賈蘭蘭 王依依 華躍進 徐 虹

(浙江大學原子核農(nóng)業(yè)科學研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和浙江省核農(nóng)學重點實驗室，浙江 杭州 310029)

瓣狀核酸內(nèi)切酶(flap endonuclease 1，F(xiàn)EN1)是一種結(jié)構(gòu)特異性5′核酸酶，在人類、嚙齒類、兩棲類、酵母、植物和古細菌中均保守存在，其主要分布于細胞核和線粒體[1]，能夠識別特定的核酸分叉結(jié)構(gòu)，并切除含游離5′末端的單鏈核酸，因而得名。 除了5′-3′ flap核酸內(nèi)切酶(FEN)活性[2]，F(xiàn)EN1 蛋白還具備一定的缺口核酸內(nèi)切酶(gap endonuclease，GEN)活性[3]和核酸外切酶(exonuclease，EXO)活性[4]。 研究發(fā)現(xiàn)，酵母中FEN1 同源基因Rad27 突變體表現(xiàn)出自發(fā)突變率升高的增變表型[5]，并且突變體的質(zhì)粒及微衛(wèi)星序列表現(xiàn)出不穩(wěn)定現(xiàn)象[6]，Rad27 在線粒體誘變、雙鏈斷裂修復[7]、同源重組修復[8]、岡崎片段成熟[9]、線粒體DNA完整性維持[10]等過程中發(fā)揮重要作用；線蟲中FEN1同源基因CRN-1 與CPS-6(Endo G)共同介導凋亡過程中DNA 的降解[3]；擬南芥中，F(xiàn)EN1 能夠維持基因組穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄基因沉默[11]。 FEN1 廣泛參與細胞內(nèi)的各種DNA 代謝途徑，如岡崎片段成熟、長片段堿基切除修復、細胞凋亡DNA 片段化、端粒穩(wěn)定性維持、停滯復制叉重啟等[12-14]，在正常啟動DNA 復制、重組與修復[15-17]，以及維持基因組的穩(wěn)定性[18]等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。 因此，F(xiàn)EN1 是細胞維持遺傳穩(wěn)定性的重要基因之一，對FEN1 蛋白功能調(diào)控的研究具有重要的意義。

當生物體內(nèi)編碼FEN1 的基因出現(xiàn)異常時，可能會導致FEN1 在體內(nèi)不正常地增多、減少或出現(xiàn)功能異常，從而引起基因組的不穩(wěn)定，進而增加自身免疫疾病[19]、慢性炎癥或腫瘤[20]的發(fā)生幾率，嚴重危害機體健康。 研究表明，F(xiàn)EN1 在包括前列腺癌[21]、胰腺癌[22]、肺癌[23]、胃癌[24]、乳腺癌[25]、卵巢癌[26]、食管癌[27]、狼瘡性腎炎[28]等疾病中均表達異常，導致腫瘤發(fā)生率增高或加快腫瘤的發(fā)展進程[29]，已成為一種潛在的腫瘤標志物[6]。 因此，F(xiàn)EN1 的活性和定位必須受到極為嚴格的控制。

目前已知FEN1 細胞內(nèi)存在3 種主要的功能調(diào)節(jié)方式:1)細胞的區(qū)室化:在正常狀態(tài)下，F(xiàn)EN1 C 端的核定位信號基序會使其主要定位于細胞核，并高度濃縮在核仁區(qū)[30]，但當細胞遭受紫外(UV)處理之后，核仁中的FEN1 會被磷酸化，并轉(zhuǎn)移至核質(zhì)中，通過其定位調(diào)節(jié)FEN1 的活性與功能。 2)蛋白質(zhì)的相互作用:目前已鑒定出來自各種DNA 代謝途徑的超過34 種蛋白質(zhì)與FEN1 相互作用，如在DNA 復制的過程中，F(xiàn)EN1 被有效地招募到增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)上，發(fā)揮切割RNA 引物的功能。 對于長片段RNA 引物，F(xiàn)EN1 可以與DNA2 一起完成切割[31]。 在DNA 修復中，F(xiàn)EN1 能夠激活長片段堿基切除修復(long-patch base excision repair，LPBER)中相關(guān)蛋白(如Polβ)酶活性，與PCNA 形成復合體發(fā)揮核心作用[32-33]。 此外，F(xiàn)EN1 的核酸酶活性及相互作用的Werner 綜合征蛋白(Werner syndrome protein， WRN)是端粒穩(wěn)定性所必需的[34]，對維持基因組穩(wěn)定性至關(guān)重要。 在細胞凋亡中，F(xiàn)EN1 與凋亡相關(guān)蛋白Endo G 的相互作用極大地增強了GEN 和EXO 活性，這對處理凋亡DNA 片段化十分重要[4]。3)翻譯后修飾(post-translational modification，PTM):FEN1 可被PRMT5 甲基化(methylation)[35]，被Cdk-Cyclin 激酶復合物磷酸化(phosphorylation)[36]，被p300 乙酰化及發(fā)生類泛素化(SUMOylation)[37-38]和泛素化修飾(ubiquitylation)等。

近年來，蛋白質(zhì)翻譯后修飾研究的興起為生物體內(nèi)FEN1 功能的精細調(diào)控機制研究提供了新的思路和方向。 它們在調(diào)節(jié)FEN1 的細胞定位、特定底物酶切活性、穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)相互作用等過程中發(fā)揮著重要作用。 本文對FEN1 翻譯后修飾的研究進展進行總結(jié)和分析，以期為后續(xù)研究提供參考。

1 FEN1 的翻譯后修飾

1.1 磷酸化

Henneke 等[36]研究發(fā)現(xiàn)，在細胞S 期后期，細胞周期蛋白依賴性激酶Cdk1-Cyclin A 或Cdk2-Cyclin E復合體可以將FEN1 的絲氨酸殘基(Ser187)磷酸化，該磷酸化會隨著細胞周期的調(diào)節(jié)逐漸增加。 體外活性分析發(fā)現(xiàn)，磷酸化后的FEN1 蛋白的GEN 和EXO 活性均降低，并消除了與PCNA 的結(jié)合，但其與DNA 的結(jié)合不受影響。 此外，F(xiàn)EN1 突變體S187A 細胞株表現(xiàn)出細胞周期S 期積累，表明通過細胞周期調(diào)節(jié)的FEN1磷酸化對于復制叉的調(diào)節(jié)十分重要。 Guo 等[30]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EN1 在HeLa 細胞的核仁中富集，而當細胞受到UV處理后，F(xiàn)EN1 會遷移到核質(zhì)中并參與DNA 上的UV交聯(lián)解析，在修復停滯的DNA 復制叉中發(fā)揮作用。 該過程的響應(yīng)依賴于FEN1 的磷酸化修飾，磷酸化的FEN1 會協(xié)助其從核仁轉(zhuǎn)移以參與響應(yīng)UV 照射的DNA 損傷修復。 最新研究結(jié)果還揭示了FEN1 磷酸化在抵抗氧誘導的DNA 損傷和維持適當?shù)募毎芷谥邪l(fā)揮重要作用，并調(diào)節(jié)胎兒到新生兒過渡期間的心臟發(fā)育[39]。

1.2 甲基化

Singh 等[25]發(fā)現(xiàn)FEN1 在多種癌癥中顯著上調(diào)，且FEN1 的異常表達與腫瘤細胞中FEN1 啟動子內(nèi)的CpG 島的低甲基化有關(guān)。 隨后，Guo 等[35]鑒定了FEN1 的甲基化修飾位點，并發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(protein arginine N-methyltransferase 5，PRMT5)能以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine，SAM)作為甲基供體對FEN1 的精氨酸殘基(arginine，Arg192)進行甲基化修飾。 且FEN1 的R192 位點甲基化會抑制FEN1 的S187 位點磷酸化從而確保其與PCNA 緊密結(jié)合，在DNA 復制的過程中共同發(fā)揮作用。 研究表明，賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶SET7 可以在體內(nèi)以細胞周期依賴性方式使FEN1 的賴氨酸殘基(Lys377)進行單甲基化修飾[40]，K377me1 在S 期以SET7 依賴性方式上調(diào)，當離開S 期時又降低，且這一修飾對其活性沒有任何影響，也未影響與重要伴侶(如BLM、PCNA 和DNA2)的相互作用。 早期研究已證明FEN1 的Lys377能夠被組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300 乙?；?，以響應(yīng)UV 損傷[41]。 但FEN1 K377me1 對紫外線損傷沒有調(diào)節(jié)作用，也未響應(yīng)甲基甲磺酸鹽(mitomycin，MMS)的DNA損傷處理， 但其突變體 K377R 對羥基脲(hydroxycarbamide，HU)藥物更加敏感，這表明FEN1 K377me1 位點在細胞對復制應(yīng)激反應(yīng)中至關(guān)重要。

1.3 類泛素化

在細胞內(nèi)，F(xiàn)EN1 的核酸酶活性和蛋白互作需要被嚴格調(diào)節(jié)，與此同時，F(xiàn)EN1 蛋白的胞內(nèi)濃度也需要被嚴格控制，而這一調(diào)節(jié)過程又是高度依賴于細胞周期進行的。 在S 期結(jié)束，當FEN1 完成DNA 復制后，F(xiàn)EN1 的去向可能對細胞的生存至關(guān)重要。 研究者提出了兩種可能的假設(shè)[42]:其一，F(xiàn)EN1 在完成復制的復雜過程后，再次被修飾利用；其二，F(xiàn)EN1 在完成復雜的功能后，被降解清除，以免過度積累造成對細胞的損傷，這也是大多數(shù)蛋白質(zhì)的命運。 正因如此，F(xiàn)EN1 的類泛素(small ubiquitin-like modifier，SUMO)化和泛素化被發(fā)現(xiàn)并研究。

大量研究表明，類泛素(SUMO)化在蛋白質(zhì)的降解中發(fā)揮著重要作用[43-44]。 哺乳動物有4 個SUMO的旁系同源體:SUMO1、SUMO2/SUMO3 和SUMO4。SUMO 主要存在于細胞核中，其中，SUMO1 在核內(nèi)廣泛存在，主要修飾生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，而SUMO2/3主要分布于核質(zhì)，在應(yīng)激蛋白的修飾中發(fā)揮作用，SUMO4 是新近發(fā)現(xiàn)的一種SUMO 分子[40]，且只在腎臟、淋巴和脾臟中表達[45]。 近期，浙江大學華躍進課題組研究發(fā)現(xiàn)，當細胞面臨UV 脅迫時，F(xiàn)EN1 會發(fā)生I型SUMO 化修飾[46]，而且FEN1 蛋白的磷酸化作用能夠促進FEN1 的I 型SUMO 化修飾，進而影響FEN1 與9-1-1 復合體的結(jié)合，參與細胞的損傷修復進程。 而FEN 1 的SUMO3 修飾則是其降解途徑的一個重要步驟，F(xiàn)EN1 在體外或細胞內(nèi)均可以發(fā)生SUMO3 修飾。質(zhì)譜法鑒定出FEN1 的主要SUMO3 修飾位點位于賴氨酸殘基(Lys168)。 FEN1 的突變體蛋白K168R 在體外或者細胞內(nèi)均不再被SUMO3 修飾，且這一SUMO3修飾依賴于磷酸化修飾，如果FEN1 被磷酸化，則該蛋白的SUMO 化的效率會顯著增加[37]。 早期研究表明，SUMO4 修飾可能會增加I 型糖尿病的患病風險[45]，但在FEN1 中的功能還有待進一步研究。

1.4 泛素化

盡管SUMO 化修飾與泛素化修飾采用相似的修飾途徑，且修飾過程中均有3 種酶(激活酶E1、結(jié)合酶E2 和連接酶E3)發(fā)揮作用，但修飾過程中的酶和發(fā)揮的功能卻完全不同。 研究表明，F(xiàn)EN1 的賴氨酸殘基(Lys354)會被UBE1/UBE2M/PRP19 復合物泛素化，而該過程依賴于FEN1 本身的3 型SUMO 化[37]。 被泛素化修飾后的FEN1 可以被蛋白酶體的識別，并通過泛素化酶蛋白酶體進行降解，從而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)FEN1的蛋白濃度，維持基因組的穩(wěn)定。

1.5 乙?；?/h3>

Hasan 等[41]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄共激活因子p300 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶可以將FEN1 的4 個賴氨酸殘基(Lys354、Lys375、Lys377 和Lys380)乙酰化。 在該過程中，p300的HAT 結(jié)構(gòu)域發(fā)揮著主要的作用，所有鑒定的乙?；嚢彼釟埢嘉挥贑 末端，前期研究已證明FEN1 的C 末端對DNA 結(jié)合很重要[47]，而且FEN1 的C 末端尾部內(nèi)的大多數(shù)賴氨酸在真核生物中是保守的，說明這4 個殘基的乙?；赡苁歉叩日婧松镏羞M化上保守的調(diào)節(jié)機制[48]。 研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EN1 的乙?；@著降低了FEN1 的DNA 結(jié)合能力和核酸酶活性，抑制了FEN1 與9-1-1 復合物(Rad9/Rad1/Hus1 細胞周期檢查點復合物)的相互作用[49]，但與PCNA 的結(jié)合能力不受影響[50]。

Wang 等[51]在進行乙?；x組學分析時發(fā)現(xiàn)了FEN1 三個乙?；稽c(Lys80、Lys267、Lys375)，但其中有兩個位點(Lys80 和Lys267)在前期的體外試驗中未被發(fā)現(xiàn)，這些新位點的功能也尚不清楚。 華躍進課題組[52]近期研究也鑒定到了FEN1 的新乙?；揎椢稽c(Lys125、Lys252、Lys254 和Lys314)，結(jié)果顯示，這些位點的突變會影響該蛋白質(zhì)的DNA 酶切活性和DNA 底物結(jié)合活性。 突變株K125A 和K252/K254A的乙?；矫黠@降低，表明這些位點是FEN1 乙酰化修飾的關(guān)鍵位點。 此外，細胞周期和細胞凋亡率的研究結(jié)果顯示，K252A 和K252/K254A 突變株的G1期比例顯著增加，K252/K254A 突變細胞對UV 誘導的DNA 損傷更敏感，凋亡細胞百分比顯著增加[52]，說明這些位點的乙酰化修飾在維持細胞正常生理狀態(tài)和基因組穩(wěn)定性中都發(fā)揮著一定的作用，但具體的作用機制仍有待進一步研究。

1.6 琥珀?；?/h3>

Weinert 等[53]對大腸桿菌(E. coli)、酵母(yeast)和人類宮頸癌細胞(HeLa cell)中的蛋白質(zhì)賴氨酸乙?；顽牾；揎椊M學進行了系統(tǒng)的分析，發(fā)現(xiàn)FEN1 存在(Lys200 和Lys354)琥珀酰化修飾，序列分別為HLTASEAK(su)K 和VTGSLSSAK(su)R，且這兩個位點和該蛋白質(zhì)鑒定到的乙?；揎椢稽c是重疊的。 華躍進課題組[54]的試驗結(jié)果顯示，F(xiàn)EN1 突變體K200E 的核酸內(nèi)切酶切割底物效率較FEN1 野生型(WT)降低約38%(表1)，表明這一位點琥珀?；c酶活性的相關(guān)性。 但目前有關(guān)FEN1 琥珀?；难芯枯^少，關(guān)于這一位點琥珀?；墓δ芤灿写M一步研究。

2 FEN1 翻譯后修飾的程序性調(diào)控

2.1 磷酸化和甲基化的關(guān)系

研究表明，F(xiàn)EN1 甲基化和磷酸化修飾會隨著細胞周期的進程發(fā)生動態(tài)變化。 在DNA 復制S 期早期，F(xiàn)EN1 R192 的甲基化抑制了FEN1 S187 的磷酸化，使FEN1 替代聚合酶(Polδ 或Polβ)并與PCNA 發(fā)生相互作用，完成RNA 引物的切割，形成成熟的岡崎片段。非甲基化的FEN1 被Cdk/Cyclin E 復合物磷酸化，迫使FEN1 與PCNA 和DNA 底物解離，繼而讓連接酶LigⅠ取代FEN1 的位置完成對缺口的連接。 FEN1 的甲基化抑制其磷酸化，F(xiàn)EN1 的甲基化形式(而不是磷酸化形式)，與增殖細胞核抗原(PCNA)強烈相互作用，確保其反應(yīng)“開啟”和“關(guān)閉”時間。 一旦破壞FEN1 精氨酸甲基化，其與PCNA 蛋白的相互作用也會不穩(wěn)定，進而影響其定位到DNA 復制或修復位點。這兩種修飾平衡的紊亂，會導致細胞內(nèi)岡崎片段成熟的缺陷，細胞周期進展的延遲，DNA 損傷的累積和全基因組突變頻率的升高。

2.2 磷酸化和泛素化的關(guān)系

FEN1 的泛素化是一種常見的PTM，通過將泛素分子結(jié)合到靶蛋白上，促進靶蛋白被蛋白酶體識別，誘導其降解。 而SUMO 化是一種不同的PTM，不介導靶蛋白的蛋白酶體降解，而是能夠可逆性的修飾靶蛋白，進而參與其定位及功能調(diào)控[42]。 FEN1 的類泛素化和泛素化共同在FEN1 的降解中發(fā)揮作用。 首先，F(xiàn)EN1的磷酸化會促進其發(fā)生類泛素化，F(xiàn)EN1 的類泛素化修飾誘導FEN1 的泛素化修飾，使得泛素化修飾的FEN1 在蛋白酶體的介導下降解。 FEN1 的SUMO 化在FEN1 蛋白的降解過程中起著類似于信號的作用，誘導其繼續(xù)發(fā)生泛素化修飾，繼而準確地調(diào)節(jié)細胞內(nèi)FEN1 的活性和表達量[42]。

2.3 乙酰化和琥珀?；年P(guān)系

FEN1 的乙?；顽牾；揎椌l(fā)生于賴氨酸殘基上。 賴氨酸乙?；徽J為是在細胞生理學和病理學等方面的重要調(diào)節(jié)機制；賴氨酸琥珀?；且环N新發(fā)現(xiàn)的類似于賴氨酸乙酰化的翻譯后修飾類型，在各種生物體中廣泛存在。 由于賴氨酸琥珀酰化比乙酰化的結(jié)構(gòu)更為復雜，這種修飾便可能誘導FEN1 的化學性質(zhì)及其結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生更大的變化[55]。 賴氨酸乙?；顽牾；堑鞍踪|(zhì)酰基化的主要類型，在許多細胞過程中都是重要的，包括基因轉(zhuǎn)錄、細胞代謝、DNA 損傷響應(yīng)等。 FEN1 琥珀?；鸵阴；揎検莿討B(tài)調(diào)節(jié)的，在不同細胞和組織中存在修飾位點差異。此外，賴氨酸乙酰化和賴氨酸琥珀?；男揎椢稽c的重疊暗示這兩種修飾之間可能存在著某種互補或者拮抗作用。 然而，F(xiàn)EN1 蛋白的這兩種修飾在細胞中的具體生物學功能和調(diào)節(jié)方式仍有待進一步挖掘。

近十幾年，F(xiàn)EN1 蛋白翻譯后修飾的研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)存在著多種翻譯后修飾類型。 這些修飾或相互協(xié)作，或相互拮抗，影響著FEN1 的細胞定位、酶切活性、蛋白互作及蛋白質(zhì)本身的穩(wěn)定性。 在細胞周期S 期早期，F(xiàn)EN1 發(fā)生甲基化修飾，甲基化的FEN1 取代Polδ 與PCNA 密切結(jié)合，在分枝結(jié)構(gòu)處進行切割。 當FEN1 被去甲基化后，繼而會發(fā)生磷酸化修飾，迫使FEN1 從PCNA 和DNA 底物的復合體上解離，繼而連接酶LigⅠ取代FEN1 的位置完成對缺口的連接[29]。 磷酸化的FEN1 在細胞內(nèi)存在兩種去向[56]，第一種是細胞處于正常生長狀態(tài)時，在S 末期從復制復合物上脫落下來，作為FEN1 的降解起始步驟，促進FEN1 的2/3 型SUMO 化，繼而誘導泛素化蛋白酶降解體降解；第二種是當細胞在復制過程中遇到了一定的外界脅迫，導致細胞內(nèi)出現(xiàn)了大量的DNA 損傷，此時，磷酸化的FEN1 則會被1 型SUMO 化，從而更易于被9-1-1 復合體招募到損傷的DNA 位點，進行修復(圖1)。 這些修飾過程環(huán)環(huán)相扣，高度協(xié)調(diào)，一旦其中某種修飾無法正常產(chǎn)生，則會導致細胞周期的紊亂，錯誤DNA 的積累，甚至還會造成染色體的異常分離，進而影響細胞的基因組穩(wěn)定性。 此外，F(xiàn)EN1 的乙?；揎椇廷裥蚐UMO 化、磷酸化一樣，也會在UV 等DNA損傷劑處理下有所提升[41]，然而其在DNA 損傷響應(yīng)和修復中的生物學意義尚未知。 這三種修飾(乙?；?、磷酸化、SUMO 化)之間是否有一定的聯(lián)系仍不清楚。

3 總結(jié)與展望

據(jù)不完全統(tǒng)計，研究者們已鑒定出的蛋白質(zhì)的翻譯后修飾種類已經(jīng)超過400 種。 幾乎所有的蛋白質(zhì)均可發(fā)生PTM，且同一種蛋白質(zhì)還可能同時發(fā)生多種PTM，共同有序地調(diào)節(jié)著細胞的生命活動。 PTM 的發(fā)生會改變蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)與功能，每一個小的PTM 可能顯著改變蛋白質(zhì)的活性與功能，而多種PTM的共同發(fā)生，又將產(chǎn)生極其復雜的變化。 植物中，琥珀?；瘯淖兊鞍椎娜芙庑缘刃再|(zhì)，在重金屬、高鹽高溫、輻照等脅迫條件下，農(nóng)作物的DNA 的甲基化會產(chǎn)生顯著差異，嚴重威脅到農(nóng)作物生長[57-58]。 總之，同一種蛋白質(zhì)，即使只發(fā)生一種PTM，也可能賦予不同的功能；發(fā)生在不同氨基酸上的同一種修飾也將產(chǎn)生不同的功能狀態(tài)；不同種修飾的功能及參與不同生物過程就更加復雜。 PTM 種類的復雜性及其對蛋白質(zhì)功能調(diào)控的多樣性共同決定了這是一個具有挑戰(zhàn)性的研究領(lǐng)域。

圖1 FEN1 在細胞周期中程序性翻譯后修飾的研究模型[29，31]Fig.1 FEN1 model for post-translational posttranslational modification in cell cycle[29，31]

近十幾年來，有關(guān)FEN1 翻譯后修飾的研究也已經(jīng)取得了相當大的進展。 研究者建立了FEN1 翻譯后修飾的周期依賴程序性修飾模型，并勾勒出主要的框架，但針對整個翻譯后修飾組學來講，這些研究僅是冰山一角。 如，早期研究已經(jīng)證明FEN1 C 末端的幾個氨基酸殘基(K354、K375、K377 和K380)能夠被組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300 乙?；皂憫?yīng)UV 損傷[41]。 同時，這些乙?；揎椢稽c還存在著其他的修飾類型，如K354 還可以發(fā)生琥珀酰化， K377 位點還能被甲基化等。 但這些位點發(fā)生不同類型修飾的具體生理狀態(tài)和所需條件，以及不同修飾后FEN1 蛋白的具體生物學功能仍需進一步深入研究。

由于FEN1 在不同物種中的高度保守性，使得這些基礎(chǔ)研究有較高的借鑒性。 因此，如何通過調(diào)控FEN1 蛋白的功能或表達量來維持基因組的穩(wěn)定性，進而提高物種的抗逆性，是未來研究的一個重要方向，該方向，包括FEN1 蛋白的翻譯后修飾改變與物種特性變化的相關(guān)性關(guān)系，以及FEN1 蛋白的乙?；顽牾；谥参锎x中的作用等。

在FEN1 蛋白自身復雜的翻譯后修飾調(diào)控的同時，F(xiàn)EN1 的互作蛋白的修飾也可能存在著變化。 因此，要明確這一過程的生物學意義，僅局限于FEN1 蛋白的修飾顯然不夠。 例如，p300 除了能使FEN1 乙?；€能使DNA2 乙?；灰阴；腄NA2 能以更高的親和力結(jié)合其DNA 底物，并刺激其5′-3′核酸內(nèi)切酶、5′-3′解旋酶和DNA 依賴性ATP 酶活性[59]。 p300 對這兩種內(nèi)切核酸酶活性的差異調(diào)節(jié)表明，乙?；軌虼龠M細胞中較長片段形成的機制，從而更有效地解析岡崎片段成熟和DNA 損傷修復過程中產(chǎn)生的片段結(jié)構(gòu)。 此外，Takawa 等[60]發(fā)現(xiàn)組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶SETD8 可以在PCNA 的賴氨酸殘基(Lys248)上進行甲基化修飾，PCNA 和FEN1 之間的不同親和力并不受FEN1 的磷酸化狀態(tài)的調(diào)節(jié)，而是受PCNA 的甲基化狀態(tài)的調(diào)節(jié)，表明這些修飾將可能存在著更為復雜的調(diào)節(jié)機制。 因此，結(jié)合細胞生物學和結(jié)構(gòu)生物學研究動態(tài)的蛋白質(zhì)修飾組學十分必要。