朱妞，孫永軍

（1.西安醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710021；2.好當(dāng)家集團(tuán)有限公司，山東威海 264305）

紫葉李（Pranus cerasifera）又叫紅葉李，是著名的觀葉樹種，屬于薔薇科李屬植物，為一種落葉小喬木，高達(dá)8 m 左右，樹葉常年呈現(xiàn)紫紅色，與李子果實(shí)非常相似，因此具有較高的觀賞價(jià)值，在我國(guó)華北及以南地區(qū)廣泛種植。紫葉李耐旱能力強(qiáng)，喜水濕和酸性土壤，適應(yīng)性好，根系不發(fā)達(dá)，有較強(qiáng)的萌生能力[1]。紫葉李作為景觀植物，在我國(guó)城市綠化中占據(jù)一定比例，是一些大學(xué)校園的觀賞樹木[2-4]。紫葉李資源豐富，樹葉為紫紅色，葉大而厚，且含有一定的活性成分多酚物質(zhì)[5-7]。多酚類物質(zhì)是植物資源中廣泛存在的一類活性物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)中含有多羥基活性基團(tuán)，具有很強(qiáng)的生理活性，在抗腫瘤、抑菌、預(yù)防心血管疾病等方面都體現(xiàn)出積極的作用。多酚類物質(zhì)對(duì)人體健康是有利的，膳食中的多酚物質(zhì)可以減緩高脂、高糖食物對(duì)人體的不利影響，對(duì)于延緩衰老、清除人體自由基具有重要意義[7-9]。因此，從自然界植物資源中提取植物內(nèi)次生代謝產(chǎn)物多酚物質(zhì)具有較大的研究?jī)r(jià)值和意義。

目前，與紫葉李相關(guān)的研究主要集中在栽培管理、育種等領(lǐng)域[8-9]，關(guān)注更多的是其觀賞價(jià)值，而針對(duì)紫葉李樹葉的活性成分研究非常少。鑒于此，本試驗(yàn)利用豐富的植物資源紫葉李樹葉，采用有機(jī)溶劑提取法提取其中的活性成分多酚物質(zhì)，以期提高紫葉李植物資源的綜合利用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紫葉李樹葉采摘于西安醫(yī)學(xué)院校園內(nèi)。

無(wú)水碳酸鈉、沒食子酸、無(wú)水乙醇，陜西佰瑞生物化工有限責(zé)任公司；福林酚試劑，上海鼎瑞化工有限公司；試驗(yàn)用試劑均為分析純。試驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2 儀器與設(shè)備

DHG-903385-3 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海徐吉電氣有限公司；LK-100B 型小型高速粉碎機(jī)，濰坊精華粉體有限公司；FA2104 電子天平、水浴鍋，陜西環(huán)宇儀器設(shè)備有限公司；紫外分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 多酚提取工藝流程

將從紫葉李樹上采摘的新鮮樹葉清洗干凈后置于80 ℃烘箱烘干12 h，用粉碎機(jī)粉碎后過40 目篩備用。稱取一定量的紫葉李樹葉粉末，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，醇沉后離心分離得到沉淀物，干燥所得為多酚粗品產(chǎn)品[10]。

1.3.2 多酚含量測(cè)定

采用Folin-酚法測(cè)定多酚含量。配制0.01 mg/mL 的沒食子酸溶液100 mL 于容量瓶中，分別取0、5、10、15、20、25 mL 沒食子酸溶液至100 mL 容量瓶中，加蒸餾水定容。分別取配制好的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4 mL，加入相同體積量的Folin-Ciocalteu 試劑，振搖2～3 min，使其充分混勻，完成反應(yīng)后加入4 mL NaCO3溶液，搖勻，靜置1 h 充分顯色。以蒸餾水為參照，測(cè)定溶液在750 nm 下的吸光度，繪制吸光度隨質(zhì)量濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 單因素試驗(yàn)

采用單因素試驗(yàn)考察提取溫度、提取溶劑乙醇的濃度、提取時(shí)間和料液比對(duì)紫葉李樹葉中多酚含量的影響。提取溫度設(shè)置為30、40、50、60、70、80 ℃，提取溶劑乙醇濃度設(shè)置為30%、40%、50%、60%、70%、80%，提取時(shí)間設(shè)置為30、60、90、120、150、180 min，料液比設(shè)置為1:10、1:15、1:20、1:25、1:35（g/mL，下同），分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

1.5 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)提取時(shí)間、乙醇濃度、溫度和料液比四因素三水平正交試驗(yàn)，以多酚含量為指標(biāo)，進(jìn)一步研究紫葉李樹葉中多酚的最佳提取工藝，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 Folin-酚法測(cè)多酚含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

以蒸餾水為參照，測(cè)定溶液在750 nm 下的吸光度值，繪制吸光度隨質(zhì)量濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝0.000 78x-0.002 1（R2＝0.999 4）。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 提取溫度對(duì)多酚含量的影響

圖1 顯示了提取溫度對(duì)紫葉李樹葉多酚含量的影響。由圖1 可以看出，隨著提取溫度的不斷升高，紫葉李樹葉原料處理后多酚含量一直升高；當(dāng)提取溫度達(dá)到60 ℃時(shí)，多酚含量達(dá)到最大值7.0 mg/g，隨后略有下降[11]。可見，溫度升高可加速溶液的擴(kuò)散，同時(shí)也能增加多酚物質(zhì)的溶解度，從而提高提取率。溫度達(dá)到一定值后，提取率基本穩(wěn)定，溫度過高可能會(huì)加速多酚的水解，降低提取率[12]。因此，提取溫度選擇60 ℃。

2.2.2 提取溶劑濃度對(duì)多酚含量的影響

圖2 顯示了乙醇濃度對(duì)紫葉李樹葉多酚含量的影響。由圖2 可以看出，紫葉李樹葉多酚含量隨提取溶劑乙醇濃度的增加而不斷增加，當(dāng)增加至60%后，多酚含量總體變化不大。分析原因主要是由于乙醇溶劑體系的介入會(huì)破壞紫葉李樹葉中多酚與多糖、蛋白質(zhì)大分子物質(zhì)的結(jié)合作用力[13]，使多酚游離出來(lái)，提高了提取率。溶劑的量達(dá)到一定程度后，極性溶劑與多酚物質(zhì)的差異性更加明顯，反而不利于提取率的提升。因此，乙醇濃度選擇60%。

2.2.3 提取時(shí)間對(duì)多酚含量的影響

圖3 顯示了提取時(shí)間對(duì)紫葉李樹葉多酚含量的影響。由圖可知，提取時(shí)間在30～60 min 時(shí)，紫葉李樹葉中多酚含量的上升幅度較大，隨后多酚含量不斷降低，且降幅增大。主要可能是由于多酚自身的不穩(wěn)定性，長(zhǎng)時(shí)間受熱會(huì)加速其分解和氧化，從而導(dǎo)致提取率下降[14]。因此，提取時(shí)間選擇60 min。

2.2.4 料液比對(duì)多酚含量的影響

圖4 顯示了料液比對(duì)紫葉李樹葉多酚含量的影響。由圖4 可以看出，溶劑的用量增加，紫葉李樹葉中的多酚含量呈上升趨勢(shì)。當(dāng)料液比達(dá)到1:20 時(shí)，溶劑量和紫葉李樹葉基本達(dá)到飽和，多酚含量增加緩慢。且過多的溶劑用量增加了成本和去除難度，延長(zhǎng)了濃縮時(shí)間，造成多酚的氧化損失，降低了多酚含量。因此，料液比選擇1:20。

2.3 紫葉李樹葉中多酚提取的正交試驗(yàn)結(jié)果

在考察提取時(shí)間、提取溶劑濃度、溫度和料液比等單因素影響的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)進(jìn)一步研究紫葉李樹葉中多酚的最佳提取工藝。每組平行測(cè)定3 次，計(jì)算平均值，結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of orthogonal test

通過正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得出，極差分析顯示紫葉李樹葉多酚提取時(shí)，對(duì)多酚含量影響大小順序依次為B＞A＞D＞C，即提取時(shí)間的影響最大，乙醇濃度次之，提取溫度影響最小；最佳工藝條件為A2B3C2D2，即乙醇濃度60%，提取時(shí)間75 min，提取溫度60 ℃，料液比1:20。對(duì)得到的最佳條件進(jìn)行驗(yàn)證平行試驗(yàn)，測(cè)3 次多酚含量，平均值為8.12 mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.65%，與表2 各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)相比，具有明顯的優(yōu)勢(shì)。綜合比較可以得出，該提取工藝提取效果好，多酚含量高，方法的重現(xiàn)性好，操作穩(wěn)定。

3 小結(jié)

試驗(yàn)考察了提取時(shí)間、乙醇濃度、提取溫度和料液比對(duì)紫葉李樹葉中多酚含量的影響，得到多酚提取最佳工藝為提取溫度60 ℃，乙醇濃度60%，提取時(shí)間75 min，料液比1:20，紫葉李樹葉總多酚含量可達(dá)8.12 mg/g，得率較高。

以來(lái)源非常豐富、方便易取的紫葉李樹葉作為研究對(duì)象，提取其中的活性成分多酚物質(zhì)，采用傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取工藝，方法簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好。本試驗(yàn)選擇乙醇作為提取溶劑，方法簡(jiǎn)單，但存在有溶劑殘留問題，所得多酚粗品沒有后續(xù)純化。下一步將展開對(duì)其進(jìn)行純化及功能的研究。