張明昱 宋婉瑩 趙鵬偉 李存保（通訊作者）

（1 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010）

（2 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010）

大腸桿菌引起的腸道炎癥，在臨床中最為常見[1-2]。LncRNA（長鏈非編碼RNA，Long non-coding RNA）對細(xì)胞的生長，分化等諸多生理活動有調(diào)控作用[3-4]。本研究就大腸感染感染大鼠腸上皮細(xì)胞后LncRNA 發(fā)生的變化進(jìn)行研究，旨在為進(jìn)一步研究LncRNA在大腸桿菌感染大鼠腸上皮細(xì)胞后的調(diào)節(jié)機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為深入的臨床應(yīng)用提取條件。

1.實驗材料

大鼠腸上皮細(xì)胞IEC-6 購自中科院上海細(xì)胞庫，大腸桿菌ATCC8739 購自貝納生物。

2.實驗方法

2.1 MTT 檢測最佳的細(xì)菌濃度

用0，101，102和103個/ml 的大腸桿菌作用于大鼠腸上皮細(xì)胞IEC-6 中并于第0，24，48 和72h 檢測。在酶標(biāo)儀490nm 波長處測定吸光度（OD）值，依照公式計算細(xì)胞增殖率，細(xì)胞生長率（%）=（OD 藥物/OD 對照）×100%

2.2 大腸桿菌對大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

用最佳濃度的細(xì)菌作用IEC-6 細(xì)胞后提取RNA，送測序公司進(jìn)行分析。并對所得結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)的分析。

3.結(jié)果

3.1 最佳的大腸桿菌作用細(xì)胞的濃度

通過MTT 檢測得到了如下結(jié)果。大腸桿菌能夠抑制MFC 細(xì)胞的增殖，且呈劑量和時間依賴性。作用細(xì)胞時間72 小時，隨細(xì)菌濃度的增加，對細(xì)胞增殖的抑制率也逐漸增加，但當(dāng)細(xì)菌作用時間達(dá)到48 小時時細(xì)胞幾乎全部死亡。在12h 時細(xì)胞的生長已經(jīng)受到抑制，而且103個/ml 和104個/ml 的大腸桿菌對細(xì)胞抑制作用顯著高于10 個/ml 和102個/ml 組，見表。

表 不同作用時間不同濃度大腸桿菌對MFC 細(xì)胞增殖的抑制率

3.2 大腸桿菌對大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

提取大腸桿菌作用后的大鼠腸上皮細(xì)胞的RNA 后送測序公司進(jìn)行分析。得到了6 個有可能參與此過程的RNA，見圖1。

圖1 大腸桿菌對大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

4.討論

腸炎主要是由細(xì)菌，病毒，寄生蟲等相關(guān)病原微升物引起的，臨床主要表現(xiàn)為腹痛，腹瀉，便希并常帶血。該病在夏季最為常見，上吐下瀉是其主要癥狀[5-6]。LncRNA 其長度均大于200，且為非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA 對細(xì)胞周期，細(xì)胞分化等諸多的生命活動均有很好的調(diào)控作用[4]。本研究通過對大腸桿菌作用后的大鼠腸上皮細(xì)胞的RNA 后送測序公司進(jìn)行分析。得到了6 個有可能參與此過程的RNA。為進(jìn)一步的深入研究奠定基礎(chǔ)。