殷桐 丁希艷 王朝輝

(1北華大學(xué)，吉林 吉林 132013；2北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)

腦血管病在全球死因中居第二位〔1〕，近年在中國已躍升為首要死因〔2〕。缺血性腦卒中(即腦梗死)是腦卒中最常見的類型，占70%～80%。根據(jù)中國缺血性腦卒中亞型-CISS分型將腦梗死按病因的不同分為五型：大動(dòng)脈粥樣硬化、心源性腦卒中、穿支動(dòng)脈疾病、其他病因、病因不確定。其中以大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死為最常見的類型。動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成受到各種因素的影響，目前學(xué)說眾多，包括血管內(nèi)皮損傷學(xué)說，脂質(zhì)學(xué)說、炎癥學(xué)說、感染學(xué)說等等。而磷酸肌醇3-激酶(PI3K) 家族直接影響AS的發(fā)生發(fā)展〔3,4〕。PI3K催化亞基G肽(PIK3CG)基因編碼屬于pI3/pI4激酶家族的蛋白質(zhì)。它是細(xì)胞外信號(hào)的重要調(diào)節(jié)劑，其在維持上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能完整性中起重要作用〔5〕。PIK3CG在炎癥反應(yīng)的不同病理生理學(xué)背景中也有重要作用。Fougerat等〔6〕研究表明PIK3CG參與AS的形成，但目前尚無其與大動(dòng)脈動(dòng)脈硬化型腦梗死的相關(guān)性研究，因此本研究分析PIK3CG在大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死患者體內(nèi)的表達(dá)及其在診斷中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1臨床資料 病例組：隨機(jī)選取2018年10月至2019年12月就診于北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科并確診為大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死(符合2010年中國缺血性腦卒中亞型-CISS分型的診斷標(biāo)準(zhǔn))患者180例；對(duì)照組：同期隨機(jī)選取健康體檢者129例。病例組與對(duì)照組性別、年齡、身高、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

根據(jù)合并疾病情況將病例組分為4個(gè)亞組：單純大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組(31例)、單純合并糖尿病組(31例)、單純合并高血壓組(33例)、單純合并高脂血癥組(33例)。記錄受檢者性別、年齡、身高、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史、高血壓病史、糖尿病病史、高脂血癥病史及超聲影像學(xué)等資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①可以引起急性多發(fā)梗死灶的其他病因如血管炎、血凝異常及腫瘤性栓塞的證據(jù)；②心源性腦卒中；③腦出血；④CT、磁共振成像(MRI)檢查禁忌證的患者。

表1 兩組一般資料比較

1.2儀器與試劑 PIK3CG酶聯(lián)免疫試劑盒購自上海朗頓生物有限公司；標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀采用Tecan Austria GmbH 5082 Gr?dig，奧地利。

1.3檢測方法 患者均從肘正中靜脈抽取靜脈血2 ml置于3.5 ml血清管(Z)中，室溫下血液自然凝固10～20 min，離心2 500 r/min，20 min左右。將PIK3CG酶聯(lián)免疫試劑盒從-20℃冰箱中取出在室溫下平衡0.5 h。具體操作步驟如下：①空白孔不加樣，只加顯色劑 A，B 和終止液用于調(diào)零；②標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl，零孔加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液50 μl，然后加入生物素抗原工作液50 μl； ③樣品孔：加入樣品50 μl，然后加入生物素抗原工作液50 μl；④輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30 min；⑤ 將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用；⑥第一次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；⑦ 加入50 μl親和素-辣根過氧化物酶(HRP)到標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中，輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30 min；⑧第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；⑨顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μl，再加入顯色劑B 50 μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min；⑩終止：每孔加終止液50 μl，終止反應(yīng)；測定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后10 min以內(nèi)進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)及多因素Logistic回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1PIK3CG的體內(nèi)表達(dá)水平 病例組與對(duì)照組PIK3CG值差異顯著(P<0.001)。單純合并糖尿病組、單純合并高血壓組、單純合并高脂血癥組分別與單純大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組比較，PIK3CG值差異均具有顯著性(P<0.05)，見表2。

表2 各組PIK3CG體內(nèi)表達(dá)水平

與對(duì)照組比較：1)P<0.001；與單純大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組比較：2)P<0.05

2.2回歸分析結(jié)果 與單純大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死組OR值比較，單純合并糖尿病組是其2.48倍，單純合并高血壓組是其1.44倍，單純合并高脂血癥組是其1.54倍。提示合并糖尿病、高血壓、高脂血癥可增加正相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)，尤以合并糖尿病風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)較大，見表3。

表3 回歸分析結(jié)果

3 討 論

AS形成的過程較為復(fù)雜，各種刺激因素(如機(jī)械性、高膽固醇血癥、吸煙、毒素、病毒)均可造成不同程度的內(nèi)皮細(xì)胞損傷，使其通透性增加、細(xì)胞變性壞死脫落；內(nèi)皮細(xì)胞屏障受損，可使血漿脂蛋白過量地融入細(xì)胞壁，同時(shí)會(huì)引起血小板黏附、聚集、釋放各種活性物質(zhì)，進(jìn)而加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是AS公認(rèn)的始動(dòng)環(huán)節(jié)。而AS是腦梗死最主要的病理學(xué)基礎(chǔ)?？梢?，內(nèi)皮功能障礙在腦梗死發(fā)病機(jī)制中起重要作用〔7〕。AS也是一種慢性炎癥性血管疾病。研究顯示，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)通過調(diào)控核因子(NF)-κB/腫瘤壞死因子(TNF)-α信號(hào)通路等誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷的重要機(jī)制〔7～9〕。可見，炎癥因子也參與其中。

根據(jù)主要底物特異性的不同將PI3K分為3個(gè)類型，即Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。Ⅰ型PI3K進(jìn)一步分為亞型ⅠA和ⅠB。PIK3CG隸屬于ⅠB型。PIK3CG是內(nèi)膜增生形成的關(guān)鍵參與者。本文提示，PIK3CG通過血管損傷進(jìn)而炎癥刺激對(duì)血管內(nèi)皮產(chǎn)生影響，從而使其在大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死患者中呈高表達(dá)狀態(tài)。

Jin等〔10〕研究結(jié)果首次直接證明PIK3CG在缺血/再灌注誘導(dǎo)的血腦屏障破壞和腦損傷中起重要作用。在Ⅰ型PI3K中，PIK3CG是炎癥和氧化反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，并且涉及許多炎性疾病，其中包括AS。人AS病變的組織學(xué)表征顯示PIK3CG的表達(dá)使病變中滲入的免疫細(xì)胞增加，如巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞。并且對(duì)PIK3CG有以下重要發(fā)現(xiàn)：免疫細(xì)胞中缺乏PIK3CG的表達(dá)可減少對(duì)AS斑塊的浸潤，減少病變大小并促進(jìn)小鼠模型中斑塊穩(wěn)定。Fougerat等〔6〕用特異性PIK3CG抑制劑治療小鼠免疫系統(tǒng)中PIK3CG的缺失，可以通過預(yù)防血管壁中發(fā)生的炎癥過程來減少AS。并確定PIK3CG是新生內(nèi)膜形成過程中急性炎癥血管事件的重要介質(zhì)。這些研究表明PIK3CG可能在內(nèi)膜增生發(fā)展中起重要作用。Carnevale等〔11〕研究表明，PIK3CG抑制劑通過對(duì)阻力血管的平滑肌發(fā)揮松弛作用來降低動(dòng)脈血壓。抑制PIK3CG可能是調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣流入的新工具，從而放松阻力動(dòng)脈和降低血壓。這一機(jī)制被證明與抗高血壓治療的功效相關(guān)。K?chele等〔12〕研究指出，下丘腦-垂體-腎上腺軸的過度活化，PI3K抑制劑的使用可以恢復(fù)糖尿病相關(guān)損傷。編碼PIK3CG對(duì)2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)增加的個(gè)體的炎癥特征和炎癥相關(guān)代謝特征有影響。另也有文章指出〔13〕，PIK3CG在飲食誘導(dǎo)的肥胖、脂肪肝、炎癥和胰島素抵抗中有重要作用。

綜上，PIK3CG可能是大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死發(fā)生的預(yù)警指標(biāo)，有效控制糖尿病、高血壓、高脂血癥等合并疾病可能是降低PIK3CG表達(dá)的輔助因素。