向成芳,駱立暉,趙會民*,陸 勇,楊 康,曾 歡,韋婷潔

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院, 南寧 530007； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院, 南寧 530021；3.郴州市第一人民醫(yī)院, 湖南 郴州 423000)

隨著交通事故、自然災(zāi)害、暴力事件等頻繁發(fā)生,創(chuàng)傷占全世界死亡構(gòu)成比的10%和致殘人數(shù)的16%,且受害人群主要是青壯年(18 ～45 歲)[1]。 創(chuàng)傷失血性休克是臨床急診急救中的常見病種,在大多數(shù)嚴(yán)重創(chuàng)傷危及生命的早期幸存者中,應(yīng)用麻醉藥是很常見的。 全身麻醉劑的使用是否以及在多大程度上影響重度創(chuàng)傷的預(yù)后尚不清楚,全麻藥對結(jié)果測量的潛在混淆效應(yīng)通常被忽略[2]。 多年來,動物研究對組織損傷和出血引起休克的生理學(xué)有了基礎(chǔ)的了解[3-4]。 然而以往大部分創(chuàng)傷失血性休克損傷的動物模型均是在麻醉狀態(tài)下制成的,難以判斷創(chuàng)傷后意識狀態(tài)及活動性變化,嚴(yán)重影響了動物對創(chuàng)傷失血性休克的應(yīng)激反應(yīng),所以與臨床實(shí)際有一定的差異。 模擬出與臨床創(chuàng)傷休克接近的動物模型是至關(guān)重要的。 并且近幾年有少量實(shí)驗(yàn)已經(jīng)使用清醒狀態(tài)下動物模型應(yīng)用于動物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究[5-6]。 但并沒有闡述清醒狀態(tài)下創(chuàng)傷失血性休克動物模型的基本特點(diǎn)。 本研究試圖改進(jìn)傳統(tǒng)創(chuàng)傷休克模型,對比全身麻醉與清醒狀態(tài)下STHS 大鼠模型,探索麻醉對STHS 大鼠的影響,通過持續(xù)建模過程中血流動力學(xué)、動脈血?dú)庵笜?biāo)、器官損傷病理情況,以期為重度創(chuàng)傷失血性休克患者提供新的治療視角。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF 清潔型健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40 只(7 ～9 周),體重250 ～350 g,由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供[SCXK(桂)2014-0002]；適應(yīng)性隔離間飼養(yǎng)1 周,周圍環(huán)境溫度恒定(23±1)℃,濕度(50±5)%,光照遵循晝夜節(jié)律,每籠5 只,給予正常標(biāo)準(zhǔn)飼料,飲用水。 大鼠實(shí)驗(yàn)操作與組織取材均與廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[SYXK(桂)2014-0003]。 本實(shí)驗(yàn)通過廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心和實(shí)驗(yàn)動物委員會批準(zhǔn)(201907050),并且嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動物使用的3R 原則給予人道主義關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

0.9%氯化鈉注射液、戊巴比妥鈉粉末(北京化學(xué)試劑公司,北京)；肝素鈉注射液(天津藥業(yè),中國)；鹽酸利多卡因注射液(上海朝暉藥業(yè))‘全自動動 脈 血 氣 分 析 儀 ( ABL90FLEV, 丹 麥RADIOMETER)； 多通道生理記錄儀(BIOPAC MP160,美國)；大鼠固定架(溫州原上草醫(yī)療科技有限公司)；顯微解剖手術(shù)器械(廣州萊賽),醫(yī)療實(shí)驗(yàn)用聚乙烯半透明毛細(xì)軟管(PE50,永發(fā)塑料商行),三通閥(BD Connecta,美國)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組

選取40 只健康雄性SD 大鼠隨機(jī)分成四組(n=10),分別:清醒對照組(conscious control group,CC)、清醒創(chuàng)傷失血性休克組(conscious traumatic hemorrhage shock group, CTHS)、 麻 醉 對 照 組(anaesthesia control group,AC)、麻醉創(chuàng)傷失血性休克組休克組(anaesthesia traumatic hemorrhage shock group,ATHS)。

1.3.2 模型制備

動物模型均在無菌操作間進(jìn)行,動物稱重后,采用3%的戊巴比妥鈉溶液(0.1 mL/100 g)經(jīng)腹腔注射進(jìn)行麻醉,待大鼠疼痛反應(yīng)消失、眼瞼反射消失、肌肉松弛,麻醉平穩(wěn)后,剪毛備皮,充分暴露手術(shù)范圍,酒精消毒腹部,大腿內(nèi)側(cè)皮膚,將動物四肢用醫(yī)用膠帶固定在自制大鼠手術(shù)臺上,手指觸摸左右側(cè)股動脈搏動,沿腹股溝作1～2 cm 切口(左右側(cè)腹股溝),逐層鈍性分離皮下組織,避開皮下血管,分離股動脈和股靜脈,暴露股動脈、靜脈,準(zhǔn)備肝素化PE50 管進(jìn)行插管、結(jié)扎、內(nèi)固定與腹股溝筋膜,外固定于大腿上內(nèi)側(cè)皮膚,防止大鼠掙脫,插管完畢后通過股動脈插管分別注射肝素鈉(500 U/mL)溶液0.1 mL 封管,左側(cè)股動脈用于血流動力學(xué)監(jiān)測,檢測并記錄大鼠平均動脈壓(MAP)、心率(HR)、左心室壓力最大上升/下降速率(± dp/dt max)每5 min 記錄一次生理指標(biāo),記錄至40 min；右側(cè)股動脈用于放血及血樣采集,左股靜脈用于靜脈麻醉通道。 各組每個放血步驟時(shí)間點(diǎn),放血留取后200 μL 用于血?dú)鉁y量；對照CC、AC 組僅進(jìn)行雙側(cè)股動脈置管,CC 組等待大鼠完全清醒,穩(wěn)定10 min鐘后,持續(xù)監(jiān)測血流動力學(xué)40 min；AC 組持續(xù)麻醉,若大鼠出現(xiàn)覺醒傾向(擺尾,胡須抽動,舔舌,四肢抖動等)立即予以經(jīng)左股靜脈注射3%戊巴比妥鈉0.1 mL 追加劑量,保持麻醉效果適中,持續(xù)監(jiān)測血流動力學(xué)40 min；

ATHS、CTHS 組均在腹腔制造開放性創(chuàng)口(沿腹白線作5 cm 直線切口),肌層采用間斷縫合4 針,皮膚層及皮膚下黏膜層予以中點(diǎn)縫合1 針,術(shù)后予以0.1%利多卡因涂抹手術(shù)切口,用濕紗布覆蓋腹部傷口,手術(shù)時(shí)間控制在40 min 內(nèi)完成,用固定架固定大鼠制動；THSA 組等待大鼠清醒(大鼠四肢,尾,頭頸,舌頭活動自如),穩(wěn)定10 min；右側(cè)股動脈連接多功能生理測量儀,持續(xù)監(jiān)測血流動力學(xué)；經(jīng)左側(cè)股動脈放血,定量定時(shí)控制性放血,按體質(zhì)量的7%放其全身血量的50%,THSB 組完成開放性創(chuàng)口與置管后,持續(xù)麻醉狀態(tài)下進(jìn)行放血,若發(fā)現(xiàn)大鼠有覺醒傾向,立即予以追加戊巴比妥鈉劑量0.1 mL,保持適當(dāng)麻醉效果(麻醉過程中大鼠無呼吸困難、抽搐、嘔吐、流涎等不良反應(yīng)),放血量與THSA組一致；

放血過程分為6 個步驟三個階段:CTHS、AHSB組放血過程一致,CC、AC 組均在創(chuàng)傷休克組相應(yīng)的放血時(shí)間點(diǎn)取200 μL 血液進(jìn)行血?dú)鉁y量；放血前記為時(shí)間點(diǎn)T0,分6 個時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行放血:第一個時(shí)間點(diǎn)(T1)監(jiān)測10 min 正常穩(wěn)定血流動力學(xué)后立即不控速(5～10 mL/min)放其全身血量的25%,用采血管連接三通閥開口其他時(shí)間點(diǎn)均用1 mL 無菌注射器連接三通閥開口；第二個時(shí)間點(diǎn)(T2)停置15 min 后,控速(0.5 mL/min)歷時(shí)2 min 放其全身血量的5%；第三個時(shí)間點(diǎn)(T3):停置5 min 后,控速(0.5 mL/min)歷時(shí)2 min 放其全身血量的5%；第四個時(shí)間點(diǎn)(T4):停置5 min 后,控速(0.5 mL/min)歷時(shí)2 min 抽取全身血量的5%；第五個時(shí)間點(diǎn)(T5):停置5 min 后,控速(0.33 mL/min)歷時(shí)3 min 抽取全身血量的5%；第六個時(shí)間點(diǎn)(T6):停置5 min 后,控速(0.33 mL/min)歷時(shí)3 min 抽取全身血量的5%；T1 稱為第一階段(不控速自主流血階段),T2、T3、T4 稱為第二階段(控速自主流血階段),T5、T6 稱為第三階段(控速被動流血階段)；放血時(shí)長(46±2.1)min 均大體一致,CTHS組到達(dá)最大放血量時(shí)血壓為(36.87±11.93)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),ATHS 組到達(dá)最大放血量時(shí)血壓為(25.24±2.59)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),制成重度創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型；

以放血結(jié)束后MAP 降至25 mmHg 或出現(xiàn)呼吸衰竭或存活時(shí)間達(dá)4 h 為實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)；分別觀察并比較其T0～T6 時(shí)間點(diǎn)生理狀態(tài)、血流動力學(xué)、血?dú)夥治?以及休克后CTHS、ATHS 組MAP 的動態(tài)變化。到達(dá)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)予以過量3%戊巴比妥鈉(1 mL)靜脈注射致安樂死,迅速取出心臟、肝、腎、肺浸泡于組織固定液中,隨后比較各組病理學(xué)切片等情況。

1.3.3 觀察指標(biāo)

生理指標(biāo):主要觀察大鼠的呼吸、末梢循環(huán)情況、尿量等在實(shí)驗(yàn)過程中的生理變化情況。

血流動力學(xué)指標(biāo):T0 為放血前,分別于T1、T2、T3、T4、T5、T6 相應(yīng)放血時(shí)間點(diǎn)后選取1 min 持續(xù)監(jiān)測時(shí)間段,觀察大鼠平均動脈壓(MAP)、心率(HR)、左心室壓力最大上升/下降速率(±dp/dt max),取各時(shí)間段平均值作為測量值,休克后持續(xù)監(jiān)測創(chuàng)傷休克組MAP 變化情況。

動脈血?dú)夥治鲋笜?biāo):T0 為首放血時(shí)取血樣,分別于、T1、T2、T3、T4、T5、T6 時(shí)間點(diǎn)最后0.3 mL 動脈血樣,在15 min 內(nèi)進(jìn)行血?dú)夥治鰷y量。 測定酸堿度(PH 值)、 氧 分 壓(PaO2)、 二 氧 化 碳 分 壓(PaCO2)、血紅蛋白(ctHb)、乳酸(Lac)、血糖(Glu)、碳酸氫根濃度(cHCO3

-)、堿剩余(BE)。

病理檢查:各組到達(dá)試驗(yàn)終點(diǎn)處死動物進(jìn)行常規(guī)檢查后并迅速提取肝、心臟、肺、腎,浸泡在組織固定液中,送往廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行石蠟切片,HE 染色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。 計(jì)量數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,同一時(shí)間段內(nèi)各組間比較采用單因素方差分析,若存在差異,兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；同組間不同時(shí)間點(diǎn)的比較采用重復(fù)測量方差分析,若存在差異,兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)； P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般生理指標(biāo)的變化

各組大鼠休克前體重、體溫、麻醉起效時(shí)間、麻醉時(shí)長,CTHS、ATHS 組放血量、放血時(shí)長、休克時(shí)體溫差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(如表1 所示)。 CTHS組放血過程中生理學(xué)特征表現(xiàn)明顯,放血至T3、T4、T5 時(shí),大鼠出現(xiàn)明顯躁動,掙扎,不配合的狀態(tài),同時(shí)伴隨著呼吸頻率明顯加快,上肢、耳朵、嘴唇等部位迅速蒼白,同時(shí)按壓無回血,末梢循環(huán)明顯減弱；放血至T6 時(shí),大鼠活動性明顯減弱,精神萎靡,上肢、耳朵、嘴唇明顯蒼白,實(shí)驗(yàn)過程無尿。 ATHS 組全程處于全麻狀態(tài),配合實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,呼吸平緩,無明顯變化,放血至T4～T5 時(shí)可見上肢、耳朵、嘴唇逐漸蒼白,按壓末梢循環(huán)無回血,放血至T6 時(shí),上肢、耳朵、嘴唇明顯蒼白,實(shí)驗(yàn)過程有尿(2 ～3 次)。 各組實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)明顯呼吸衰竭現(xiàn)象,因此實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)均以MAP 降至25 mmHg 或存活時(shí)間達(dá)4 h 為實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。 CC、AC、ATHS組存活時(shí)間均大于4 h,實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)定義為存活時(shí)間為4 h；CTHS 組存活終點(diǎn)定義為MAP＜25 mmHg,存活時(shí)間為(52.4±8.8) min。

2.2 各組血流動力學(xué)變化情況

大鼠休克放血過程中(T1、T2、T3、T4、T5、T6),在對照組中:與CC 組比較,AC 組MAP、HR 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),當(dāng)然在整個實(shí)驗(yàn)中,各指標(biāo)存在一定的波動性；CTHS、ATHS 組HR、±dp/dt max隨時(shí)間的變化均存在顯著差異(P＜0.01),ATHS 組HR、±dp/dt max 均呈降低趨勢,而CTHS 組先降低(T1)再升高或穩(wěn)定(T2、T3、T4、T5、T6)最后下降至死亡,發(fā)展時(shí)間極快(約50 min)；MAP 在T4 時(shí)達(dá)到最低,隨后有上升趨勢(如圖1 所示)。 然而CTHS、ATHS 組休克后30 min 開始MAP 變化情況得到反轉(zhuǎn),CTHS 組呈直線下降趨勢,而ATHS 直至存活四小時(shí),血壓維持在40 ～70 mmHg 的低血壓水平(如圖2 所示)。

2.3 各組動脈血?dú)夥治鲎兓闆r

休克放血過程中(T1、T2、T3、T4、T5、T6)在對照組(AC、CC 組)中未見明顯差異,CTHS、ATHS 組PH、PaCO2、ctHb、cHCO3-、BE 呈逐漸下降趨勢,除PH、ctHb 外,CTHS 組下降幅度顯著大于ATHS 組(P ＜0.01)；Glu、Lac、PaO2呈逐漸上升趨勢,且CTHS 組上升幅度顯著高于ATHS 組(P＜0.01)(如圖3 所示)。

2.4 各組大鼠病值理切片情況

對照組(CC、AC):可見各臟器完整,大小正常,表觀鮮紅,血液充盈；HE 染色鏡下可見肝、心臟、肺、腎結(jié)構(gòu)正常、未見細(xì)胞壞死,少量炎性細(xì)胞浸潤。 ATHS 組:各臟器表觀較血液充盈欠佳,稍發(fā)白,可見心臟代償性增大,肺下葉可見多發(fā)水腫,肝大小無明顯差異,未見淤血,腎較對照組稍增大,表觀發(fā)白,無明顯水腫淤血；HE 染色鏡下各臟器結(jié)構(gòu)尚正常,以可見大量腎小管上皮壞死,肺泡結(jié)構(gòu)少量破壞,和紅細(xì)胞少量滲出,各臟器均可見炎性細(xì)胞浸潤。 CTHS 組:各臟器表觀呈明顯發(fā)白,缺血樣,可見心臟明顯增大,心臟壁薄,肺和腎可見1 ～2處水腫區(qū),肝呈紅白相間像；HE 染色鏡下可見,肺、腎、心臟結(jié)構(gòu)破壞,明顯大量紅細(xì)胞滲出及細(xì)胞水腫壞死(紅色箭頭標(biāo)記處),伴隨少量炎性細(xì)胞浸潤(見圖4)。

表1 各組大鼠一般情況(±s,n=10)Table 1 General conditions of the rats in each group

表1 各組大鼠一般情況(±s,n=10)Table 1 General conditions of the rats in each group

注:CC 與AC 組均未進(jìn)行放血處理,放血量、放血時(shí)長、休克時(shí)體溫?zé)o數(shù)據(jù)顯示。Note. The CC and AC groups were not bled, and no data were displayed on the maximum bleed-out, duration of bleed-out, or temperature during shock.

組別Groups體重(g)Weight未放血前體溫(℃)The basis of temperature麻醉起效時(shí)間(min)Onset of anesthesia麻醉蘇醒時(shí)長(min)Recovery from anesthesia放血量(mL)Maximum bleed-out放血時(shí)長(min)Duration of bleed-out休克時(shí)體溫(℃)Temperature during shock CC 組CC group 286.3±8.9 37.6±0.2 3.9±0.7 66.0±2.3 / / /AC 組AC group 287.0±8.6 37.8±0.3 3.9±0.7 66.1±2.3 / / /CTHS 組CTHS group 292.5±13.1 37.8±0.4 4.1±0.7 67.9±1.0 10.7±0.7 45.9±0.2 32.1±0.2 ATHS 組ATHS group 294.8±12.6 37.7±0.7 4.4±0.8 67.3±1.5 10.6±0.8 46.1±0.2 32.78±0.1

圖1 各組血流動力學(xué)變化情況Note. Compared with the CC and AC group, *P＜0.05. Compared with the CTHS group,#P＜0.05.Figure 1 Evaluation of hemodynamics in each group

3 討論

創(chuàng)傷仍然是當(dāng)今世界的一大衛(wèi)生難題,并且創(chuàng)傷休克動物模型也是當(dāng)今創(chuàng)傷研究領(lǐng)域的一道難題。 創(chuàng)傷麻醉師在面對嚴(yán)重創(chuàng)傷休克患者時(shí)有多種相互矛盾的問題,在保證充分的復(fù)蘇基礎(chǔ)上,針對需要對氣道管理、高級創(chuàng)傷支持、手術(shù)止血等危重護(hù)理,選擇麻醉劑是確保最佳效果的關(guān)鍵[7]。 然而對于正在進(jìn)行復(fù)蘇和血液動力學(xué)不穩(wěn)定的患者使用麻醉誘導(dǎo)和維持劑的管理仍然尚存爭議[8]。為了開發(fā)新的治療方法,我們需要更好的了解重度創(chuàng)傷失血性休克病理生理學(xué)。 然而,由于急性損傷和可變原因以及傷員管理的變化,人體研究具有挑戰(zhàn)性,隨機(jī)對照實(shí)驗(yàn)很難進(jìn)行。 體外研究未能復(fù)制重度創(chuàng)傷失血性休克的細(xì)胞/組織/器官相互作用的復(fù)雜病理生理學(xué)(如失血低灌注、血流動力學(xué)、代謝改變等等)。 因此,在體內(nèi)建立創(chuàng)傷與休克動物模型是機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)的必要條件。 本研究選用適用于創(chuàng)傷基礎(chǔ)研究模型,易于實(shí)現(xiàn)和控制創(chuàng)傷休克以及可準(zhǔn)確測量血流動力學(xué)、動脈血?dú)獾鹊拇笫笞鳛檠芯繉ο?試圖建立改良大鼠重度創(chuàng)傷失血性休克模型,比較全身麻醉與清醒狀態(tài)下STHS 大鼠,通過對大鼠生理學(xué)特征觀察,持續(xù)監(jiān)測休克過程中血流動力學(xué)及休克后MAP、動脈血?dú)夥治龅淖兓闆r,以及到達(dá)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)大鼠各臟器的病理學(xué)檢測,研究麻醉對創(chuàng)傷失血性休克各臟器的影響,利用各動物模型的優(yōu)點(diǎn),發(fā)揮最大的研究價(jià)值。

圖2 CTHS、ATHS 組休克后30 min 到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)MAP 變化情況Note. Since the survival time of the CTHS group was(52.4 ± 8.8) min, no data was shown for MAP 50 minutes after shock.Figure 2 The changes in the MAP in the CTHS and ATHS groups 30 minutes after shock to the end of the experiment

在體內(nèi)建立創(chuàng)傷與休克動物模型是實(shí)驗(yàn)機(jī)制研究的必要條件。 多年來,國內(nèi)外學(xué)者采用了多因素復(fù)合致傷法,相繼建立了一些新的創(chuàng)傷失血性休克模型, 但由于存在著診斷標(biāo)準(zhǔn)不明確、施加因素(創(chuàng)傷)難以定量、致病因素單一、個體差異、成功率低等缺點(diǎn),并且由于研究目的特殊性、失血休克發(fā)生的不穩(wěn)定性,以及應(yīng)用范圍的限制,動物實(shí)驗(yàn)與臨床實(shí)際不一致性,迄今為止仍沒有建立公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)動物模型標(biāo)準(zhǔn)[9-12]。 創(chuàng)傷是THS 損傷模型的重要組成部分。 軟組織損傷、骨折、內(nèi)臟損傷以及組合損傷都有在動物模型中誘導(dǎo),以模擬臨床實(shí)情。特定類型的損傷會引起不同的生理和炎癥反應(yīng),目前動物模型較常用的剖腹軟組織擠壓損傷用來模擬在器官和組織中誘導(dǎo)缺血和炎癥反應(yīng),加重失血性休克的嚴(yán)重程度[13]。 動物模型的出血休克方案有三種:控制性失血包括固定容量性失血和固定壓力性失血以及非控制性出血[11,14-17]。 固定容量性失血(fixed-volume haemorrhage, FVH)可以評估不同創(chuàng)傷模型和跨物種之間的代償性血流動力學(xué)反應(yīng)；缺點(diǎn)是低血壓和休克的程度沒有固定的定義,體積個體差異大[18]。 在臨床前研究中,FVH 模型被廣泛用于測試復(fù)蘇方案,主要應(yīng)用于大型實(shí)驗(yàn)動物(如豬)[19],同時(shí)也被報(bào)道用于研究復(fù)蘇對大鼠生存和神經(jīng)系統(tǒng)的影響以及Toll 樣受體(TLR)在創(chuàng)傷相關(guān)炎癥過程中的作用[20-21]。 本實(shí)驗(yàn)通過選取同一批同齡大鼠,以腹部開放性創(chuàng)口(沿腹白線減少出血量)間斷縫合與失血性休克為主導(dǎo)因素,嚴(yán)格控制放的量和速度以及放血的時(shí)間點(diǎn),減少個體差異,維持一個相對穩(wěn)定的休克程度,比較麻醉與清醒狀態(tài)下放血大鼠休克進(jìn)程與臨床特征。 雖然未能將創(chuàng)傷與放血同步進(jìn)行,與臨床實(shí)際存在一定差異,但在清醒狀態(tài)下控速放血(先快后慢)可以進(jìn)一步模擬實(shí)際情景。 同時(shí)選擇與臨床實(shí)際特點(diǎn)相似的創(chuàng)傷休克研究模型,實(shí)驗(yàn)方法及檢測方法是非常重要的。 本實(shí)驗(yàn)建立麻醉與清醒大鼠STHS 模型,采用常用動物實(shí)驗(yàn)麻醉藥戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉,并有研究在予以參考麻醉劑量正常大鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)戊巴比妥鈉對心血管系統(tǒng)影響較小[22]。 通過檢測與臨床檢測特點(diǎn)相似的方法學(xué)(生命體征、血流動力學(xué)、動脈血?dú)獾?,確定麻醉與清醒STHS 大鼠模型具有可重復(fù)性、可控性、穩(wěn)定性、易操作性等特點(diǎn)。

清醒與麻醉狀態(tài)下制造STHS 模型過程中是存在巨大差異的,同時(shí)結(jié)果也是截然不同。 主要表現(xiàn)在以下幾個方面:一般生理情況,CTHS 組可以實(shí)時(shí)觀察到整個休克過程中大鼠的生命體征的變化,與人體應(yīng)激表現(xiàn)相似,體溫驟減,幾乎無尿。 而ATHS組整個實(shí)驗(yàn)過程是在麻醉下進(jìn)行,無法觀測到本能應(yīng)激反應(yīng)。 隨著STHS 血容量顯著降低,血壓降低,器官組織灌注銳減,細(xì)胞缺氧,繼發(fā)性器官損傷,心血管反應(yīng)性降低。 本研究發(fā)現(xiàn),在麻醉狀態(tài)下,放血過程中HR 沒有明顯加快、±dp/dt max 也沒有增強(qiáng),MAP 呈持續(xù)下降趨勢；而CTHS 組HR 代償性增快,±dp/dt max 也增強(qiáng),MAP 在放血后期有上升趨勢。 提示在麻醉狀態(tài)下,在放血過程中ATHS 循環(huán)阻力增高,心臟功能受到抑制,MAP 顯著降低,易呈現(xiàn)低血壓狀態(tài)。 與臨床創(chuàng)傷需行手術(shù)患者預(yù)防低血壓情況相似[23]。 而到達(dá)最大放血量以后,CTHS組經(jīng)過短暫的代償期以后,迅速進(jìn)入失代償期致死亡；反之ATHS 組MAP 逐漸上升。 提示ATHS 組代償期明顯較清醒組時(shí)間長,耐受血管低反應(yīng)性強(qiáng)。當(dāng)然這些結(jié)果是否存在大鼠類特異性? 需要進(jìn)行其他類型動物的研究需要進(jìn)一步探索。 動脈血?dú)夥治鍪窃u估氧合和通氣充分性的金標(biāo)準(zhǔn),與休克損傷程度密切相關(guān)。 本研究發(fā)現(xiàn)麻醉狀態(tài)下,將減少放血過程中大鼠應(yīng)激所致耗氧、耗能,并降低機(jī)體氧代謝,明顯可見其Glu、Lac、PaO2升高幅度低于CTHS 組而PH、PaCO2、ctHb、cHCO-3、BE 降低幅度顯著低于CTHS 組。 提示CTHS 組休克病程更快、病情更重,氧動力學(xué)嚴(yán)重失衡,加速死亡。

綜上所述,發(fā)現(xiàn)麻醉在失血過程中降低MAP、HR,抑制心臟收縮做功,予以同樣的創(chuàng)傷和休克后,經(jīng)歷低血壓狀態(tài)后MAP 逐漸回升,可達(dá)到正常水平的25%～40%；在失血過程中顯著減少應(yīng)激耗能耗氧、緩解呼吸和代謝產(chǎn)物堆積,改善預(yù)后MAP,顯著減輕各器官的損害,表現(xiàn)出提高大鼠建立STHS 模型的耐受性,發(fā)揮保護(hù)性作用。 進(jìn)一步提示創(chuàng)傷研究者需要考慮所使用的實(shí)驗(yàn)方法(如麻醉、手術(shù)操作)對模擬的創(chuàng)傷(出血/損傷)動物體內(nèi)平衡的內(nèi)在影響,以期為創(chuàng)傷失血性休克相關(guān)動物模型的制作和選擇提供借鑒。