楊 萍，魯 松，劉 萍，張 蘭

(1.首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院 藥學(xué)部，北京 100053；2.遵義醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 遵義 563099)

認(rèn)知障礙(Cognitive impairments,CI)泛指各種原因?qū)е碌母鞣N程度的認(rèn)知功能損害，包括輕度認(rèn)知功能損害(Mild cognitive impairments,MCI)及癡呆[1]，焦慮和抑郁為其常見(jiàn)的精神行為癥狀。流行病學(xué)研究顯示，認(rèn)知障礙患者基數(shù)大、增長(zhǎng)率高，MCI在老年人(年齡≥65歲)中的患病率已然達(dá)到3%～19%不等，且超過(guò)一半的患者在5年內(nèi)會(huì)進(jìn)展為癡呆，預(yù)計(jì)至2025年，世界癡呆人數(shù)將達(dá)1.3150億[2-3]。在我國(guó)，CI形勢(shì)更為嚴(yán)峻，由于我國(guó)社會(huì)結(jié)構(gòu)進(jìn)入加速老齡化階段，這種長(zhǎng)期慢性疾病給患者、家庭及社會(huì)均帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。因此，CI的治療是非常有必要的，早期發(fā)現(xiàn)并有效治療MCI對(duì)延緩或避免認(rèn)知障礙的惡化具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[4]。

逍遙丸，被贊為婦科圣藥，出自宋代《太平惠民和劑局方》，該方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，其中柴胡為君藥，功能疏肝、鎮(zhèn)靜、開(kāi)解郁氣、解除胸悶；當(dāng)歸、白芍為臣藥，當(dāng)歸活血補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛，白芍柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)、斂陰收汗、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)；白術(shù)、茯苓、甘草、薄荷共為佐藥，白術(shù)補(bǔ)脾益胃和中、燥濕利尿消腫，茯苓健脾滲濕止瀉、養(yǎng)心寧心安神，甘草益氣補(bǔ)脾和胃，薄荷疏散郁遏之氣，諸藥共奏疏肝理氣健脾、益氣養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功效，臨床適應(yīng)癥多達(dá)165種，包括精神科、神經(jīng)科、內(nèi)分泌科、婦科等科目的病種[5]。李賽[6-8]等通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，逍遙丸單用或聯(lián)合其他藥物治療抑郁癥或抑郁傾向有明確療效。李萍[9]等也通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，逍遙丸不僅能改善患者焦慮狀態(tài)，還能減少其它合用藥物的不良反應(yīng)發(fā)生率。其作用機(jī)制包括降低腦內(nèi)5-羥色胺、多巴胺含量；升高海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)，保護(hù)海馬區(qū)的神經(jīng)等。

目前，認(rèn)知障礙以藥物治療為主，能夠有效延緩疾病進(jìn)展，但大多僅能作用于單靶點(diǎn)，認(rèn)知損害的機(jī)制復(fù)雜，往往引起的是全身的病理改變，單靶點(diǎn)藥物療效有限，其局限性有目共睹。多靶點(diǎn)治療通過(guò)多個(gè)作用機(jī)制控制疾病發(fā)展，與單靶點(diǎn)藥物相比，多靶點(diǎn)藥物可以增強(qiáng)藥理、減少耐藥性及增加患者依從性等，顯示出良好的應(yīng)用前景[10]。中藥及其復(fù)方具有多成分、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的特點(diǎn)，或可成為CI治療的有效途徑，但深受CI相關(guān)研究現(xiàn)狀和中藥作用復(fù)雜性的限制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從整體出發(fā)，系統(tǒng)地分析藥物與疾病，運(yùn)用“活性成分-靶標(biāo)-作用機(jī)制”的方式將成分多樣的藥物和因素復(fù)雜的疾病形成網(wǎng)絡(luò)以分析[11]，為當(dāng)前研究提供了新思路。本研究從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度出發(fā)，探討中藥復(fù)方成分和疾病機(jī)制、研究藥物與疾病之間的作用通路，以促進(jìn)逍遙丸的作用機(jī)制的研究，為CI的研究路線提供參考，為進(jìn)一步研究逍遙丸治療CI提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 逍遙丸作用靶標(biāo)預(yù)測(cè) 中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicines Systems Pharmacology,TCMSP,http://tcmspw.com/tcmsp.php)是一個(gè)獨(dú)特的中草藥系統(tǒng)藥理學(xué)平臺(tái)，共包含499味草藥(中國(guó)藥典2010版)以及每位草藥的活性化合物成分(共計(jì)29 000余個(gè))，針對(duì)每個(gè)化合物提供了較全面的人體吸收、分布、代謝、排泄(ADME)性質(zhì)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)，并給出涉及口服生物利用度(oral bioavailability,OB)、藥物相似度(drug like,DL)、腸上皮通透性、血腦屏障、水溶性等天然化合物的藥代動(dòng)力學(xué)特性,其中，OB和DL是化合物能否發(fā)展為藥物的重要指標(biāo)。TCMSP能捕捉藥物、靶標(biāo)和疾病之間的關(guān)系，提供潛在活性分子的靶標(biāo)及其疾病信息，形成針對(duì)每位草藥的活性成分-靶標(biāo)-疾病網(wǎng)絡(luò)。將逍遙丸的中藥成分柴胡、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓、甘草、薄荷、生姜分別輸入TCMSP，獲取、整合活性成分，查詢其對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)蛋白，并在Universal Protein(Uniprot,https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢靶標(biāo)蛋白的基因名稱，選擇生物物種為homo sapiens(human)。

1.2 認(rèn)知障礙靶標(biāo)預(yù)測(cè) 利用GeneCards(https://www.genecards.org)和Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM,https://omim.org/)在線數(shù)據(jù)庫(kù)，以“cognitive impairment”為關(guān)鍵詞獲取認(rèn)知障礙蛋白靶基因，選擇生物物種為homo sapiens(human)。

1.3 逍遙丸和認(rèn)知障礙交集靶基因 將以上所得的藥物和疾病基因名稱導(dǎo)入Venn(bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn)在線工具映射篩選出兩者共同的基因名稱，此即為逍遙丸治療認(rèn)知障礙可能的作用靶點(diǎn)。

1.4 蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將交集基因輸入STRING(https://string-db.org)在線數(shù)據(jù)庫(kù)的“Multiple proteins”檢索框，選擇Organism為“Homo sapiens”，最低相互作用得分設(shè)定為0.98、并隱藏?cái)嚅_(kāi)連接的節(jié)點(diǎn)，得到蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)，通過(guò)barplot尋找核心基因，連接數(shù)越多的基因在網(wǎng)絡(luò)中越關(guān)鍵，限于篇幅，此處僅展示連接數(shù)排名前20的基因，借助 Cytoscape 3.6.1軟件獲取可視化結(jié)果，并將節(jié)點(diǎn)設(shè)置為不同的顏色以便于觀察。

1.5 基因本體論(GO)分析 使用Cytoscape 3.6.1軟件的BiNGO插件進(jìn)行交集靶基因GO富集分析。

1.6 KEGG通路富集分析 生物信息注釋數(shù)據(jù)庫(kù)(DAVID,https://david.ncifcrf.gov/)可用于交集靶基因KEGG通路富集分析，通過(guò)富集分析的功能條目，考察中藥的潛在靶標(biāo)可能具有的生物學(xué)功能及參與的生物學(xué)通路，進(jìn)而得到逍遙丸治療認(rèn)知障礙的主要作用通路。

2 結(jié)果

2.1 藥物-疾病靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果 OB值是衡量藥物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程及成藥性的重要參數(shù)，DL值代表其成分和已知藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的相似度，對(duì)分析中藥是否含有對(duì)機(jī)體產(chǎn)生活性成分有重要參考價(jià)值[12]，在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)中一般采用“OB>30%且DL>0.18”為篩選條件，在此條件下篩選的活性成分更具有參考意義[13-14]。將逍遙丸各中藥名字分別輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置OB>30%且DL>0.18，得到逍遙丸各中藥成分的活性化合物個(gè)數(shù)如下：白芍13個(gè)、白術(shù)7個(gè)、薄荷10個(gè)，柴胡20個(gè)，當(dāng)歸2個(gè)，茯苓15個(gè)，甘草91個(gè)，生姜5個(gè)，共163個(gè)，經(jīng)Uniprot轉(zhuǎn)換并最終得出基因名的為115個(gè)，見(jiàn)表1。從GeneCards和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)獲取認(rèn)知障礙的蛋白靶基因，對(duì)于重復(fù)的靶基因則僅保留1個(gè)，共7084個(gè)。疾病和藥物交集基因共100個(gè)，詳見(jiàn)表2，并以Venn圖展示(見(jiàn)圖1)。

表1 逍遙丸活性成分調(diào)控體內(nèi)基因名稱

成分白芍、白術(shù)、薄荷、柴胡、當(dāng)歸、茯苓、甘草、生姜靶基因BCL2 F7 CYP1A1 HTR3A CHRM1 GSTP1 ADRA1A AHR NFE2L2 CHRM4 LDLR OLR1 VEGFA MYC GSK3B MDM2EGFR ERBB2 NCOA1 CHEK2 PGR RUNX2 TYR DIO1 RASA1CHRM3NFKBIA IGFBP3 PTGER3 IRF1 ACACA PON1CHEK1SELE CASP7 ACHE IL6 CASP3 PRKCE COL3A1 MGAM AHSA1 NQO1 ERBB3 FOS CAV1 HIF1A RELA SLC2A4 NOS3AKR1C3 AR RASSF1 CYP3A4 APP PRSS1 RXRB HSPB1 CHRM5 CRP CHRNA2 NR1I3 RUNX1T1 CCND1 ESR1 PORGABRA1 NR3C2 GSTM1 IKBKB MAPK8 RB1 CASP9 AKR1C1ABCC1 SREBF1 ESR2 CYP1B1 PLAU ALOX5 DUOX2 CASP8APOB PPARG RAF1 PCNA CTSD PARP1 IGF2 NPEPPS ICAM1ABAT HSF1 CHRM2 VCAM1 ADH1B PTGS1 PRKCA TP63GRIA2 CCNB1 EIF6 MCL1 ELK1 DCAF5 BIRC5 PSMD3 NUF2 AKR1B1 NCOA2 GSTM2 CTRB1 FASN MTTP HK2

表2 逍遙丸活性成分調(diào)控體內(nèi)基因與疾病靶基因交集基因名稱

交集逍遙丸調(diào)控基因認(rèn)知障礙靶基因PTGS1 PGR NR3C2 NCOA1 PLAU CHRM3 APP ADRA1A RELA ERBB2 RASSF1 CHRM5 RB1 HTR3A ICAM1 AKR1C1 DIO1 CASP9 MGAM CHEK1 CHRM1 CHRM2 GABRA1 ESR1 AR PPARG PRSS1 ACHE IKBKB BCL2 AHSA1 CASP3 MAPK8 CYP3A4 CYP1A1 VCAM1 CYP1B1 ALOX5 GSTP1 AHR SLC2A4 NR1I3 AKR1C3 ESR2 GSK3B EGFR VEGFA CCND1 FOS TP63 NFKBIA CASP8 RAF1 PRKCA HIF1A RUNX1T1 ACACA CAV1 MYC PTGER3 DUOX2 NOS3 HSPB1 NFE2L2 PARP1 COL3A1 CHEK2 HSF1 CRP RUNX2 IGFBP3 IGF2 IRF1 ERBB3 PON1 NPEPPS RASA1 OLR1 CHRM4 CHRNA2 LDLR APOB SREBF1 ABCC1 ABAT PRKCE PCNA MDM2 CASP7 TYR ADH1B F7 RXRB POR SELE GSTM1 IL6 NQO1 CTSD GRIA2

圖1 逍遙丸與認(rèn)知障礙交集基因Venn圖

2.2 構(gòu)建逍遙丸與認(rèn)知障礙藥物-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò) PPI網(wǎng)絡(luò)如圖2，不同顏色的線條表示不同的相互作用類型。通過(guò)barplot統(tǒng)計(jì)各節(jié)點(diǎn)的連接節(jié)點(diǎn)數(shù)，越多則該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的作用越關(guān)鍵，見(jiàn)圖3，由圖可知，APP、EGFR、ESR1、RELA、FOS、NCOA1、CCND1、MAPK8、IL6、PRKCA、CASP8、APOB、AR、CASP3、CYP1A1、RB1、ERBB2、MDM2、MYC、VEGFA、CHRM2、GSK3B、IKBKB、PPARG、BCL2、HIF1A、IGFBP3、NOS3、PGR、ADRA1A是逍遙丸治療認(rèn)知障礙最可能的作用靶點(diǎn)。下載PPI網(wǎng)絡(luò)的tsv格式文件，并導(dǎo)入 Cytoscape 3.6.1 軟件，得到更加簡(jiǎn)潔、清晰的藥物-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)，圖中綠色菱形節(jié)點(diǎn)代表認(rèn)知障礙、熒光藍(lán)三角形節(jié)點(diǎn)代表藥物-疾病交集靶基因、紫色六邊形節(jié)點(diǎn)代表逍遙丸、桔色長(zhǎng)方形節(jié)點(diǎn)代表藥物活性成分(見(jiàn)圖4)。

圖2 逍遙丸和認(rèn)知障礙蛋白相互作用

圖3 逍遙丸和認(rèn)知障礙蛋白相互作用barplot統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.3 藥物-疾病交集靶基因GO分析結(jié)果 為了進(jìn)一步闡明候選靶點(diǎn)的可能作用，使用Cytoscape 3.6.1軟件的BiNGO插件對(duì)逍遙丸治療認(rèn)知障礙的100個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，其中significance level設(shè)置為1.0×10-8以體現(xiàn)富集程度較高的靶點(diǎn)；ontology fill選擇GO-Full，意為在結(jié)果中體現(xiàn)出GO富集分析的生物途徑、分子功能和細(xì)胞定位3個(gè)方面的內(nèi)容；Organism/annotation選擇Homo sapiens。所得圖形顏色深淺表示富集程度，顏色越深富集水平越高；圖形大小代表富集的基因多少，越大則富集在上面的基因越多(見(jiàn)圖5)。結(jié)果中還報(bào)告了交集基因在體內(nèi)過(guò)程中的具體富集情況，P值越小則富集程度越高，在此按照P值從小到大進(jìn)行排列，展示排名前10的逍遙丸治療認(rèn)知障礙可能涉及的體內(nèi)過(guò)程及相應(yīng)參與的交集基因。根據(jù)結(jié)果認(rèn)為逍遙丸治療認(rèn)知障礙可能是基于積極調(diào)控生物過(guò)程，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)傳輸、代謝等過(guò)程(見(jiàn)表3)。

圖5 逍遙丸治療認(rèn)知障礙藥物-疾病交集靶基因GO分析

表3 交集靶基因生物過(guò)程富集情況

GO分析結(jié)果說(shuō)明P基因responsetochemicalstimu-lus1.36×10-31CHRM4HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1AIKBKBCASP8CCND1PLAUMYCCASP3CYP1B1OLR1ABCC1PARP1PRKCAFOSARF7PPARGPCNAPON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1NFE2L2positiveregula-tionofbiologi-calprocess8.08×10-25RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1AHRADRA1AICAM1RASSF1CASP8CCND1MYCCHEK2CASP3TP63SREBF1IGFBP3PRKCEPRKCAFOSARF7IRF1RASA1PGRPPARGCRPPTGER3PON1HIF1ARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBNQO1VCAM1NOS3CAV1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6BCL2CYP1A1MDM2NFE2L2responsetoor-ganicsubstance1.42×10-24PCNACHRM4HSPB1ABATSLC2A4ADRA1AACACARELAEGFRPTGS1CASP8CCND1ERBB3CASP3ERBB2HSF1CYP1B1APOBLDLRDUOX2PARP1NOS3CAV1IGF2PRK-CAFOSESR1SELEESR2NFKBIAARF7IL6COL3A1BCL2CYP1A1PPARGNFE2L2responsetostimulus3.06×10-24CHRM2APPACHEGSK3BCHRM4HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1AICAM1IKBKBRASSF1CASP7CASP8CCND1PLAUMYCCHEK2CASP3CHEK1CYP1B1OLR1CTSDTP63SREBF1ABCC1PARP1AHSA1PRKCAFOSARF7PPARGCRPPCNAPON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1NFE2L2responsetostress1.43×10-22CRPACHEGSK3BPCNAHSPB1ABATAHRHIF1AADRA1ARELAEGFRPTGS1RASSF1MAPK8CASP8CCND1ERBB3PLAUCHEK2CASP3ALOX5CHEK1ERBB2HSF1OLR1CTSDTP63DUOX2SREBF1NQO1VCAM1PARP1NOS3CAV1AHSA1PRKCAFOSSELEESR2VEGFAARF7IL6COL3A1BCL2CYP1A1PPARGNFE2L2biologicalregu-lation5.91×10-22CHRM2RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1CHRM4CHRM5HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1ANR3C2ICAM1IKBKBCASP9RASSF1CASP8CCND1PLAUMYCCHEK2CASP3CHEK1CYP1B1TP63SREBF1PARP1IGFBP3PRKCEDIO1PRKCAFOSRUNX2ARF7PORIRF1RASA1PGRPPARGRAF1CRPGRIA2CHRNA2PCNAGSTP1NR1I3PTGER3PON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1RXRBMAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2RUNX1T1NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1MDM2NFE2L2regulationofcellprolifera-tion1.26×10-19RB1CHRM1HIF1AADRA1ARELAEGFRPTGS1CCND1ERBB3PLAUMYCCASP3CHEK1ERBB2HSF1TP63VCAM1NOS3IGFBP3CAV1IGF2PRKCAESR1ESR2VEGFANFKBIAARIL6BCL2MDM2PGRPPARGRAF1positiveregula-tionofcellularprocess9.45×10-18RB1APPACHECHRM1AHRHIF1AADRA1ARELAEGFRICAM1RASSF1MAPK8CASP8CCND1ERBB3MYCCHEK2CASP3ERBB2APOBTP63SREBF1NQO1VCAM1IGFBP3PRKCECAV1IGF2PRKCAFOSESR1SELEESR2VEGFANFKBIAARF7IL6IRF1BCL2CYP1A1MDM2PGRPPARGNFE2L2regulationofbi-ologicalquality1.07×10-17RB1APPACHEABATSLC2A4CYP3A4HIF1AADRA1AACACAPTGS1IKBKBRASSF1PLAUMYCCASP3ERBB2CYP1B1APOBLDLRTP63DUOX2PARP1NOS3CAV1AKR1C1DIO1PRKCAESR1ESR2VEGFANFKBIAARF7IL6COL3A1RASA1BCL2CYP1A1MDM2PPARGsignaling9.21×10-17CHRM2RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1CHRM4CHRM5ABATADRA1ANR3C2IKBKBRASSF1CCND1PLAUCHEK2CHEK1TP63PRKCEPRKCAHTR3AFOSARPORRASA1PGRPPARGRAF1GRIA2CHRNA2PCNANR1I3PTGER3HIF1ARELAEGFRMAPK8ERBB3ERBB2DUOX2GABRA1NQO1NOS3CAV1IGF2ESR1SELEESR2VEG-FANFKBIAIL6COL3A1NFE2L2

2.4 KEGG通路富集分析 通過(guò)DAVID在線數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)合R語(yǔ)言行KEGG通路富集分析，預(yù)測(cè)逍遙丸治療認(rèn)知障礙可能的生物途徑，探索其作用機(jī)制。結(jié)果以條形圖顯示，且P值由上到下依次減小，詳見(jiàn)圖6。由圖可知，逍遙丸治療認(rèn)知障礙可能的作用通路主要為AGE/RAGE信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗信號(hào)通路、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡信號(hào)通路、甲狀腺激素信號(hào)通路。

圖6 逍遙丸治療認(rèn)知障礙藥物-疾病交集靶基因KEGG分析

圖7 逍遙丸細(xì)胞凋亡信號(hào)通路

圖8 逍遙丸甲狀腺激素信號(hào)通路

3 討論

認(rèn)知障礙發(fā)病原因復(fù)雜，預(yù)后不佳，受到越來(lái)越多的關(guān)注。逍遙丸臨床療效確切[15]，廣泛用于包括認(rèn)知障礙在內(nèi)的多個(gè)系統(tǒng)的疾病，但其機(jī)制研究較少，尚缺乏系統(tǒng)的討論。進(jìn)一步研究逍遙丸作用機(jī)制，將為臨床推廣使用提供更可靠的依據(jù)。中醫(yī)藥治療強(qiáng)調(diào)辨證論治，中藥作為一個(gè)有機(jī)整體，效用非單一成分所能及、各味藥之間的作用非簡(jiǎn)單機(jī)制所能概括，而這也是阻礙其深入研究的關(guān)鍵點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從提出開(kāi)始，就從宏觀出發(fā)，以多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的觀點(diǎn)考慮藥物和疾病之間的關(guān)系。主要通過(guò)尋找藥物和疾病的共同基因，并從生物途徑、分子功能和細(xì)胞定位方面分析藥物作用方式、給出可能的作用通路以預(yù)測(cè)藥物作用機(jī)制，為中藥的研究開(kāi)辟了新天地。

本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)逍遙丸治療認(rèn)知障礙的機(jī)制進(jìn)行預(yù)測(cè)，認(rèn)為積極調(diào)控生物過(guò)程，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)傳輸、代謝等過(guò)程是逍遙丸在體內(nèi)的主要作用方式，涉及的通路為：(1)AGE/RAGE信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗信號(hào)通路。唐勇等[16]經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗所致的持續(xù)高血糖及糖代謝紊亂會(huì)加速晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)形成，AGEs與晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end products,RAGE)結(jié)合后，激活包括NF-κB 在內(nèi)的多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，引起多種細(xì)胞因子及炎癥因子釋放，引發(fā)氧化應(yīng)激，擴(kuò)大免疫/炎癥反應(yīng)，從而參與認(rèn)知障礙形成。而逍遙丸可以增加VEGF的表達(dá)，激活PI3K/Akt信號(hào)通路[17]。(2)腫瘤壞死因子信號(hào)通路。一方面，人類和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究比較一致地表明在健康或非感染條件下腦內(nèi)生理水平的 TNF-α 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與認(rèn)知功能調(diào)節(jié)，其活動(dòng)異常，無(wú)論過(guò)度或者不足都可能導(dǎo)致認(rèn)知功能損害[18]，TNF-α的釋放引起胰島素抵抗或可是致病機(jī)制之一[19]。而逍遙丸含藥血清可以抑制TNF-α的產(chǎn)生[20]。(3)細(xì)胞凋亡通路。抑制細(xì)胞凋亡可改善認(rèn)知障礙[21]，而逍遙丸可以抑制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡[22]，但尚無(wú)具體通路信息，結(jié)合KEGG通路富集分析認(rèn)為，逍遙丸可通過(guò)作用于CASP/PARP、Cathepsin/Bcl2、Raf/IKK/IκBα/NF-κB等細(xì)胞凋亡過(guò)程以治療認(rèn)知障礙，詳見(jiàn)圖7。(4)甲狀腺激素信號(hào)通路。甲狀腺功能減退(甲減)會(huì)導(dǎo)致老年人認(rèn)知功能障礙[23]，使用左甲狀腺素鈉能夠有效降低抑郁癥患者體內(nèi)同型半胱氨酸(Hcy)及炎性細(xì)胞因子(白介素-6(IL-6)及TNF-α)水平,提高患者血清BDNF和葉酸水平,改善患者的漢密爾頓抑郁量表(hamilton depression scale,HAMD)和漢密爾頓焦慮量表(hamilton anxiety scale,HAMA)評(píng)分，充分證實(shí)了甲狀腺素對(duì)于抑郁癥發(fā)生和防治的重要性[24]；張秀琴等[25]經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，逍遙丸能夠穩(wěn)定青年女性無(wú)癥狀性橋本甲狀腺炎患者甲狀腺功能，降低TPO-Ab及Tg-Ab水平，但仍未見(jiàn)具體通路研究，KEGG富集分析認(rèn)為，逍遙丸可能通過(guò)作用Raf1/MEK/ERK/ERα、Akt/PKB/GSK-3β、MDM2、Casp9/CyclinD1、HIF1α、c-Myc等甲狀腺激素信號(hào)通路過(guò)程發(fā)揮治療認(rèn)知障礙作用，詳見(jiàn)圖8。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析和討論，對(duì)逍遙丸靶基因進(jìn)行全面分析，為深入研究逍遙丸作用機(jī)制，精準(zhǔn)中藥治療提供重要的理論依據(jù)。

綜上所述，逍遙丸治療認(rèn)知障礙具有多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)。本研究中所得結(jié)果部分為前人研究所證實(shí)，在此基礎(chǔ)上又提出了些許新的靶點(diǎn)和通路信息，可以作為后續(xù)研究的參考。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)的研究，因?yàn)檫x擇方法、參數(shù)設(shè)置和計(jì)算模型的不完善使得一些作用通路未被選取或一些無(wú)關(guān)通路被選取而得到?jīng)]有指導(dǎo)性的結(jié)論，克服這一過(guò)程將使其更加完善，為藥物的機(jī)制研究甚至新藥研發(fā)、疾病治療更好服務(wù)。