史慧芳

海南州牛A型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測結(jié)果分析

史慧芳

（青海省海南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 青海 共和 813000）

近10年來，青海省僅于2013年3月15日在西寧市城北區(qū)二十里堡鎮(zhèn)一養(yǎng)殖場發(fā)生一起種牛A型口蹄疫疫情。經(jīng)國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室確診，引起該起疫情的病毒毒株為Asia拓?fù)湫蚐ea-97(東南亞-97)毒株。參考實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為，該毒株與我國A型歷史毒株同源性僅為76%~78%，而與2010~ 2012年泰國、越南等東南亞國家毒株同源性在97%以上，因此認(rèn)為該毒株來自東南亞，是由境外傳入的，而非我國國內(nèi)存在的A型歷史毒株衍化而來[1]。海南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心根據(jù)《青海省2019年無規(guī)定動(dòng)物疫病區(qū)監(jiān)測方案》的通知要求，對(duì)五縣牛A型口蹄疫免疫抗體進(jìn)行監(jiān)測。為進(jìn)一步了解本州牛A型口蹄疫免疫抗體效果，筆者現(xiàn)對(duì)監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行整合分析，為本州牛A型口蹄疫免疫工作提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 以春季防疫、秋季防疫為時(shí)間段，采集海南州共和縣、貴德縣、貴南縣、興?？h、同德縣散養(yǎng)戶、規(guī)模養(yǎng)殖場牛血各180份，五縣共計(jì)900份。

1.2 準(zhǔn)備工作 采用型號(hào)TDD6M離心機(jī)分離900份牛血清，分裝入1.5ml離心管，以N1－N90為檢測順序進(jìn)行編號(hào)，4℃冷藏檢測備用。

1.3 試劑盒 口蹄疫A型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，批號(hào)20191101103-1，生產(chǎn)單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.4 檢測方法 采用液相阻斷ELISA的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測：（1）稀釋血清：在U型反應(yīng)板上A1~A10孔，75μlPBST加5μl被檢血清，稀釋至1:512，在第11列稀釋陽性對(duì)照血清，從1:2(即A11孔50μlPBST加50μl陽性對(duì)照血清)稀釋至1:256；A12~B12孔稀釋陰性對(duì)照血清，從1:2稀釋至1:4；E12~H12孔為病毒抗原對(duì)照孔。（2）加病毒抗原：將病毒抗原用PBST稀釋至1:10，以50μl/孔的量加入到被檢血清、陰陽性對(duì)照血清的每一稀釋孔內(nèi)，4孔病毒抗原對(duì)照孔僅加入100μl/稀釋至1:10的病毒抗原。封板，振蕩，4℃靜置過夜或37℃溫育90min。（3）將抗原抗體混合液從U型反應(yīng)板上按次序轉(zhuǎn)移至已包被口蹄疫A型兔抗的ELISA板上，50μl/孔，封板，37℃溫育60min。（4）用PBST連續(xù)洗板3~5次，拍干，按50μl/孔加口蹄疫A型豚鼠抗體工作液(紅色)，封板，37℃溫育30min。（5）同上洗板3~5次，拍干，按50μl/孔加兔抗豚鼠IgG-HRP工作液(藍(lán)色)，封板，37℃溫育30min。（6）同上洗板3~5次，拍干。將TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混勻，加入混勻后的底物溶液50μl/孔，置37℃顯色15min。（7）顯色反應(yīng)結(jié)束后，加終止液50μl/孔，終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上讀取D450nm值，計(jì)算結(jié)果。

2 結(jié)果

檢測共和縣牛血清180份，陽性135份，陽性率為75%；貴德縣牛血清180份，陽性67份，陽性率為37.22%；貴南縣牛血清180份，陽性105份，陽性率為58.33%；興?？h牛血清180份，陽性159份，陽性率為88.33%；同德縣牛血清180份，陽性116份，陽性率為64.44%。由附圖可清楚地觀察到五縣監(jiān)測結(jié)果的差異。

附圖 海南州牛A型口蹄疫檢測結(jié)果

3 討論與小結(jié)

3.1 不同縣免疫效果的差異分析 檢測結(jié)果顯示，海南州五縣中，興海縣牛A型口蹄疫陽性數(shù)最多，陽性率最高，貴德縣陽性數(shù)最少，陽性率最低。表明興?？h牛A型口蹄疫免疫抗體效果最高，貴德縣效果最低，共和縣效果良好，貴南縣和同德縣效果一般，需要加強(qiáng)免疫。筆者主要就監(jiān)測的興?？h和貴德縣免疫效果差異較大的原因如下作一分析：（1）海南州除貴德縣以外，其他四縣為牧區(qū)，貴德縣為農(nóng)區(qū)，農(nóng)區(qū)散養(yǎng)戶的?；鶖?shù)小，多數(shù)情況為每戶1~3頭牛，存在“護(hù)犢”心理，且農(nóng)戶對(duì)防疫工作抵觸心理較強(qiáng)，認(rèn)為施針免疫的過程中，牛會(huì)受到驚嚇，導(dǎo)致精神委頓，食欲不佳，出現(xiàn)不吃料或吃料少的情況。所以貴德縣防疫員實(shí)施防疫過程較其他四縣困難。此外，貴德縣基層獸醫(yī)站設(shè)施簡陋，設(shè)備緊缺，存在基本防疫物資缺貨，防疫設(shè)備老舊，使用不靈活或無法使用的情況。例如：大部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站使用的高速離心機(jī)為十多年前購置的老式離心機(jī)，運(yùn)轉(zhuǎn)生銹或者無法運(yùn)轉(zhuǎn)，部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站需借用衛(wèi)生院的離心設(shè)備分離血清，給基層工作的順利進(jìn)行帶來了一定困難。（2）海南州興?？h為牧區(qū)，牛的養(yǎng)殖基數(shù)大，牦牛專業(yè)合作社數(shù)量多，規(guī)模大，且農(nóng)牧民對(duì)于防疫工作配合度高，支持力度大，所以防疫工作效果好，此外興?？h村級(jí)防疫員的工資津貼得到了一定的落實(shí)，大大增加了村級(jí)防疫員的工作積極性，對(duì)于防疫工作也大力支持，高度配合。這在一定程度上也是決定興海縣免疫工作成效優(yōu)良的一個(gè)重要因素。

3.2 建議 （1）貴德縣基層獸醫(yī)站需加強(qiáng)宣傳力度。對(duì)于農(nóng)戶存在抵觸心理的情況，根本原因還是宣傳不到位，宣傳力度小，農(nóng)戶意識(shí)不到免疫的重要性。要通過分發(fā)宣傳冊，走街訪戶，“鄉(xiāng)村大喇叭”，微信公眾號(hào)等方式，將防疫工作的重要性和益處宣傳到每家每戶，在一定程度上讓農(nóng)戶減輕對(duì)免疫工作的抵觸心理，從而支持并配合獸醫(yī)工作人員的防疫工作；（2）加強(qiáng)免疫工作。貴德縣的牛A型口蹄疫免疫抗體水平低，所以需要進(jìn)行補(bǔ)免，在下一年度春季防疫和秋季防疫中需加大免疫力度，增強(qiáng)免疫密度，提升整體免疫水平；（3）上級(jí)獸醫(yī)管理部門需增強(qiáng)扶持力度。鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站條件簡陋，設(shè)備老舊，物資匱乏，村級(jí)防疫員積極性不高，需要上級(jí)獸醫(yī)管理部門大力支持，下?lián)芟鄳?yīng)的經(jīng)費(fèi)，分配防疫物資，落實(shí)村級(jí)防疫員的工資津貼等，以便于基層獸醫(yī)站順利開展各項(xiàng)工作；（4）上級(jí)管理部門應(yīng)加強(qiáng)各縣溝通交流。以提升海南州整體免疫效果為目標(biāo)，上級(jí)管理部門應(yīng)大力開展經(jīng)驗(yàn)交流會(huì)等活動(dòng)，讓各縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站參與其中，相互交流工作經(jīng)驗(yàn)，借鑒工作成效優(yōu)良地區(qū)的經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)識(shí)到各縣工作方式的差異和自身改進(jìn)的方向，加強(qiáng)溝通交流，共同學(xué)習(xí)進(jìn)步。

3.3 小結(jié) 通過監(jiān)測數(shù)據(jù)的分析，可以認(rèn)識(shí)到自身免疫工作的優(yōu)點(diǎn)和劣勢，免疫效果良好的地區(qū)應(yīng)繼續(xù)保持，在維持當(dāng)下免疫水平的基礎(chǔ)上爭取更上一層樓。免疫效果落后的地區(qū)應(yīng)借鑒優(yōu)勢地區(qū)的方式、方法，結(jié)合自身地域特點(diǎn)，加強(qiáng)免疫工作，提升免疫水平，爭取向其他優(yōu)良地區(qū)看齊。牛A型口蹄疫是疫病監(jiān)測任務(wù)的重點(diǎn)，提升海南州整體免疫水平，做好免疫工作，是畜牧獸醫(yī)工作者義不容辭的責(zé)任，也是保障牛羊等牲畜健康生長的重要一環(huán)。

[1] 青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組編. 青海省主要?jiǎng)游镆卟×餍胁W(xué)調(diào)查(2006-2015年)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2018, 53.

（2020–04–08）

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