李惠龍

摘 ?要：壽光雞是國家級地方優(yōu)良品種，原產于山東省壽光市，具有重要的保種價值。本研究利用微衛(wèi)星標記檢測兩個不同保種場壽光雞群體的遺傳多樣性，評估群體遺傳資源現狀和保種場的保種效果。結果表明：在來自山東壽光慈倫種雞養(yǎng)殖場與中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地的兩個壽光雞群體中，5個微衛(wèi)星標記共有等位基因53個，各微衛(wèi)星標記的等位基因數為8～15;2個群體中5個微衛(wèi)星位點的平均多態(tài)信息含量（polymorphism information content，PIC）分別為0.543 和0.465，平均雜合度（heterozygosity， H）分別為0.601 和0.523，說明各群體的遺傳多樣性較為豐富;2個群體間相似性系數為0.9678，Nei氏遺傳距離為0.0328，UPGMA聚類結果將2個群體聚為1類，與白洛克群體明顯分開，表明2個群體遺傳相似性很高。研究表明兩個不同保種場的壽光雞的保種效果良好，但在遺傳多樣性上仍然存在一定差別，可能是保種群體大小和保種方法的不同所致，為壽光雞這一地方品種的保種提供了部分參考與依據。

關鍵詞：微衛(wèi)星;壽光雞;保種;雜合度（H）;多態(tài)信息含量（PIC）;聚類分析

中圖分類號：S813.1 ? ?文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2020）5-0003-05

我國擁有品種眾多、分布廣泛的地方雞種，其遺傳多樣性非常豐富。但由于保種的方法不當，以及盲目引進外來品種與地方品種進行雜交，造成了我國許多優(yōu)秀的地方雞種的數量和種類大量減少，對地方雞種遺傳資源的檢測與管理亟待加強。壽光雞是國家級地方優(yōu)良品種，原產于山東省壽光市，屬肉蛋兼用型。壽光雞具有耐粗飼、覓食力強、遺傳性穩(wěn)和抗病力強的特點，是著名的山東地方雞種。早在1960年，國家就在山東省壽光市慈倫種雞場建立了保種場以保護壽光雞。中國農業(yè)大學于2000年從山東省壽光市慈倫種雞場引進了一批壽光雞進行保種。兩個群體分別在不同地區(qū)、不同飼養(yǎng)條件下進行活體保種，本研究擬對兩個壽光雞群體的群體結構進行分析，同時了解其保種效果。

微衛(wèi)星（microsatellite），又稱簡單序列重復（simple sequence repeats，SSR），一般以1～6個堿基為核心序列，首尾相連組成的串聯重復序列。微衛(wèi)星具有高度的多態(tài)性和保守性，重復性好，等位基因數目多，呈等顯性遺傳，并且檢測方便等特點[1]。目前已開發(fā)出大量的微衛(wèi)星標記，并廣泛用于畜禽遺傳圖譜的構建、基因定位、群體遺傳結構分析等研究。本研究擬利用微衛(wèi)星標記分析壽光雞在不同保種場的群體結構，分析其遺傳多樣性及保種效果，為地方雞保種選育與利用提供科學依據。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料 ?試驗所用壽光雞分別來自山東省壽光市慈倫種雞養(yǎng)殖場與中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地，每個場各選取60只雞，在本試驗中分別記為壽光-SG、壽光-CAU，選取60只白洛克作為參考群體。每只雞翅下靜脈采血1mL，置于盛有EDTA抗凝劑的離心管中。使用血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京），并按其說明書步驟提取每只雞的基因組DNA，用1.0%凝膠電泳檢測DNA完整度，使用分光光度計DS-11 測定濃度。

1.2 ?微衛(wèi)星引物篩選及PCR擴增 ?根據參考文獻[2-3]中提供的雞微衛(wèi)星序列及引物，選擇出ADL267、LEI194、MCW295、MCW34、LEI228 5個微衛(wèi)星標記進行分析。微衛(wèi)星位點信息見表1。

PCR反應體系（20μL）：10×Taq Buffer 2.5 μL，上下游引物（5pmol/L）各0.2μL，Taq DNA聚合酶0.125μL，dNTP（0.2mmol/L）2μL，DNA（50ng/μL）2μL，ddH2O補齊至20μL。PCR擴增反應程序如下：95℃預變性5min，94℃變性30s，52～64℃退火35s，72℃延伸40s，共35個循環(huán)，72℃延伸10min。

PCR產物檢測：采用ABI3730XL DNA分析儀對PCR產物進行毛細管電泳，檢測片段大小信息，上樣總體積10μL，其中上樣液Hi-Di Formamide （高質量的去離子甲酞胺）7.5μL，GS-500標準內參0.5μL，混合PCR擴增產物2μL。

1.3 ?數據分析 ?通過GeneMapperV4.1軟件分析各目標片段大小，判斷純合子或雜合子;利用Microsatellite-Toolkit算等位基因數、等位基因頻率、雜合度（heterozygosity，H）、多態(tài)信息含量（polymorphism information content，PIC）。利用 Popgene32V1.31軟件對3個雞群體間的Nei氏遺傳距離和遺傳相似性進行分析，根據遺傳距離，采用UPGMA法進行聚類。

2 ?結果與分析

2.1 ?微衛(wèi)星標記的等位基因及基因頻率 ?各微衛(wèi)星標記在不同群體中均表現出不同的多態(tài)性，結果見表2～6。每個微衛(wèi)星標記的平均等位基因數為10.60，平均有效等位基因數為3.46。各微衛(wèi)星標記的等位基因數為8～15，5個微衛(wèi)星標記共有等位基因53個。位點LEI228的等位基因最多，共15個;而位點ADL267、MCW295、MCW34的等位基因均為8個。各標記等位基因數在各群體間是有差異的，等位基因數相同的標記其等位基因的基因頻率也是不同的。

2.2 ?群體內多態(tài)信息含量與雜合度 ?壽光-SG、壽光-CAU與白洛克這3個群體的多態(tài)信息含量（PIC）如表7所示。對于所有群體，各位點的PIC平均為0.648;遺傳信息含量最低的是壽光-CAU，為0.465;最高的是白洛克，為0.704。壽光-SG與白洛克屬于高度多態(tài)（PIC>0.5），壽光-CAU屬于中度多態(tài)（0.25

群體雜合度（H）表示在被檢測基因座上群體中雜合子的頻率，它是群體雜合程度的度量單位。群體平均雜合度的大小反映了群體的遺傳一致性程度。群體的雜合度越小，反映該群體的遺傳一致性越高，而群體的遺傳變異程度就越低，群體的遺傳多樣性越差。壽光-SG的雜合度為0.601，壽光-CAU的雜合度為0.523，白洛克雜合度為0.746。白洛克的雜合度最高，而壽光-CAU群體雜合度最低，見表7。

2.3 ?群體間的遺傳變異分析

2.3.1 ?遺傳距離和遺傳相似系數 ?遺傳距離與遺傳相似系數均是反應群體遺傳變異的指標[4]。遺傳距離表示群體間的遺傳差異，遺傳相似系數主要表示群體間的相似程度，遺傳距離越小，其遺傳相似系數越大。

由表4可以看出，壽光-SG、壽光-CAU與白洛克的遺傳距離較大，分別為0.4132和0.4691，而2個壽光雞群體之間的遺傳距離為0.0328，遠小于壽光雞與白洛克的Nei氏遺傳距離。遺傳相似系數方面，壽光-SG與壽光-CAU相似系數為0.9678。

2.3.2 ?聚類分析 ?根據群體間遺傳距離，使用UPGMA方法構建系統(tǒng)聚類圖1。

從聚類的結果（圖1）可以看出，壽光雞的2個群體聚在一起，而被用于對照的白洛克則單獨成為一類。這進一步說明了壽光-SG、壽光-CAU這兩個群體的遺傳關系很近，并與遺傳背景差異較大的白洛克相比形成了差異。

3 ?討論

微衛(wèi)星通常應用于物種遺傳多樣性分析、保種效果監(jiān)測、雜種優(yōu)勢預測等方面，能夠反映群體內的遺傳變異情況，同時也可以作為群體間的劃分依據。在家禽的相關研究中，王利剛等利用微衛(wèi)星標記對13個鴨品種進行了遺傳多樣性分析[5]，反映了我國各地方鴨種的遺傳多樣性差異;方倩倩等（2016）利用微衛(wèi)星標記對我國太湖鵝進行了保種效果的檢測[6];黃勛和（2017）以嶺南黃雞為參照，利用微衛(wèi)星位點檢測貴妃雞和麒麟雞的遺傳多樣性，并評估了群體遺傳資源現狀[7]。研究發(fā)現，在配套系鑒定的微衛(wèi)星選擇過程中，使用ADL267、LEI194、MCW295、MCW34、LEI228、ADL172 6個微衛(wèi)星標記所獲得的群體遺傳結構與使用20個微衛(wèi)星所得到的結果類似，這6個微衛(wèi)星標記可以將不同品系進行區(qū)分[3]。這說明本研究所選用的微衛(wèi)星標記有能力鑒定出家禽的不同品系和分析群體遺傳結構，可以用于壽光雞保種效果的鑒定。

本研究利用5對微衛(wèi)星標記分析來自山東省壽光市慈倫種雞養(yǎng)殖場與中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地兩個壽光雞群體的遺傳多樣性和保種情況。一般認為，PIC大于0.5，說明群體遺傳多樣性較高，反之則較低[8]。本次研究結果顯示壽光-SG（山東省壽光市慈倫種雞場）的位點平均為高度多態(tài)（PIC>0.5），壽光-CAU（中國農業(yè)大學）的位點平均為中度多態(tài)（0.25

兩個壽光雞群體均具有比較豐富的遺傳多樣性，說明山東省壽光市慈倫雞場與中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地的保種效果良好。此前有研究認為，兩個品系間的遺傳距離小于0.030時，可以將其視為一個同一品系[9]。中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地的壽光雞是2000年左右從山東省壽光市慈倫種雞場引進，經過15年的隔離，兩壽光雞群體間的遺傳距離為0.0328，遺傳相似系數為0.9678。兩個壽光雞群體間的遺傳距離遠小于甘肅省靜寧縣和寧夏回族自治區(qū)固原市的2個靜原雞群體間的遺傳距離0.0876[10-11]。在一個有限的閉鎖群體內，群體的近交系數將隨著繁育世代的增加而逐漸上升，群體基因雜合度將存在一定程度地下降，群體內的遺傳變異或遺傳多樣性逐漸降低[12]。因此雖然兩個壽光雞群體雖然來源相同，但其多態(tài)信息含量與雜合度有所不同，這可能是由群體大小和保種方法的差異造成的。兩群體基因交流可能會更有利于壽光雞的保種。

4 ?結論

本研究利用ADL267、LEI194、MCW295、MCW34、LEI228 5個微衛(wèi)星標記分析了來自山東省壽光市慈倫種雞養(yǎng)殖場與中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地的壽光雞的遺傳結構、群體間的遺傳變異情況，一方面表明了壽光雞群體遺傳多樣性豐富，具有較高的保種價值;另一方面表明兩地的保種情況均能有效保護壽光雞的遺傳多樣性，同一品種的異地保種可以為品種的保護與利用提供了方法借鑒。

（致謝：感謝中國農業(yè)大學動物科技學院家禽遺傳資源與育種試驗基地友情提供樣品。）

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Abstract：Shouguang Chicken is a national-level local variety，native to Shouguang city， Shandong province，with important conservation value.This study used microsatellite markers to detect the genetic diversity of two different groups of Shouguang Chicken，to assess the status of population genetic resources and the conservation efficacy of the species.The results showed that 5 microsatellite markers had 53 alleles in two Shouguang Chicken populations from the Shandong Shouguang Cilun Chicken Breeding Farm and the College of Animal Science and Technology，China Agricultural University，the number of alleles of each microsatellite marker was 8～15，and the average of 5 microsatellite loci in 2 populations was average.The average polymorphism information content （PIC） of 5 microsatellite markers in the 2 populations were 0.543 and 0.465 respectively，and the average heterozygosity （H） were 0.601 and 0.523，respectively，which indicated that the genetic diversity of the two populations was relatively abundant;the similarity coefficient between the 2 populations was 0.9678，Nei's genetic distance was 0.0328，and the UPGMA clustering results gathered 2 groups into 1 groups，indicating that the genetic similarity of the 2 populations is very high.The study shows that the 2 different populations of Shouguang chicken have effectual preservation，but there are still some differences in genetic diversity，which may be the result of the difference between the size of the species and the method of preserving.It provides some reference and basis for the preservation of this local species of Shouguang chicken.

Key words：Microsatellites;Shouguang chicken;Breed conservation;Heterozygosity（H）;Polymorphism information content（PIC）; Cluster analysis