許毅，賀文芳

（1.西安航天總醫(yī)院，陜西西安710100；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院，陜西西安710032）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE）是一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，其特征為全身持續(xù)性炎性反應(yīng)，可累及多個臟器[1]。由于SLE可呈現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)（如發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛和腎、肺或腦受累及的癥狀）且其病程不可預(yù)測。因此，SLE的診斷及病情評估對臨床醫(yī)師是一個巨大的挑戰(zhàn)。迄今為止，SLE的發(fā)病機(jī)制尚不清晰。有研究認(rèn)為，SLE的發(fā)病機(jī)制可能是基于遺傳變異和環(huán)境因素的組合，這些因素促進(jìn)耐受性喪失或組織炎性反應(yīng)[2]。目前，越來越多的證據(jù)表明炎性反應(yīng)和相關(guān)分子在SLE的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。

正五聚素蛋白（Pentraxin，PTXs）是多功能保守分子的超家族。根據(jù)其初級結(jié)構(gòu)可分為長鏈和短鏈PTXs[3]。C-反應(yīng)蛋白（CRP）屬于短鏈 PTXs家族，由白細(xì)胞介素（IL）-6刺激肝臟后產(chǎn)生。PTX3屬于長鏈PTXs家族，主要由參與先天免疫的細(xì)胞如多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生的。PTX3可以與多種配體如IL-1或腫瘤壞死因子（TNF）-α相互作用，在先天免疫中發(fā)揮較為重要的作用[4]。近期研究顯示，PTX3作為炎性反應(yīng)過程的調(diào)節(jié)劑參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展，如感染性疾病、膿毒癥、心血管疾病和自身免疫性疾?。ㄈ珙愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎）等[5-7]。但目前國內(nèi)尚缺乏PTX3與SLE活動期的相關(guān)研究。因此，本研究探討血清PTX3水平在SLE患者是否增高，以及血清PTX3水是否反映了患者的疾病活動性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究對象 本研究共納入75例SLE患者和75例健康對照組（Healthy controls，HC），2組間的年齡和性別基本匹配。所有入選的SLE患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。HC納入標(biāo)準(zhǔn)：無SLE或任何其他炎癥性疾病或感染性疾病的健康體檢者。SLE排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠或產(chǎn)后患者、惡性腫瘤、缺血性心臟病、并發(fā)感染和近期外傷等。

1.1.2 臨床資料 收集所有研究對象的一般資料。SLE組和HC組的一般資料，見表1。2組間的性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在75例SLE患者中，男 8例（10.7%），女 67例（89.3%），平均年齡為（42.13±11.95）歲。采用SLE疾病活動指數(shù)（SLDAI）用于SLE疾病活動期的評估，0～4分為基本無活動；5～9分為輕度活動；10～14分為中度活動；≥15分為重度活動[9]。

1.2 血清標(biāo)本收集與PTX3水平檢測 采用無菌采血針收集所有受試者的清晨空腹外周血3 mL，3 000轉(zhuǎn)/min，離心15 min，取上清分裝于1.5 mL EP管中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。運用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測所有受試者血清PTX3水平，試劑盒購于武漢優(yōu)爾生生物科技有限公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，分類變量的比較采用χ2檢驗。數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，2組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，組間比較采用非參數(shù)檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson或Spearman。評估SLE疾病活動的影響因素采用二元Logistic回歸分析。ROC曲線分析PTX3診斷SLE以及評估疾病活動期的價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE組和HC組的一般資料 平均紅細(xì)胞沉降率（ESR）為（19.47±8.98）mm/h，平均 CRP 為（7.80±4.16）mg/L，平均 SLDAI為 9.35±6.13。此外，SLE組中56例為疾病活動期患者（病情輕度活動21例，病情中度活動20例，病情重度活動15例）和19例為非疾病活動性患者，見表1。

2.2 血清PTX3水平的測定 采用ELISA法檢測2組血清PTX3水平。結(jié)果顯示，SLE組中血清PTX3水平顯著高于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（2.52±1.01 vs.1.78±0.65，P＜0.001）。此外，采用SLDAI對SLE患者進(jìn)行評估，分為活動期與非活動期；結(jié)果顯示，疾病活動期SLE患者血清PTX3水平是顯著高于非活動期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（2.70±1.05 vs.1.98±0.62，P=0.006），見圖 1。進(jìn)一步，把活動期患者分為輕、中、重3期，結(jié)果顯示，隨著活動期程度的增高，血清PTX3水平水也逐漸增高，見表2。

表1 2組的人口學(xué)特征及實驗室參數(shù) （±s）

表1 2組的人口學(xué)特征及實驗室參數(shù) （±s）

（mm/h） SLDAI PTX3（ng/mL）SLE 組 75 42.13±11.95 8/67 7.02±1.82 4.28±0.83 129.32±14.48 227.84±59.25 7.80±4.16 19.47±8.98 9.35±6.13 2.52±1.01 HC 組 75 42.35±11.73 10/65 6.36±1.22 4.43±0.73 131.72±12.28 237.05±41.48 1.37±0.75 8.50±3.12 — 1.78±0.65 t/χ2 0.11 0.253 2.584 1.133 1.094 1.103 11.378 9.711 — 5.337 P 0.912 0.615 0.011 0.259 0.276 0.272 ＜0.001 ＜0.001 — ＜0.001組別 n 年齡（歲）性別（男/女）WBC（×109/L）RBC（×1012/L）HGB（g/L）PLT（×109/L）CRP（mg/L）ESR

圖1 血清PTX3在不同組中的表達(dá)水平

表2 血清PTX3水平在不同組間的比較 例

2.3 血清PTX3水平與其CRP、ESR和SLDAI的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清PTX3水平與CRP、ESR和SLDAI呈顯著正相關(guān)（r=0.353，P=0.002；r=0.268，P=0.020；r=0.390，P=0.001），見圖 2。

2.4 評估SLE疾病活動期影響因素的Logistic回歸分析 以疾病活動為因變量，以年齡、性別、WBC、RBC、PLT、PTX3、CRP、ESR 為自變量，進(jìn)行二元Logistic回歸分析；結(jié)果顯示在多因素Logistic回歸分析中，PTX3是評估SLE疾病活動期的獨立影響因素，見表3。

2.5 血清PTX3評估SLE的ROC曲線分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示，PTX3診斷SLE的最佳切點值為2.14 ng/mL，敏感性、特異性、曲線下面積（AUC）分別為 69.3%、82.7%、0.754（AUC的 95%CI為0.674～0.834）。PTX3區(qū)分SLE活動期與非活動期的最佳切點值為2.39 ng/mL，敏感性、特異性、AUC分別為 58.9%、89.5%、0.732（AUC 的95%CI為 0.615～0.849），見圖 3。

3 討論

PTX3是由8個質(zhì)粒亞基組成的同源多聚糖蛋白，每個亞基含有381個氨基酸，包括一個17aa信號肽。PTX3基因定位于人第三號染色體q25區(qū)，包括3個外顯子，分別編碼該蛋白的前導(dǎo)肽、N端和C端結(jié)構(gòu)域[10]。與其他長鏈PTX一樣，PTX3蛋白包括獨特的N端區(qū)（前蛋白中的殘基18～178）和C端區(qū)（前蛋白的殘基179～381），與短PTX有大約57%的同源相似性。目前發(fā)現(xiàn)許多轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合序列（如Pu-1、AP1、NF-κB、SP1 和 NF-IL6）位于人PTX3 的啟動區(qū)。NF-κB結(jié)合位點是PTX3基因轉(zhuǎn)錄活性所必需的。與IL-6介導(dǎo)生成的CRP相反，PTX3是針對于幾種主要炎性反應(yīng)信號而產(chǎn)生的，如TLR激動劑、IL-1和TNF-α等。PTX3可由多種天然免疫細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生（如中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等）[11]。此外，氧化和酶修飾的低密度脂蛋白和抗炎高密度脂蛋白均促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和人原代血管平滑肌細(xì)胞PTX3的產(chǎn)生。PTX3是先天免疫的重要組成部分，參與先天對病原體的抵抗、炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)和組織重塑[12]。PTX3產(chǎn)生的細(xì)胞的多樣性確保PTX3是在發(fā)生原發(fā)性炎性反應(yīng)的局部部位產(chǎn)生。獨特的局部生產(chǎn)途徑和即刻釋放系統(tǒng)提示PTX3可能成為反映先天免疫應(yīng)答和炎性反應(yīng)的初級和局部信號的敏感生物標(biāo)志物。近期研究顯示，PTX3可能是自身免疫性疾病的候選預(yù)后標(biāo)志物，并可能與疾病活動期密切相關(guān)[13]。本研究探討PTX3在SLE患者血清中的水平的變化，評估血清PTX3水平與疾病活動期的關(guān)系，將有助于SLE的診斷、治療方案的合理制定、治療效果的有效評估、預(yù)測復(fù)發(fā)以及臨床更好的管理SLE患者。

圖2 血清PTX3水平與CRP、ESR和SLDAI的相關(guān)性分析

表3 SLE患者疾病活動期影響因素的Logistic回歸分析

圖3 血清PTX3水平的ROC曲線分析

此次研究筆者采用ELISA方法檢測各組血清PTX3水平。結(jié)果顯示，與HC組比較，血清PTX3水平在SLE患者中是顯著增高的（P＜0.05）。此外，采用SLDAI對SLE患者進(jìn)行評估，分為活動期與非活動期，結(jié)果顯示處于活動期SLE患者的血清PTX3水平顯著高于非活動期SLE患者（P＜0.05）。進(jìn)一步，把活動期患者分為輕、中、重3期，結(jié)果顯示，隨著SLDAI評分的增高，血清PTX3水平水也逐漸增高（P＜0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示血清PTX3水平與 CRP、ESR 和 SLDAI呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。這些結(jié)果提示PTX3與疾病活動期有密切關(guān)系，可能參與了SLE炎性反應(yīng)過程的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示PTX3是評估SLE疾病活動期的獨立影響因素。這提示PTX3可以作為一個獨立的因素評估SLE疾病活動期。此外，以ROC分析為基礎(chǔ)，評價PTX3作為生物標(biāo)志物的質(zhì)量。進(jìn)一步進(jìn)行ROC曲線分析，結(jié)果顯示，PTX3診斷SLE的最佳切點值為2.14ng/mL，敏感性、特異性、AUC分別為69.3%、82.7%、0.754。PTX3區(qū)分SLE活動期與非活動期的最佳切點值為2.39 ng/mL，敏感性、特異性、AUC分別為58.9%、89.5%、0.732。Assandri等[14]研究顯示，SLE患者血漿PTX3濃度顯著高于健康對照組。此外，PTX3濃度與SLDAI相關(guān)，且可以反應(yīng)了疾病的活動性。采用ROC曲線分析法確定最佳截斷點（2.8 ng/mL），且有良好的靈敏度和特異性。Ismail等[15]的研究結(jié)果也提示PTX3水平與SLE患者的活動性相關(guān)。這與筆者的研究結(jié)果相類似。這說明PTX3可作為診斷SLE的潛在生物標(biāo)志物，并有助于疾病活動性的評估。

然而，筆者的研究有一些局限性，需要加以考慮。首先，筆者進(jìn)行了橫斷面研究，沒有觀察到血清PTX3水平的動態(tài)變化。第二，患者數(shù)量較少，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。然而，筆者的研究結(jié)果提示，PTX3是SLE一種合適的生物標(biāo)志物。

綜述所述，血清PTX3水平在SLE患者是顯著增高的，且與疾病活動程度相關(guān)。PTX3可作為一個新型生物標(biāo)記物用于SLE的診斷及疾病活動性的評估。此外，進(jìn)一步的縱向研究觀察血清PTX3水平的動態(tài)變化，可揭示PTX3是否是SLE疾病活性和預(yù)后的預(yù)測因子以及可能的藥理調(diào)節(jié)靶點，這需要進(jìn)行更加精確分析和更大樣本量的研究。