左蘆根，葛思堂，張宗兵，朱玉可，朱 翔，王 迅，姜從橋，李仕青，劉牧林

胃癌在我國較為高發(fā)，是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。由于早期缺乏典型的臨床癥狀，多數(shù)病人在獲得確診時(shí)已失去最佳治療時(shí)機(jī)。即便接受手術(shù)治療，5年生存期仍然不理想[1-3]。近年來，針對(duì)腫瘤分子病理學(xué)的研究在臨床診斷、預(yù)后判斷和發(fā)病機(jī)制上均顯示出較大價(jià)值[4]。Enah屬于Ena/VASP 蛋白家族中的一員，廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞之中，主要參與細(xì)胞塑形、遷移及黏附等生物學(xué)過程[5-6]。近年來Enah被證實(shí)高表達(dá)于結(jié)直腸腫瘤及肝癌等消化系統(tǒng)惡性腫瘤組織中，且其表達(dá)量增高提示預(yù)后不良[7-8]。然而，Enah在胃癌組織中的表達(dá)情況以及是否具有潛在臨床意義尚需進(jìn)一步研究。本文擬分析Enah在胃癌組織中的表達(dá)情況，分析其與相關(guān)臨床、病理參數(shù)之間的聯(lián)系，及其對(duì)術(shù)后生存期的影響?，F(xiàn)作報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)采集 選取2012年2月至2013年10月我院行胃癌根治術(shù)病人。入選標(biāo)準(zhǔn)：明確診斷為原發(fā)性胃癌；成功施行胃癌根治術(shù)并實(shí)現(xiàn)R0切除。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他組織起源的惡性腫瘤；死于除胃癌以外的其他原因。通過電子病歷系統(tǒng)采集病人臨床資料信息；通過電話隨訪采集術(shù)后5年生存情況。依據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)最終入選97例。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)估 原發(fā)性胃癌的臨床及病理診斷依據(jù)胃癌診斷及分期系統(tǒng)(AJCC)[9]?；仡櫜∪耸中g(shù)標(biāo)本蠟塊，采用免疫組織化學(xué)標(biāo)記Enah，并采用Image-Pro Plus6.0軟件計(jì)算目標(biāo)蛋白光密度值(integrated option density，IOD)，以癌旁組織Enah光密度值為基線計(jì)算癌組織和癌旁組織Enah的相對(duì)表達(dá)量[10]。通過電話隨訪獲取病人術(shù)后5年生存情況。分析影響胃癌病人術(shù)后生存的影響因素。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)、Kaplan-Meier(K-M)曲線、生存分析(Log-rankχ2檢驗(yàn))和Cox多元回歸模型。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中Enah的表達(dá)情況 Enah在癌組織中表達(dá)水平較高，定位于癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)；其在癌旁組織中表達(dá)量微弱，細(xì)胞定位為胞質(zhì)(見圖1A)。胃癌組織中Enah相對(duì)表達(dá)量明顯高于癌旁組織(2.63,95%CI:2.493～2.767 vs 1.00,95%CI:0.976～1.06；Mann-WhitneyU=27.500，P<0.01)(見圖1B)。

2.2 胃癌組織中Enah的表達(dá)與臨床病理學(xué)的關(guān)系 以胃癌組織中Enah相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)(2.5)為界，分為Enah低表達(dá)組(n=48)和高表達(dá)組(n=49)。2組年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、T分期及N分期差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Enah高表達(dá)組在病理分級(jí)為G3～G4、CEA≥5 μg/L及CA19-9≥37 kU/L的比例均高于Enah低表達(dá)組(P<0.05)(見表1)。

表1 Enah在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)間的關(guān)系[n;構(gòu)成比(%)]

因素nEnah 低表達(dá)(n=48) 高表達(dá)(n=49) χ2P年齡/歲 <60 ≥60356219(54.3)29(46.8)16(45.7)33(53.2)0.51>0.05性別 男 女663136(54.5)12(38.7)30(45.5)19(61.3)2.126>0.05病理分級(jí) G1～G2 G3～G4484929(60.4)19(38.8)19(39.6)30(61.2)4.54<0.05病理類型 腺癌 其他△821541(50.0)7(46.7)41(50.0)8(53.3)0.06>0.05腫瘤大小/cm <5 ≥5583929(50.0)19(48.7)29(50.0)20(51.3)0.02>0.05

續(xù)表1

因素nEnah 低表達(dá)(n=48) 高表達(dá)(n=49) χ2PT分期 1～2期 3～4期10876(60.0)42(48.3)4(40.0)45(51.7)0.12>0.05N分期 0～1期 2～3期494827(55.1)21(43.8)22(44.9)27(56.3)1.25>0.05CEA水平/(μg/L) <5 ≥5702739(55.7)9(33.3)31(44.3)18(66.7)3.90<0.05CA19-9/(kU/L) <37 ≥37742342(56.8)6(26.1)32(43.2)17(73.9)6.60<0.05

△示其他病理類型包括黏液腺癌和印戒細(xì)胞癌

2.3 Enah高表達(dá)組與低表達(dá)組術(shù)后5年生存率的比較 Enah高表達(dá)組術(shù)后5年生存率10.2%(5/49)，明顯低于Enah低表達(dá)組的 62.5%(30/48)(Log-rankχ2=29.78，P<0.01)(見圖2)。

2.4 胃癌組織中Enah的表達(dá)對(duì)術(shù)后5年生存的影響 單因素分析顯示，病理分級(jí)、N分期、Enah表達(dá)量、CEA及CA19-9可能影響胃癌術(shù)后5年生存率(P<0.01)。將單因素分析所得陽性結(jié)果納入Cox多元回歸模型分析得出：病理分級(jí)為G3～G4、Enah高表達(dá)及CA19-9≥37kU/L是影響胃癌術(shù)后5年生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05～P<0.01)(見表2)。

表2 胃癌組織中Enah的表達(dá)對(duì)術(shù)后5年生存影響的Cox回歸分析

因素單因素分析 Log-rankχ2 P 多因素分析 HR 95%CI P 性別(男vs女)0.139>0.05———年齡(<60vs≥60)2.092>0.05———病理分級(jí)(G1～G2vsG3～G4)29.653<0.012.6321.386～4.996<0.01癌細(xì)胞類型(腺癌vs其他)2.364>0.05———腫瘤大小(<5cmvs≥5cm)1.017>0.05———T分期(T1～T2vsT3～T4)2.15>0.05———N分期(N0～N1vsN2～N3)9.229<0.011.2150.705～2.093>0.05Enah表達(dá)(高表達(dá)vs低表達(dá))29.775<0.013.1801.751～5.777<0.01CEA水平(<5μg/Lvs≥5μg/L)13.421<0.011.5590.894～2.719>0.05CA19-9(<37kU/Lvs≥37kU/L)41.395<0.012.2481.198～4.219<0.05

3 討論

胃癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，最新全球癌癥調(diào)查報(bào)告顯示其居于癌性致死的第二位[11]。雖以手術(shù)為主的綜合治療顯著改善了多種惡性腫瘤的遠(yuǎn)期生存率，但胃癌的遠(yuǎn)期預(yù)后仍然不佳，可能主要源于難以早期診斷和早期即可發(fā)生血行、淋巴管轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)[12-13]。事實(shí)上，人類對(duì)胃癌細(xì)胞本身的生物學(xué)行為和代謝機(jī)制不明確也是限制其診療水平提高的因素之一。腫瘤分子病理學(xué)領(lǐng)域的探索有望為胃癌的臨床診療提供線索和思路。

Enah蛋白可表達(dá)于正常細(xì)胞內(nèi)，主要調(diào)控細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)等生物學(xué)行為；而其在多種實(shí)體瘤中的異常高表達(dá)被證實(shí)與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后相關(guān)，特別是高轉(zhuǎn)移性實(shí)體腫瘤中[5,7-8]。我們受此啟發(fā)，針對(duì)胃癌也存在早期易轉(zhuǎn)移的特征，采用免疫組織化學(xué)標(biāo)記了Enah。結(jié)果顯示，與癌旁組織比較Enah在胃癌組織中呈現(xiàn)顯著高表達(dá)，Enah高表達(dá)的病人具有更高的病理分級(jí)及T分期，同時(shí)此類病人具有更高水平的外周血CEA及CA19-9。病理分級(jí)提示腫瘤的惡性程度、T分期提示腫瘤的浸潤深度，而CEA和CA19-9是臨床上經(jīng)典的腫瘤進(jìn)展和預(yù)后判斷指標(biāo)[14-15]。提示Enah的高表達(dá)可一定程度反映胃癌病人的腫瘤侵襲性和進(jìn)展情況。為明確Enah是否為影響胃癌遠(yuǎn)期預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，我們采用Cox回歸模型分析發(fā)現(xiàn)Enah聯(lián)同CA19-9及病理分級(jí)同屬于影響胃癌遠(yuǎn)期生存率的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，提示Enah對(duì)于胃癌的預(yù)后判斷具有一定參考價(jià)值。

綜上，Enah在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)并與腫瘤進(jìn)展相關(guān)，對(duì)預(yù)后判斷具有一定價(jià)值。但由于樣本量有限，所得結(jié)論仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量或采用多中心研究的方式予以證實(shí)。