(wú)糖顆粒。中藥無(wú)糖顆粒具有劑量小，便于服用與攜帶，便于調(diào)配且劑量準(zhǔn)確，便于進(jìn)行質(zhì)量管理，方便儲(chǔ)存與運(yùn)輸；藥物溶解時(shí)間短、溶出迅速、吸收快，生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，具有良好的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)前景。