張河慶，韓 帥，吳 婕，席亞?wèn)|，李洪浩

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所/蔬菜種質(zhì)與品種創(chuàng)新四川重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610066)

黃瓜枯萎病是一種主要由尖孢鐮刀菌黃瓜?；?Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)侵染引起的病害，通常會(huì)造成10%～30%的減產(chǎn)損失，重病田塊減產(chǎn)高損失達(dá)80%～90%，甚至絕收[1]。目前黃瓜枯萎病常用的防治措施有選用抗病品種、嫁接、化學(xué)藥劑防治、生物菌劑防治等。選用抗病品種是防治黃瓜枯萎病最經(jīng)濟(jì)有效的措施，但是由于傳統(tǒng)育種周期長(zhǎng)，黃瓜枯萎病抗源材料不足，培育出的抗枯萎病品種有限，生產(chǎn)中使用的品種仍然以感病品種為主[2]。嫁接能夠克服黃瓜枯萎病引起的連作障礙，但嫁接后果實(shí)品質(zhì)會(huì)受到一定影響。噁霉靈、咯菌腈、威百畝等化學(xué)藥劑能在一定程度上防治黃瓜枯萎病[3-4]，但長(zhǎng)期大量使用化學(xué)藥劑會(huì)造成水源和土壤污染，為害人類健康。

生物菌劑防治黃瓜枯萎病是目前研究的重點(diǎn)。生物菌劑防治主要利用微生物的拮抗作用及其代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌的抑制作用，來(lái)降低枯萎病的發(fā)生。研究較多的微生物有木霉菌屬、芽孢桿菌屬、放線菌屬。其中，哈茨木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病抑制效果比較明顯，且已經(jīng)商品化。如美國(guó)的哈茨木霉菌T22、以色列的哈茨木霉菌T39、在國(guó)內(nèi)取得登記證的木霉菌制劑有16個(gè)。Thangavelu等報(bào)道哈茨木霉菌Th210能夠很好地抑制香蕉枯萎病病原菌的生長(zhǎng)[5]。黃新琦報(bào)道使用含哈茨木霉菌的生物有機(jī)肥能夠有效控制黃瓜枯萎病的發(fā)生[6]。研究表明，哈茨木霉菌能夠誘導(dǎo)黃瓜WRKY6、MYB 等抗性基因的表達(dá)，提高防御黃瓜枯萎病酶的活性，增強(qiáng)黃瓜對(duì)枯萎病的抵抗力[7]。

本文為研究木霉菌T2562對(duì)黃瓜枯萎病和豇豆根腐病的防治效果，開(kāi)展了平板對(duì)峙試驗(yàn)和盆栽防治試驗(yàn)，為木霉菌T2562在黃瓜生產(chǎn)中防治枯萎病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃瓜枯萎病病原菌(Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)(購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)微生物保藏中心菌種編號(hào)ACC39326)，豇豆根腐病病原菌(Fusarium solani)(本實(shí)驗(yàn)室分離保存)，木霉菌T2562(由哈茨木霉菌與鉤狀木霉菌原生質(zhì)體融合改良獲得)，供試黃瓜品種為二早子。

1.2 平板對(duì)峙試驗(yàn)

將木霉菌T2562與病原菌對(duì)峙接種在PDA平板上，兩接菌點(diǎn)相距4cm，菌塊直徑0.5cm。同時(shí)，單獨(dú)接種黃瓜枯萎病病原菌做對(duì)照。設(shè)3次重復(fù)，在25℃恒溫下培養(yǎng)，當(dāng)對(duì)照病原菌菌落半徑為2～4cm時(shí)，測(cè)量對(duì)照組病原菌菌落半徑(R1)和對(duì)峙組病原菌菌落中心到木霉菌菌落邊緣的距離(R2)，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)，并計(jì)算木霉菌T2562對(duì)病原菌菌絲的生長(zhǎng)抑制率(I)。I(%)=100*((R1-R2)/R1)。

1.3 盆栽防治試驗(yàn)

制備接種用黃瓜枯萎病病原菌孢子懸浮液，用打孔器取在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d的黃瓜枯萎病原菌，接種于裝有300mL馬鈴薯葡萄糖(PD)液體培養(yǎng)基中，置于25℃，180rpm搖床上培養(yǎng)5d，過(guò)濾收集黃瓜枯萎病菌分生孢子，并稀釋成濃度為1×106個(gè)/mL的病原菌孢子懸浮液。用浸根方法接種黃瓜幼苗，將一片子葉的黃幼苗浸泡與病原菌孢子懸浮液30min，然后移栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，同時(shí)接種木霉菌T2562分生孢子懸浮液，不同處理濃度分別為T(mén)A:1×109個(gè)/mL、TB:1×108個(gè)/mL、TC:1×107個(gè)/mL和TD：1×106個(gè)/mL，接種量為每棵10mL。接種10mL清水的作為對(duì)照(CK)。每個(gè)處理50株，試驗(yàn)重復(fù)3次。處理后的黃瓜幼苗在玻璃溫室中培養(yǎng)，試驗(yàn)期間白天溫度控制在25℃左右，夜晚溫度控制在16℃左右。當(dāng)對(duì)照組充分發(fā)病后，調(diào)查各個(gè)處理的發(fā)病率，計(jì)算防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 平板對(duì)峙試驗(yàn)效果

由平板對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果可知(表1)，72h對(duì)照組黃瓜枯萎病原菌菌落半徑R1為2.23±0.02cm，對(duì)峙組黃瓜枯萎病原菌菌落R2為0.87±0.03cm；此時(shí)木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲的生長(zhǎng)抑制率為61.18%±1.35%，且木霉菌T2562長(zhǎng)滿皿內(nèi)。96h對(duì)照組黃瓜枯萎病原菌菌落半徑R1為2.97±0.03cm，對(duì)峙組黃瓜枯萎病原菌菌落R2仍為0.87±0.03cm，此時(shí)木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲的生長(zhǎng)抑制率為70.77%±1.08%，且木霉菌菌絲完全覆蓋枯萎病菌菌落。5d后(120h)木霉菌T2562完全覆蓋黃瓜枯萎病原菌菌落并產(chǎn)生分生孢子對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率為79.62%±0.79%。黃瓜枯萎病原菌菌落萎縮(R2=0.73±0.03cm)，菌落顏色變暗，菌落背面為橘黃色。木霉菌T2562對(duì)豇豆根腐病原菌菌絲生長(zhǎng)抑制率僅為59.31%±1.27%，且不能完全覆蓋豇豆根腐病原菌菌落。

表1 木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病病原菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果

2.2 木霉菌T2562對(duì)黃瓜枯萎病的盆栽防治效果

接種20d后對(duì)照組黃瓜枯萎病充分發(fā)病，發(fā)病率為82.67%±2.91%。木霉菌T2562濃度為1×108個(gè)/mL(TB)時(shí)對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果最好(64.52%±4.31%)，濃度為1×109個(gè)/mL (TA)時(shí)的次之(62.05%±4.28%)，濃度為1×106個(gè)/mL(TD)時(shí)的最差(57.07%±8.86%)；但各處理間對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果無(wú)顯著差異。木霉菌T2562各處理(TA、TB、TC、TD)的黃瓜枯萎病發(fā)病率顯著低于對(duì)照(CK)的，但各處理間無(wú)顯著差異。

注：圖中TA：T2562分生孢子濃度1×109個(gè)/mL；TB： T2562分生孢子濃度1×108個(gè)/mL；TC: T2562分生孢子濃度1×107個(gè)/mL；TD: T2562分生孢子濃度1×106個(gè)/mL。*表示在P<0.05水平上差異顯著。

3 討論

在平板內(nèi)木霉菌T2562對(duì)黃瓜枯萎病病原菌生長(zhǎng)抑制率達(dá)到了79.62%±0.79%，而在盆栽試驗(yàn)中對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果最高為64.52%±4.31%，防治效果低于平板內(nèi)的抑制效果，且隨著木霉菌分生孢子濃度的增加并不能顯著提高對(duì)黃瓜枯萎的防治效果。這可能是因?yàn)樵谄桨鍍?nèi)木霉菌的生長(zhǎng)速度快，對(duì)病原菌菌絲的抑制能力強(qiáng)；而盆栽試驗(yàn)中，在木霉-黃瓜枯萎病菌-黃瓜相互作用下，木霉菌的生長(zhǎng)速度優(yōu)勢(shì)不一定能完全體現(xiàn)出來(lái)。木霉菌株對(duì)黃瓜枯萎病菌的拮抗作用并不一定與盆栽試驗(yàn)防治效果呈正相關(guān)。有研究表明，一些木霉菌在平板內(nèi)抑菌效果好，但在盆栽試驗(yàn)中防治效果差，如朱萍萍等的研究中，平板拮抗試驗(yàn)有13株木霉菌對(duì)黃瓜枯萎病菌抑制效果達(dá)75%以上，而在盆栽試驗(yàn)中僅有2株木霉菌的防治效果達(dá)到60%以上,其他木霉菌株的防效均在40%以下[8]。而張春秋等人研究結(jié)果表明，平板對(duì)峙試驗(yàn)中棘孢木霉525對(duì)黃瓜枯萎病菌的抑制率達(dá)為80.24%，同時(shí)盆栽試驗(yàn)中對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果到達(dá)了81.53%，與平板對(duì)峙試驗(yàn)中的結(jié)果有較好的一致性[9]。因此，平板對(duì)峙試驗(yàn)抑菌效果好的木霉菌還需盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。木霉菌T2562與豇豆根腐病菌對(duì)峙結(jié)果表明，木霉菌T2562對(duì)豇豆根腐病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率較低，僅為59.31%±1.27%(見(jiàn)表1)，雖然黃瓜枯萎病和豇豆根腐病的病原菌均屬于鐮刀菌屬，但屬于不同種類，木霉菌T262對(duì)其抑制效果也不相同。針對(duì)豇豆根腐病還需要篩選防治效果更好的生防菌劑。

本研究探索了改良木霉菌T2562在防治黃瓜枯萎病和豇豆根腐病上的潛力。木霉菌T2562對(duì)黃瓜枯萎病防治具有較好的田間應(yīng)用前景，盆栽試驗(yàn)中對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果達(dá)到了60%以上。為實(shí)現(xiàn)黃瓜枯萎病的科學(xué)合理防治, 減少化學(xué)農(nóng)藥的使用提供依據(jù)。