覃振斌 熊曉妍 虞霖田 歐瑩

（廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧 530007）

八角（Illicium verus Hook f.）屬八角科，為常綠喬木，生于我國(guó)南亞熱帶地區(qū)。我國(guó)八角的種植已有多年歷史，也聞名于西方國(guó)家。早在21 世紀(jì)初，廣西成為我國(guó)八角的主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)量位列全國(guó)第一，種植面積和產(chǎn)量達(dá)到全國(guó)總產(chǎn)量的85%[1]。

八角是常見(jiàn)的調(diào)味原料，味清香微甜，可整顆添加于食材應(yīng)用，亦可粉碎加工作為調(diào)味劑。此外，八角也被應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和藥物的研發(fā)，在中醫(yī)保健、治療勞嗽、安神鎮(zhèn)痛等方面具有良好的開(kāi)發(fā)前景。八角茴香油可從葉子或果實(shí)中獲得，其中茴香腦的含量最豐富，由它氧化而成的茴醛和茴香腈被用作香水、香皂等產(chǎn)品的香料[2]。此外，八角茴香油里還含有多種特征風(fēng)味成分，包括草蒿腦、檸檬烯、芳樟醇和蒎烯等，可運(yùn)用于食品的保鮮劑[3]。也有研究表明八角茴香油具有較好的抑菌和抗自由基氧化作用，是食品天然防腐劑的良好選擇。陳奇曾將酵母菌、大腸桿菌等置于有八角茴香油存在的環(huán)境中培養(yǎng)，生長(zhǎng)會(huì)受到抑制[5]。付敏東的研究將大腸埃希菌與金黃色葡萄球菌等置于含15.62～62.50 mg/L 八角茴香油的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細(xì)菌的生長(zhǎng)受到抑制[6]。此外，張赟彬[7]等人用不同方法取得八角茴香油并進(jìn)行了體外抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明八角茴香油的抗菌效果與提取溶劑相關(guān)。這說(shuō)明了經(jīng)過(guò)不同提取溶劑獲得的八角茴香油成分和提取率是不同的，或許正因?yàn)樘崛〉讲煌能钕阌鸵志煞趾秃?，在這些不同的茴香油抑菌成分共同協(xié)同作用下，抑菌作用方面能產(chǎn)生較好的效果。

八角茴香油的作用與它的成分受不同的提取溶劑有較大影響，進(jìn)而會(huì)影響到八角茴香油的生物學(xué)特性。但是不同提取溶劑對(duì)八角茴香油成分含量和提取效果影響的研究較少，本研究將以廣西八角為實(shí)驗(yàn)材料，以乙醇，石油醚和乙醚為溶劑，采用索氏提取法探究不同溶劑對(duì)八角茴香油提取率及提取成分的影響，以期在八角茴香油的功能應(yīng)用領(lǐng)域提供合適的提取溶劑及方法，推動(dòng)八角在藥用領(lǐng)域的使用，擴(kuò)大八角的商業(yè)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

八角從廣西張益堂中藥飲片有限公司采購(gòu)，乙醇、乙醚、石油醚等試劑均由南寧精密儀器儀表有限公司提供，均為分析純。供試菌株詳見(jiàn)表1。

表1 供試菌株明細(xì)表

1.2 儀器與設(shè)備

表2 儀器設(shè)備明細(xì)表

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 八角茴香油的提取 利用索氏提取法[9]，精確稱取40g過(guò)60目的八角粉碎物并倒在疊好的濾紙中，置于索氏提取器內(nèi)，分別以95%乙醇、石油醚和乙醚作為提取溶劑。對(duì)乙醇用100℃水浴加熱提取，對(duì)石油醚與乙醚用40℃水浴加熱提取，時(shí)間均為180min。將提取液過(guò)濾并用10%氯化鈉溶液萃取獲得八角茴香油，并回收溶劑，稱重，計(jì)算得率。將提取物送至科譜研發(fā)技術(shù)中心（青島）有限公司進(jìn)行色譜分析。

1.3.2 抑菌試驗(yàn) 將上述菌種接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)24h 后作為備用。參考何冬梅等[10]的培養(yǎng)方法，用M-H肉湯將乙醇為溶劑提取的八角茴香油進(jìn)行稀釋?zhuān)捎梦⒘咳鉁♂尫?，稀釋濃度依次?00mg/mL、250mg/mL、125mg/mL、62.5mg/mL、31.25mg/mL、15.625mg/mL、7.812mg/mL、3.906mg/mL、1.953mg/mL、0.977mg/mL、0.488mg/mL，并設(shè)置空白與95%乙醇組對(duì)照，以含量最低且肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的稀釋濃度為八角茴香油對(duì)該菌種的最低抑菌濃度（MIC）。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同提取溶劑對(duì)八角茴香油提取率的影響及八角茴香油的成分分析

細(xì)度小于60目的廣西八角粉，在不同溶劑中進(jìn)行索氏提取180min，乙醇溶劑組的提取率最高，為20.3%；石油醚與乙醚組的提取率分別為19.05%和19.525%。乙醇溶劑組得率高可能是由于乙醇沸點(diǎn)相對(duì)石油醚和乙醚高，而提取溫度較高有利于提取。本研究中廣西八角茴香油提取率與何冬梅[10]的提取率相近，但相比張赟彬、陳卓逐[7,11]的33.27%和34.52%低，陳與張的研究用的八角產(chǎn)地并非廣西，這可能是由于八角生產(chǎn)地區(qū)的不同導(dǎo)致八角植物體內(nèi)成分有差異；此外，還可能是單次提取中八角粉末的用量較大，與溶劑接觸面相對(duì)較小導(dǎo)致提取率降低。張赟彬通過(guò)正交試驗(yàn)表明，料劑比為8:100時(shí)提取率最高，而本試驗(yàn)使用的料劑比為1:10，盡管提取率相對(duì)較低，但該配比方法適合大批量生產(chǎn)，可快速獲得大量的茴香油。

由表3可知，試驗(yàn)中所使用的乙醇、石油醚、乙醚三種提取溶劑對(duì)八角提取到的茴香油成分大致相同，但提取率卻有差異，三種提取溶劑提取到的八角茴香油中反式茴香腦的含量分別為54.20%、38.90%、42.56%，商品油中的反式茴香腦含量為27.44%，可見(jiàn)，乙醇組反式茴香腦的含量最高。但是乙醇組芳樟醇與桉樹(shù)腦提取率分別為1.583%和0.0941%，低于其余石油醚2.988%，1.268%和乙醚的2.918%，1.232%，商品油中的芳樟醇和桉樹(shù)腦分別達(dá)到6.509%，3.124%。檸檬烯在乙醇組中的提取率僅有0.0443%,低于石油醚的11.409%、乙醚的10.936%，以及商品油的7.521%。三組提取的草蒿腦與大茴香醛得率相近，但草蒿腦提取率均低于商品油的10.964%，而大茴香醛提取率則均高于商品油的2.449%。異丁香烯、1-甲基-4-(1-甲基-2-丙烯基)苯的得率均是乙醇組最高，分別為1.403%、4.957%。

表3 三種溶劑提取八角茴香油的主要成分

在本研究中，乙醇溶劑所提取得到的八角茴香油中反式茴香腦的獲得率為54.20%，與陳卓逐[9]的57.59%接近，但比李萍[12]報(bào)道的90.91%要低很多，這很可能是因?yàn)榘私撬a(chǎn)地區(qū)差異多導(dǎo)致。乙醇組芳樟醇與桉樹(shù)腦的提取量比其他組低，并且試驗(yàn)組這兩種物質(zhì)均低于商品油，可能是由于提取與萃取的方法不同而導(dǎo)致八角茴香油中芳香醇與桉樹(shù)腦含量有差異。乙醇組的八角茴香油中檸檬烯的含量低于其他試驗(yàn)組，可能是由于檸檬烯極易溶于乙醇、石油醚與乙醚等溶劑，而石油醚與乙醚在室溫下易揮發(fā)，使得檸檬烯留在提取物中，而乙醇組的檸檬烯是否隨著乙醇在萃取過(guò)程中有可能被過(guò)濾，仍需進(jìn)一步研究。大茴香醛可由茴香腦氧化而來(lái)，試驗(yàn)組的大茴香醛含量高于商品油，可能是在不同的提取條件下，茴香腦氧化率也會(huì)出現(xiàn)差異導(dǎo)致。

2.2 八角茴香油最低抑菌濃度（MIC）的測(cè)定結(jié)果

由表4 可知，采用微量肉湯稀釋法測(cè)定八角茴香油對(duì)7種細(xì)菌的最低抑菌濃度（MIC）值進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，對(duì)照組全部有菌生長(zhǎng)，乙醇組提取的八角茴香油抑菌效果相對(duì)較好，尤其是對(duì)大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC337755 以及表皮葡萄球菌ATCC49134，三個(gè)菌株的MIC 值低于石油醚、乙醚和標(biāo)準(zhǔn)品，分別為7.812、3.906 和3.906 mg/mL；石油醚組八角茴香油對(duì)綠膿桿菌ATCC9027和金黃色葡萄球菌ATCC337755 抑菌效果較好，兩種細(xì)菌的MIC值均為7.812 mg/mL；乙醚組八角茴香油對(duì)表皮葡萄球菌ATCC49134、金黃色葡萄球菌ATCC337755 與ATCC25923 的抑制效果較好，MIC值均為15.625 mg/mL；而標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC25923和肺炎克雷伯桿菌效果最佳。

表4 八角茴香油最低抑菌濃度（MIC）值的測(cè)定

乙醇為溶劑提取的八角茴香油對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌以及表皮葡萄球菌的抑菌效果最好，這與張赟彬等人的研究相符，表明了隨著八角茴香油的濃度增加，對(duì)大腸桿菌的抑制效果也會(huì)增強(qiáng)[11]。另外，本試驗(yàn)乙醇組八角茴香油對(duì)大腸桿菌ATCC25922的MIC值為7.812 mg/mL，表明該提取油對(duì)大腸桿菌具有較好的抑菌效果，與王同禹和陳俊[13,14]的結(jié)果一致。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組八角茴香油對(duì)表皮葡萄球菌ATCC49134 與金黃色葡萄球菌ATCC337755 的MIC 值(3.906～15.625mg/mL)較其它細(xì)菌低(7.812～62.5mg/mL)，尤其是乙醇組，對(duì)表皮葡萄球菌ATCC49134和金黃色葡萄球菌ATCC337755的MIC 值均為3.906mg/mL，表明八角茴香油對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制效果相對(duì)革蘭氏陰性菌更好。Huang等人在2010年報(bào)道八角茴香油的抑菌效果主要跟反式茴香腦的含量有關(guān)[15]，本研究中用乙醇溶劑提取的八角茴香油中反式茴香腦的含量最高，達(dá)到54.20%，該組八角油(3.906～31.25mg/mL)的抑菌效果比石油醚組(7.812～62.5mg/mL)、乙醚組(15.625～62.5mg/mL)以及商品油(7.812～62.5mg/mL)好，此結(jié)果與Huang等人所得出的結(jié)論相符。陳鵬的研究顯示，用八角提取物拌料飼喂仔豬后對(duì)腸道菌群進(jìn)行測(cè)定，大腸桿菌與沙門(mén)氏菌的含量顯著降低，且對(duì)仔豬的生長(zhǎng)與免疫性能有提高[16]，表明八角提取物在體內(nèi)對(duì)大腸桿菌也有較好的抑制作用，與體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果一致。

4 結(jié)論

本研究利用不同溶劑提取廣西八角的茴香油，研究結(jié)果表明廣西八角成分以反式茴香腦、芳樟醇、異丁香烯、草蒿腦、檸檬烯、大茴香醛、1-甲基-4-(1-甲基-2-丙烯基)苯、桉樹(shù)腦為主；其中，95%乙醇最適合作為提取溶劑批量快速提取廣西八角茴香油。另外，通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)，證明廣西八角茴香油對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌菌具有抑制作用，但仍需要在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)一步探究八角茴香油的在體內(nèi)的抑菌作用，以便為廣西八角茴香油的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。