吳 群 程慧林 陳 駿 陳健民?

（1.浙江省衢州市經(jīng)濟(jì)特產(chǎn)站 衢州 324000； 2.浙江省衢州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院果樹所）

衢州是有名的柑橘之鄉(xiāng)，有1400多年悠久歷史。據(jù)統(tǒng)計，衢州市柑橘栽培面積最多時 3.8×104hm2，產(chǎn)量最高時達(dá)91萬 t。栽培品種以椪柑居多，胡柚、溫州蜜柑次之，其他優(yōu)質(zhì)雜柑也開始陸續(xù)發(fā)展[1]?！搬橹輻崭獭薄ⅰ俺Ｉ胶帧鲍@國家地理標(biāo)志產(chǎn)品認(rèn)證。雞尾葡萄柚（Cocktail grapefruit） 是由1950年前后雜交于美國加州大學(xué)河濱校區(qū)[2]暹羅甜柚（Siamese sweet pummelo） 和弗魯亞橘（Frua mandarin） 的雜交得到品種，2013年初衢州地區(qū)從中國農(nóng)科院柑橘研究所引入無病毒接穗，并以枳為基砧開展苗木繁育。2019年 7月先后在柯城區(qū)華墅鄉(xiāng)園林村一株10多年樹齡椪柑和衢江區(qū)周家鄉(xiāng)相對村一株 4年生嫁接苗上發(fā)現(xiàn)花葉枝變（葉片邊緣部分黃化），此時果實基本轉(zhuǎn)色，而同一株樹上未發(fā)生枝變的葉片、果實仍是綠色。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試樣品分別采集自衢州市柯城區(qū)華墅鄉(xiāng)園林村宇發(fā)家庭農(nóng)場發(fā)生枝變椪柑的正常果實和花葉果實（11月22日采，樣品1）；衢州市衢江區(qū)周家鄉(xiāng)相對村碧嶺丹地家庭農(nóng)場發(fā)生枝變的雞尾葡萄柚正常果實和花葉果實（11月23日采，樣品 2）。

1.2 儀器設(shè)備

葉綠素儀（日本柯尼卡美能達(dá)SPAD-502Plus）、游標(biāo)卡尺、高速組織搗碎機(jī)（轉(zhuǎn)速10000～12000轉(zhuǎn)/min，時間 10～20 s）、UV-1800紫外/可見分光光度計（日本島津公司）、848型自動電位滴定儀（瑞士Metrohm中國有限公司）、色差儀（日本柯尼卡美能達(dá)CR-10）。

1.3 測定方法

1.3.1 葉片葉綠素含量SPAD值。選取完整干凈的春梢正常葉片 3張和變異葉片 3張，用葉綠素儀夾取每張葉片正面的葉柄、葉中、葉尖、左葉緣中、右葉緣中 5個位點測定SPAD值。

1.3.2 單果重、縱橫徑和可食率的測定。取柑橘樣品果，精密天平測單果重（g），游標(biāo)卡尺測縱橫徑（mm），可食率=果實可食部分質(zhì)量/全果質(zhì)量×100%。

1.3.3 果實果皮色差的測定。取柑橘樣品果，用色差儀測果實果皮光亮度值、紅綠色差值、黃藍(lán)色差值。

1.3.4 果實維生素 C含量。取樣品柑橘可食部分，用高速組織搗碎機(jī)打漿，轉(zhuǎn)速10000～12000轉(zhuǎn)/min，時間 10～20 s，制成柑橘樣品。取10ml柑橘樣品，用50g/L三氯乙酸（TCA）溶液定容至100ml，提取15min，過濾后取 2ml提取液，分別加入 2ml濃度50g/L的三氯乙酸（TCA）溶液，2ml無水乙醇，1ml0.4%的磷酸-乙醇溶液，2ml濃度 5g/L鄰菲羅啉和1ml濃度 0.3g/L的三氯化鐵-乙醇溶液，30℃下反應(yīng)60min，采用紫外分光光度計測定510nm處吸光值。

圖1 兩種花葉變異柑橘葉片SPAD值比較

1.3.5 果實總酸含量。取柑橘可食部分，用高速組織搗碎機(jī)打漿，轉(zhuǎn)速10000～12000轉(zhuǎn)/min，時間10～20 s，制成柑橘樣品，采用全自動滴定儀，用標(biāo)定過的NaOH滴定至pH8.2，記錄消耗NaOH容積。

1.3.6 果實可溶性固形物（TSS）含量。取柑橘可食部分，用高速組織搗碎機(jī)打漿，轉(zhuǎn)速10000～12000轉(zhuǎn)/min，時間10～20 s。制成柑橘樣品，取樣品直接用折光率儀測定。

1.3.7 果實固酸比。果實固酸比=果實可溶性固形物（TSS）含量/果實總酸含量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計，應(yīng)用Duncan’s multiple rangetest 方法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種花葉變異柑橘葉片葉綠素含量SPAD值的差異

從圖 1可以看出，花葉椪柑、花葉雞尾葡萄柚葉片SPAD值都低于對照正常葉，其中花葉椪柑葉片SPAD值極顯著低于正常葉片，而花葉雞尾葡萄柚的葉片SPAD值也顯著低于正常葉片。

2.2 兩種花葉變異柑橘果實單果重、縱橫徑和可食率的對比

表1 兩種花葉變異柑橘果實與正常果實平均單果重、縱橫徑和可食率測定

從表 1可以看出，花葉椪柑、花葉雞尾葡萄柚果實平均單果重、縱橫徑、可食率與對照果實無明顯差異。

2.3 兩種花葉變異柑橘果實色差的對比

從表 2中可以看出，花葉椪柑、花葉雞尾葡萄柚果實光亮度都高于正常果實，果面色度偏白。果實紅綠色差上花葉椪柑果實偏綠。果實黃藍(lán)色差上花葉果實都比正常果實更偏黃。

表2 兩種花葉變異柑橘果實果皮色差值測定

表3 兩種花葉變異柑橘果實內(nèi)在品質(zhì)比較

2.4 兩種花葉變異柑橘果實維生素 C含量、總酸含量和可溶性固形物含量對比

從表 3中可以看出，兩種花葉變異柑橘果實維生素 C含量低于正常果實的含量?？偹岷?、可溶性固形物含量和固酸比上差異不明顯。

3 小結(jié)與討論

在果樹上，芽變選種這手段簡便，收效快，果農(nóng)容易掌握這門技術(shù)[3]。衢州地區(qū)柑橘栽培歷史長，面積大，品種資源豐富，芽變材料在田間時有發(fā)生，廣大果農(nóng)和基層技術(shù)人員對新奇特的變異興趣濃厚。作為技術(shù)推廣人員應(yīng)廣泛收集保存變異資源，觀察變異的穩(wěn)定性。變異材料可以用來作為芽變研究的資源，一些有利變異的資源經(jīng)過鑒定后可以直接作為品種投入到生產(chǎn)中[4]。

柑橘品種選育的實際工作中，可通過表型觀察將芽變品種和普通品種區(qū)別開來，從而選育出新品系或品種。但柑橘遺傳背景高度雜合，加之芽變是基因組的微小變化，常見的分子標(biāo)記無法有效地區(qū)分芽變品種。轉(zhuǎn)座子跳躍是引起芽變的主要原因之一，運用TD技術(shù)來研究不同轉(zhuǎn)座子在柑橘芽變品種中的多態(tài)性，是柑橘芽變研究的一個較好的切入點[5]。據(jù)推測，衢州地區(qū)發(fā)現(xiàn)的這兩個柑橘品種的變異可能就是基因組的微小變化表現(xiàn)出黃化的癥狀。因葉片也伴隨出現(xiàn)黃化，初步推斷此變異應(yīng)與葉片葉綠素合成基因缺失或者突變密切相關(guān)，這需要進(jìn)一步深入基因水平檢測，而該變異性狀是否穩(wěn)定還需后續(xù)高接繼續(xù)觀察。如果該花葉性狀能夠穩(wěn)定遺傳，這兩個變異品種也可作為較好的觀賞柑橘品種進(jìn)行繁育。