李寧宇，劉利平，華雪銘，李 向，姚靜婷，吳 盟

（1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境生態(tài)研究中心，上海海洋大學(xué)，上海 201306；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海海洋大學(xué)，上海 201306；3.水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海海洋大學(xué)，上海 201306）

日本鰻鱺（Anguilla japonica）是一種富含蛋白質(zhì)和脂肪的優(yōu)良食用魚(yú)類(lèi)，其味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，具有一定的藥用功能，自古以來(lái)都是我國(guó)民間珍貴的滋補(bǔ)食物，被視為“水中人參”。日本鰻鱺仔魚(yú)期的餌料是其存活和變態(tài)的關(guān)鍵［1］，但可供參考的相關(guān)營(yíng)養(yǎng)飼料學(xué)資料非常有限，嚴(yán)重阻礙了日本鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。魚(yú)粉一直以來(lái)是鰻鱺飼料中不可或缺的優(yōu)質(zhì)蛋白源［2］，但國(guó)內(nèi)魚(yú)粉資源有限，高度依賴(lài)進(jìn)口。隨著世界范圍內(nèi)水產(chǎn)品消費(fèi)量的增加，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對(duì)魚(yú)粉的需求量急劇上升，魚(yú)粉價(jià)格一直居高不下并成為飼料行業(yè)可持續(xù)發(fā)展的瓶頸［3］。因此減少對(duì)魚(yú)粉的依賴(lài)是日本鰻鱺仔魚(yú)期飼料研發(fā)需要重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題之一。

豆粕蛋白含量較高，是較為理想的蛋白源［4］。已有的應(yīng)用研究表明，在不同水產(chǎn)動(dòng)物間，雖然豆粕替代魚(yú)粉的最適量存在較大差異，但普遍呈現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)隨豆粕用量增大而下降的趨勢(shì)［5-8］。蛋氨酸含量不足和抗?fàn)I養(yǎng)因子含量較高是限制豆粕利用的主要原因，飼料中氨基酸不平衡對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)生的負(fù)面效果與飼料中豆粕對(duì)魚(yú)粉的替代量成正比［9］。豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子易導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物腸胃炎癥，從而影響其生長(zhǎng)和生理功能［10］。有研究表明，利用微生物發(fā)酵法對(duì)原料豆粕進(jìn)行發(fā)酵能更加有效地利用豆粕，減少其負(fù)面效果。發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)生的豐富酶類(lèi)可把大分子量的大豆蛋白高效轉(zhuǎn)化為大豆肽，與具有相同氨基酸組成的大豆蛋白相比，大豆肽表現(xiàn)出許多特有的生化特性和優(yōu)勢(shì)［11］。在條石鯛（Oplegnathus fasciatus）［12］、 雜 交 羅 非 魚(yú)（Oreochromis nilolicus×O.aureus）［13］、鯉（Cyprinus carpio）［14］等多種水產(chǎn)動(dòng)物的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中用發(fā)酵豆粕分別替代60%、34.2%和100%的魚(yú)粉并不會(huì)顯著影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和存活；適量添加發(fā)酵豆粕還有助于改善水產(chǎn)動(dòng)物的消化生理特性，如飼料中添加20%發(fā)酵豆粕使黑鯛（Acanthopagrus schlegelii）腸指狀絨毛高度增加、數(shù)量增多，絨毛間隙變小，腸絨毛彎曲度增加［15］。也有研究發(fā)現(xiàn)，相比只使用發(fā)酵豆粕的飼料，在含有15%發(fā)酵豆粕的飼料中輔以15.45%的豆粕會(huì)促進(jìn)羅氏沼蝦（Macrobrachium rosenbergii）的生長(zhǎng)［16］。

豆粕發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)特性發(fā)生明顯改變，其成本也顯著高于普通豆粕，因此配方中發(fā)酵豆粕和普通豆粕的配比將直接影響飼料質(zhì)量、價(jià)格以及水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康，但相關(guān)研究對(duì)此鮮有報(bào)道。鑒于此，本文以日本鰻鱺黑仔鰻為研究對(duì)象，研究發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)其生長(zhǎng)性能、血清和肝臟的抗氧化能力以及生化指標(biāo)的影響，并在此基礎(chǔ)上探討豆粕在不同發(fā)酵豆粕替代水平下可能發(fā)揮的作用，旨在為日本鰻鱺黑仔鰻飼料中魚(yú)粉、發(fā)酵豆粕和豆粕的合理使用提供理論依據(jù)，為后續(xù)研究的開(kāi)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼料配方及制作

參考日本鰻鱺黑仔鰻營(yíng)養(yǎng)需求（SC／T 1004-2010），設(shè)計(jì)5組實(shí)驗(yàn)飼料。根據(jù)發(fā)酵豆粕的用量，分別將各組定義為對(duì)照組T0（60%魚(yú)粉+5%豆粕）、試驗(yàn)組分別為T(mén)10（53%魚(yú)粉+5%豆粕+10%發(fā)酵豆粕）、T20（47%魚(yú)粉+5%豆粕+20%發(fā)酵豆粕）、T14.5（53%魚(yú)粉 +14.5%發(fā)酵豆粕）、T24.5（47%魚(yú)粉 +24.5%發(fā)酵豆粕）。將飼料原料充分粉碎，過(guò)100目篩網(wǎng)，按照各種飼料原料的質(zhì)量由小到大逐級(jí)混勻，隨后密封、干燥，并在避光、低溫條件保存。另制備分別添加100 mg·kg-1稀土元素作為外源指示劑的5組飼料，用于表觀消化率的測(cè)定。每次投喂前根據(jù)飼料配方添加魚(yú)油，重復(fù)2次過(guò)100目篩，加入少量水（飼料∶水 ＝1∶0.7），將飼料制作成面團(tuán)狀后投喂。飼料配方及成分分析見(jiàn)表1。

1.2 飼養(yǎng)管理

本實(shí)驗(yàn)在上海海洋大學(xué)濱?；剡M(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前對(duì)水泥池進(jìn)行消毒處理，使用漂白粉浸泡后用水槍沖洗干凈。實(shí)驗(yàn)所用日本鰻鱺由長(zhǎng)江口捕撈而得，在上海海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)室循環(huán)水系統(tǒng)中用搖蚊幼蟲(chóng)將日本鰻鱺玻璃鰻暫養(yǎng)至黑仔鰻時(shí)期，再轉(zhuǎn)至本次實(shí)驗(yàn)所在的濱?；剡M(jìn)行為期2周的適應(yīng)，期間使用對(duì)照組飼料投喂。之后挑選外觀正常、機(jī)體健康以及規(guī)格大小相近的實(shí)驗(yàn)魚(yú)（0.405±0.003）g放入網(wǎng)箱中。按飼料分成 5組，每組3重復(fù)，在水泥池中架設(shè)共15個(gè)網(wǎng)箱（長(zhǎng) ×寬×高 ＝1 m×1 m×1.5 m），每網(wǎng)箱投放25尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)。分組后繼續(xù)使用對(duì)照組飼料暫養(yǎng)1周，待日本鰻鱺生理狀況趨于穩(wěn)定后，正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。日投喂量為體質(zhì)量的5%～10%，視攝食情況酌情調(diào)整，每日早晚各投喂一次（6∶00、18∶00），每次各占總投喂量的50%。實(shí)驗(yàn)周期為76 d，養(yǎng)殖水體24 h充氣，水溫25～30℃，水溶氧≥6 mg·L-1，氨氮含量≤0.3 mg·L-1。養(yǎng)殖期間不定期吸污換水，始終保持養(yǎng)殖水體清澈干凈，每日記錄攝食情況及死亡率。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束前5周改用投喂含有稀土元素指示劑的飼料，適應(yīng)1周后開(kāi)始收集糞便樣本持續(xù)4周。每次投喂飼料0.5 h后收集殘餌，投喂2 h后采用虹吸法收集新鮮糞便，冷凍干燥至恒重后得到糞便樣本，放置于室溫條件下的干燥器中保存。

表1 飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Com position and nutrient levels of diets （air dry basis，%）

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24 h。隨后逐個(gè)網(wǎng)箱對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)稱(chēng)總重、計(jì)數(shù)。從每個(gè)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱內(nèi)隨機(jī)取13尾魚(yú)，用丁香酚麻醉后，分別量體長(zhǎng)、稱(chēng)質(zhì)量；取3尾魚(yú)獲取肌肉樣品，用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成（水分、蛋白、脂肪和灰分）分析；取7尾魚(yú)采用斷尾的方式獲取全血并置于1.5 mL的無(wú)菌離心管中，隨后在4℃下靜置6 h，3 500 r·min-1離心15 min，取上清液即得血清；取3尾魚(yú)的肝臟，同血清用于抗氧化和生化指標(biāo)的測(cè)定。所有樣品均放置在無(wú)RNA酶、無(wú)菌的離心管中，并暫時(shí)保存于液氮中，隨后轉(zhuǎn)入-20℃的冰箱中保存以待后續(xù)分析測(cè)定。

1.4 樣品測(cè)定與分析

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

成活率（survival rate，SR，%）＝實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)尾數(shù)／實(shí)驗(yàn)初始時(shí)魚(yú)尾數(shù)×100

增重率（weight gain rate，WGR，%）＝（終末平均體質(zhì)量-初始平均體質(zhì)量）／初始平均體質(zhì)量×100

特定生長(zhǎng)率（specific growth rate，SGR，%·d-1）＝（ln終末平均體質(zhì)量-ln初始平均體質(zhì)量）×100／實(shí)驗(yàn)周期

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.100 0 g已恒重的飼料或糞便置于坩堝中，碳化灰化后，加入混合酸（濃硝酸∶高氯酸＝10∶3），加熱消解至澄清透明，冷卻至室溫，用超純水定容到100 mL容量瓶中。經(jīng)過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾后放入進(jìn)樣瓶中。使用ICPMS 7700型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（安捷倫，美國(guó)）對(duì)樣品中稀土元素進(jìn)行定量測(cè)定，根據(jù)以下計(jì)算公式得出各飼料組的表觀消化率：

表觀消化率（apparent digestibility，AD，%）＝（1-飼料中稀土元素的含量／糞便中稀土元素的含量）×100。

1.4.2 肌肉常規(guī)成分

肌肉常規(guī)檢測(cè)：粗灰分（crude ash，CA）在550℃馬弗爐中（GB／T 6438-2007）測(cè)定，粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）采用全自動(dòng)凱氏定氮儀（GB／T 6432-94）測(cè)定，粗脂肪（crude lipid，CL）采用氯仿甲醇法測(cè)定，水分（moisture，M）采用（GB／T 6435-2014）方法在105℃條件下烘干測(cè)定。

1.4.3 血清及肝臟抗氧化及生化指標(biāo)

將血清和冰浴勻漿后的肝臟勻漿液（1∶10，w／v）分別稀釋至適宜濃度后，使用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測(cè)定總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T-AOC）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、堿性磷酸酶（AKP）以及肝臟蛋白含量等抗氧化及生化指標(biāo)。

1.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，所有數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0分析軟件中的單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan氏法多重比較進(jìn)行差異顯著性分析，其中P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，除T14.5組外，其余4組之間存活率無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；豆粕5%含量不變的條件下，在T0、T10、T20 3組中，隨著發(fā)酵豆粕用量的增加，存活率、特定生長(zhǎng)率、增重率、表觀消化率均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)；豆粕被發(fā)酵豆粕替代后，在T10組與T14.5組、T20組與T24.5組的比較中，T10組的特定生長(zhǎng)率、增重率以及存活率均顯著高于 T14.5組（P＜0.05），表觀消化率無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；T20組的特定生長(zhǎng)率、增重率、存活率以及表觀消化率與T24.5組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響

由表3可知，在 T0、T10、T20 3組中，肌肉粗蛋白含量隨著發(fā)酵豆粕用量的增加呈先降后增的趨勢(shì)，且3個(gè)組間差異顯著（P＜0.05）；肌肉粗脂肪的趨勢(shì)則相反。在T10組與T14.5組、T20組與T24.5組的比較中，T10組粗蛋白含量顯著低于 T14.5組（P＜0.05），T20組粗蛋白含量顯著高于 T24.5組（P＜0.05），粗脂肪結(jié)果均與粗蛋白相反。各組水分均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），粗灰分除 T24.5組外各組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻生長(zhǎng)性能的影響Tab.2 Effects of replacement of FM and SBM by FSBM on the grow th performance of Anguilla japonica black fry

表3 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響Tab.3 Effects of rep lacement of FM and SBM by FSBM on muscle nutritional components of Anguilla japonica black fry（%dry basis）

2.3 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻血清抗氧化能力和生化指標(biāo)的影響

如表4所示，總超氧化物歧化酶（T-SOD）除T10組外均與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），在T0、T10、T20 3組間隨著發(fā)酵豆粕用量的增加呈現(xiàn)先降低升高的趨勢(shì)；T10組顯著低于T14.5組（P＜0.05），T20組顯著高于 T24.5組（P＜0.05）。丙二醛（MDA）含量各組均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），在 T0、T10、T20 3組中隨著發(fā)酵豆粕用量的增加呈先降低后升高的趨勢(shì)；T10組顯著小于T14.5組（P＜0.05），T20組顯著高于 T24.5組（P＜0.05）?？偪寡趸芰Γ═-AOC）除 T14.5組外均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），在 T0、T10、T20 3組中隨著發(fā)酵豆粕用量的增加呈逐漸上升的趨勢(shì)；T10組顯著高于 T14.5（P＜0.05），T20組與T24.5差異不顯著（P＞0.05）。

血清生化指標(biāo)見(jiàn)表5，在T0、T10、T20 3組間隨著發(fā)酵豆粕用量的增加，白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、堿性磷酸酶（AKP）、總膽固醇（TC）呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)；在T10與T14.5兩組間，T10組 TP、AKP、AST、GLB、AKP顯著高于T14.5組（P＜0.05），T10組白球比（A／G）顯著低于 T14.5組（P＜0.05），其余各項(xiàng)指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）；在 T20與 T24.5兩組間，T20組TP、TC、TG、ALB、GLB、AKP、A／G顯著高于 T24.5組（P＜0.05），ALT和 AST兩組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻肝臟抗氧化能力和生化指標(biāo)的影響

肝臟抗氧化指標(biāo)見(jiàn)表6。4個(gè)試驗(yàn)組的肝臟T-SOD、T-AOC、CAT活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），MDA含量各組均低于對(duì)照組。在 T0、T10、T20 3組間，隨著發(fā)酵豆粕用量的升高，TSOD、T-AOC和CAT的活性呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，MDA呈現(xiàn)減少的趨勢(shì)。在T10與T14.5兩組之間，T10組 T-SOD、T-AOC、CAT活性顯著低于T14.5組（P＜0.05）；在 T20與 T24.5兩組之間，T20組 T-SOD、T-AOC、CAT活性顯著低于 T24.5組（P＜0.05）；MDA在 T10組顯著低于 T14.5組（P＜0.05），T20組與 T24.5組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻血清抗氧化指標(biāo)的影響Tab.4 Effects of replacement of FM and SBM by FSBM on antioxidant indices in serum of Anguilla japonica black fry （%dry basis）

肝臟生化指標(biāo)見(jiàn)表7。在 T0、T10、T20 3組間，隨著發(fā)酵豆粕用量的增加，ALT、AST呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)，TG呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢(shì)，AKP呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢(shì)。在T10與T14.5兩組間，T10組的ALT和TG均顯著小于T14.5組（P＜0.05），AKP顯著大于 T14.5組（P＜0.05），AST兩組間差異不顯著（P＞0.05）；在 T20與T24.5兩組間，T20組 AST顯著小于 T24.5組（P＜0.05），AKP、ALT顯著大于 T24.5組（P＜0.05），TG兩組間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻血清生化指標(biāo)的影響Tab.5 Effects of rep lacement of FM and SBM by FSBM on serum biochem ical indices of Anguilla japonica black fry

表6 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Tab.6 Effects of replacement of FM and SBM by FSBM on antioxidant indices in liver of Anguilla japonica black fry

表7 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻肝臟生化指標(biāo)的影響Tab.7 Effects of rep lacem ent of FM and SBM by FSBM on biochem ical indices in liver of Anguilla japonica black fry

3 討論

3.1 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺生長(zhǎng)性能的影響

研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中發(fā)酵豆粕含量的增加，斑點(diǎn)叉尾鮰（Ietalurus punetaus）［17］、羅氏沼蝦［18］、點(diǎn)帶石斑魚(yú)（Epinephelus coioides）［19］的生長(zhǎng)性能均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，但最適宜用量存在顯著的種間差異，分別為2.5%、8%和7%。多數(shù)資料顯示水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)發(fā)酵豆粕的耐受性大都在15%以下，當(dāng)超過(guò)此含量時(shí)，水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能會(huì)有一定程度的下降。而在本實(shí)驗(yàn)中，隨著發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉比例的增加，日本鰻鱺的存活率、增重率、特定生長(zhǎng)率以及表觀消化率均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。斑點(diǎn)叉尾鮰［17］的表觀消化率也隨著發(fā)酵豆粕用量的增加而上升，由此推測(cè)發(fā)酵豆粕有促進(jìn)日本鰻鱺黑仔鰻腸道吸收的效果。當(dāng)發(fā)酵豆粕用量到達(dá)20%時(shí)，日本鰻鱺黑仔鰻的各項(xiàng)生長(zhǎng)性能都優(yōu)于其他試驗(yàn)組，可見(jiàn)其對(duì)發(fā)酵豆粕表現(xiàn)出較高的耐受性。肝、腸、胃等消化酶活性的顯著降低與鰻鱺的緩慢生長(zhǎng)關(guān)系密切［20］，在本實(shí)驗(yàn)中高用量的發(fā)酵豆粕中存在的消化酶可能在一定程度上改善了鰻鱺的生長(zhǎng)性能［21］。

有關(guān)水產(chǎn)飼料中豆粕替代魚(yú)粉的研究發(fā)現(xiàn)，隨著豆粕含量的升高，水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能逐漸下降［22-24］。究其原因，是因?yàn)槎蛊芍泻写罅康目範(fàn)I養(yǎng)因子以及限制性氨基酸不足等對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物腸道健康產(chǎn)生了負(fù)面影響［25-29］。但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中添加少量豆粕反而會(huì)促進(jìn)羅氏沼蝦的生長(zhǎng)［16］，本研究中T10組的生長(zhǎng)性能顯著優(yōu)于T14.5組、T20組略微優(yōu)于T 24.5組的結(jié)果與其相似。單寧和凝結(jié)素作為兩種常見(jiàn)的抗?fàn)I養(yǎng)因子，其單獨(dú)存在時(shí)，會(huì)對(duì)胰淀粉酶活性產(chǎn)生抑制作用，但二者同時(shí)存在時(shí)，抑制作用消失［30］。IWASHITA等［31］的研究中也發(fā)現(xiàn)，飼料中只添加大豆皂苷會(huì)對(duì)虹鱒（Oncorhynchus mykiss）腸道產(chǎn)生有害影響，但同時(shí)添加大豆皂苷和大豆凝集素時(shí)，有害作用便減弱，這說(shuō)明大豆皂苷和大豆凝集素的聯(lián)合效應(yīng)會(huì)對(duì)虹鱒的腸道形態(tài)產(chǎn)生有益影響。由此推測(cè)，飼料中一定量的豆粕與發(fā)酵豆粕混合使用時(shí)所產(chǎn)生的抗?fàn)I養(yǎng)因子聯(lián)合效應(yīng)可能對(duì)鰻鱺產(chǎn)生了積極的效應(yīng)，但產(chǎn)生聯(lián)合效應(yīng)的適宜混合比例及其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

3.2 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響

程成榮和劉永堅(jiān)［13］研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕部分代替魚(yú)粉對(duì)雜交羅非魚(yú)中粗灰分和粗脂肪的含量無(wú)顯著影響；冷向軍等［32］發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕用量不影響凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）肌肉中的水分和粗蛋白質(zhì)含量。然而馮建等［33］對(duì)大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea）的研究發(fā)現(xiàn)，隨著發(fā)酵豆粕用量的上升，粗灰分含量呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。李程瓊等［34］發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕用量為16%和21%時(shí)，對(duì)日本鰻鱺肌肉中的粗蛋白含量和粗灰分含量的影響不同。上述結(jié)果說(shuō)明發(fā)酵豆粕對(duì)肌肉成分的影響因水產(chǎn)動(dòng)物種類(lèi)而異。本研究中隨著飼料中發(fā)酵豆粕含量的升高，日本鰻鱺黑仔鰻肌肉粗蛋白、粗灰分與粗脂肪含量也呈現(xiàn)不同的變化。但目前對(duì)于發(fā)酵豆粕和魚(yú)粉用量影響肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的機(jī)制尚不清楚。有研究表明，日本鰻鱺口感主要來(lái)自其高脂肪［35］。在本研究中，發(fā)酵豆粕的用量為10%時(shí)，日本鰻鱺肌肉中的粗脂肪含量顯著升高，說(shuō)明T10組飼料有改善日本鰻鱺黑仔鰻口感的潛質(zhì)，但其中的機(jī)理仍待進(jìn)一步的研究。

對(duì)奧尼羅非魚(yú)（O.niloticus×O.aureus）［22］、牙 鲆 （Paralichthys olivaceus）［23］和 軍 曹 魚(yú)（Rachycentron canadum）［36］等研究發(fā)現(xiàn)，隨著豆粕使用量的增加，肌肉粗蛋白含量逐漸下降，本實(shí)驗(yàn)中魚(yú)粉用量由60%下降到53%時(shí)T10組與T14.5兩組間的對(duì)比結(jié)果與其一致；但當(dāng)魚(yú)粉下降到46%時(shí)，豆粕的使用（T20組與T24.5組）反而使肌肉粗蛋白含量上升，粗脂肪的結(jié)果則相反。上述結(jié)果表明，魚(yú)粉與發(fā)酵豆粕的配比在一定程度上決定著豆粕對(duì)肌肉蛋白質(zhì)含量的影響，但是否因?yàn)樵谌毡决狑~黑仔鰻體內(nèi)產(chǎn)生不同的聯(lián)合效應(yīng)，從而在一定程度上影響其生長(zhǎng)和生理，并最終在體成分上表現(xiàn)出一定的差異，還有待進(jìn)一步研究。

3.3 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺黑仔鰻血清和肝臟抗氧化能力的影響

與其他水產(chǎn)動(dòng)物相似，日本鰻鱺機(jī)體中也存在氧自由基（OFR）的動(dòng)態(tài)平衡［37-39］。總超氧化物歧化酶（T-SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）在清除氧自由基的穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。T-SOD可以將O2-化為H2O2和O2，H2O2進(jìn)而被CAT分解成H2O和丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過(guò)氧化后的負(fù)面產(chǎn)物，對(duì)機(jī)體損害嚴(yán)重［41］；而總抗氧化能力（T-AOC）是衡量魚(yú)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)［42］。在本研究中，比較 T0、T10和 T20 3組發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕用量增加顯著提升了肝臟中TSOD、CAT、T-AOC的水平，降低了MDA的水平，這與劉韜等［43］在凡納濱對(duì)蝦中的研究結(jié)果一致，說(shuō)明發(fā)酵豆粕可在一定程度上增強(qiáng)日本鰻鱺黑仔鰻肝臟的抗氧化能力；本次實(shí)驗(yàn)中，血清T-SOD活性和MDA含量變化也顯示出發(fā)酵豆粕增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的作用。與T10組相比，T14.5組無(wú)論是肝臟還是血清過(guò)氧化程度和T-SOD均高于T10組，可能是過(guò)高的MDA水平激發(fā)了機(jī)體清除氧自由基系統(tǒng)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)所致。由此可見(jiàn)，當(dāng)魚(yú)粉用量由60%下降到53%時(shí)，10%的發(fā)酵豆粕搭配5%的豆粕飼料配比較14.5%的發(fā)酵豆粕配比能更顯著地提升日本鰻鱺黑仔鰻的抗氧化能力。而T24.5組血清MDA含量顯著低于T20組、肝臟T-AOC顯著高于T20組，說(shuō)明當(dāng)魚(yú)粉用量下降到46%時(shí)，不含5%的豆粕可能更有利提升日本鰻鱺黑仔鰻的抗氧化能力。

3.4 發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉和豆粕對(duì)日本鰻鱺血清和肝臟生化指標(biāo)的影響

堿性磷酸酶（AKP）可分解磷酸酯使磷酸鹽等物質(zhì)沉積于魚(yú)骨之中，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物骨骼生長(zhǎng)［44-45］。魚(yú)類(lèi)與高等脊椎動(dòng)物相似，體內(nèi)均存在磷的穩(wěn)態(tài)機(jī)制［46］。當(dāng)水產(chǎn)動(dòng)物血磷含量不足時(shí)，AKP便會(huì)大量合成并釋放進(jìn)入血液。在T0、T10、T20 3組中，隨著發(fā)酵豆粕替代量的升高AKP呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，推測(cè)可能是發(fā)酵豆粕降低了日本鰻鱺黑仔鰻的血磷濃度或?qū)α椎睦寐?，由此激發(fā)負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制以維持體內(nèi)磷穩(wěn)態(tài)；在T10組與 T14.5組、T20組與 T24.5組的比較中發(fā)現(xiàn)，含有5%豆粕組的肝臟和血清中AKP均顯著高于不含5%豆粕組。結(jié)合生長(zhǎng)指標(biāo)認(rèn)為，T10組相比生長(zhǎng)緩慢的T14.5組更需要高水平的AKP持續(xù)分解產(chǎn)生無(wú)機(jī)礦物質(zhì)來(lái)供應(yīng)其骨骼生長(zhǎng)；而T20組和T24.5組，生長(zhǎng)雖無(wú)顯著差異，但前者的AKP活性遠(yuǎn)高于后者，或預(yù)示T20組有良好的生長(zhǎng)潛力。

甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）是血清脂類(lèi)的重要組成，均能反映機(jī)體脂類(lèi)代謝的程度。血清中TG主要來(lái)源于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收與糖元和脂肪酸的轉(zhuǎn)化。當(dāng)血清TG在一定范圍內(nèi)增高時(shí)，說(shuō)明機(jī)體脂類(lèi)代謝增強(qiáng)。膽固醇構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分，當(dāng)水產(chǎn)動(dòng)物膽固醇缺失時(shí)，細(xì)胞容易破裂。卵磷脂膽固醇脂?；D(zhuǎn)移酶（lecithincholesterolacyltransferase，LCAT）是在肝臟催化生成血清膽固醇的重要酶類(lèi)，可催化生成血清中70%～80%的膽固醇，當(dāng)血清中膽固醇含量降低時(shí)，表示LCAT在肝臟中代謝受阻，且往往伴隨著血清轉(zhuǎn)氨酶的升高，故血清膽固醇可作為水產(chǎn)動(dòng)物肝功能代謝的重要指標(biāo)。在人類(lèi)等高等動(dòng)物中，脂類(lèi)代謝能力較強(qiáng)，TG和TC變化趨勢(shì)往往一致［47-48］；對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物而言，由于脂類(lèi)代謝能力較弱，機(jī)體的TC含量比TG更易受飼料脂肪水平影響，兩者的變化趨勢(shì)往往不一致［49］。但在本實(shí)驗(yàn)中，血清中的TG和TC含量隨發(fā)酵豆粕用量增加均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，由此推測(cè)日本鰻鱺黑仔鰻具有較強(qiáng)的脂類(lèi)代謝能力，當(dāng)魚(yú)粉用量由60%下降到46%時(shí)，5%的豆粕有助于機(jī)體維持較高的脂肪代謝水平，其中的機(jī)理有待進(jìn)一步挖掘。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）是水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體中參與氨基酸代謝的重要酶類(lèi)，在健康情況下血清中含量較低，主要存在于肝臟中。當(dāng)肝功能出現(xiàn)損傷時(shí)，ALT和AST可由肝臟釋放進(jìn)入血液，使得血清中兩者的酶活性出現(xiàn)顯著升高，因此可作為反映肝功能的重要指標(biāo)［50］。血液中的總蛋白（TP）由肝臟合成，包括白蛋白（ALB）和球蛋白（GLB），TP含量升高可以作為水產(chǎn)動(dòng)物肝臟合成蛋白質(zhì)能力增強(qiáng)的表現(xiàn)。ALB參與維持水產(chǎn)動(dòng)物血液中的滲透壓并能以膠體的形式對(duì)球蛋白起到保護(hù)的作用，其含量與有功能的肝臟細(xì)胞數(shù)量成正比［51］。GLB由漿細(xì)胞分泌，其含量增加有利于提高機(jī)體的抗病力；ALB與GLB的比值，即白球比（A／G）也能夠反映機(jī)體的抵抗力，該值的降低說(shuō)明體內(nèi)有更多的球蛋白合成用于提高機(jī)體免疫機(jī)能［52］。T0、T10和 T20 3組間血清中的ALT呈下降的趨勢(shì)，說(shuō)明發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉有助于減少日本鰻鱺肝臟受損傷的風(fēng)險(xiǎn)；同樣，AST分析結(jié)果認(rèn)為，無(wú)論在10%還是20%發(fā)酵豆粕用量下，搭配5%豆粕比不含有豆粕更能體現(xiàn)保護(hù)肝臟的作用［16］。本實(shí)驗(yàn)中TP、ALB和GLB含量在T0、T10和T20之間的比較，說(shuō)明用發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉可以不同程度地增強(qiáng)肝功能及蛋白質(zhì)合成能力，結(jié)合轉(zhuǎn)氨酶結(jié)果認(rèn)為在此過(guò)程中谷丙轉(zhuǎn)氨酶發(fā)揮了重要作用；同不含豆粕的試驗(yàn)組相比，含有5%豆粕提高了血清中的TP以及GLB含量，說(shuō)明搭配5%豆粕有利于提高日本鰻鱺黑仔鰻的蛋白質(zhì)合成能力及免疫能力，降低肝臟受損傷的風(fēng)險(xiǎn)，這在T24.5組表現(xiàn)的尤為明顯。

4 小結(jié)

在本實(shí)驗(yàn)中，飼料中用發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉可以提高日本鰻鱺黑仔鰻的生長(zhǎng)性能、抗氧化能力以及肝功能，且最佳用量為20%。豆粕影響發(fā)酵豆粕對(duì)魚(yú)粉的替代效果，但效果因發(fā)酵豆粕用量而異：用10%的發(fā)酵豆粕替代豆粕時(shí)，搭配5%的豆粕可以取得較好的生長(zhǎng)、抗氧化和保肝效果；用20%的發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉時(shí)，搭配5%的豆粕能降低肝臟受損的風(fēng)險(xiǎn)，不含5%豆粕則更有利于肝臟的抗氧化能力。