馬于巽，宋 琪，張 靜,，郭俊霞,，夏天則，陳 文,*

1北京聯(lián)合大學(xué) 生物活性物質(zhì)與功能食品北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京，100191；2北京聯(lián)合大學(xué)生物化學(xué)工程學(xué)院食品科學(xué)系，北京，100023

?；撬?2-氨基乙磺酸，taurine)是一種內(nèi)源性含硫氨基酸，可由甲硫氨酸和半胱氨酸合成，也可由飲食提供，在魚貝類等海產(chǎn)品中含量豐富[1]。?；撬峤Y(jié)構(gòu)簡單且不參與蛋白質(zhì)合成,主要以游離形式存在于哺乳動物的肝臟、腎臟、脂肪組織、視網(wǎng)膜等組織器官，發(fā)揮維持視覺、調(diào)節(jié)滲透壓、抗氧化、調(diào)節(jié)脂類代謝等作用[1,2]。動物實(shí)驗(yàn)表明?；撬峥蓽p少實(shí)驗(yàn)動物體脂，降低血液中甘油三酯水平，改善脂肪肝[3,4]。體外實(shí)驗(yàn)顯示，在大鼠H4IIE肝細(xì)胞和原代肝細(xì)胞中，?；撬釡p少了棕櫚酸和油酸導(dǎo)致的甘油三酯過度積累[5]，而Yanagita等[6]通過在HepG2細(xì)胞培養(yǎng)液中添加14C標(biāo)記的油酸，發(fā)現(xiàn)?；撬嵋种屏?0%14C標(biāo)記的油酸合成甘油三酯，提示?；撬峥梢种艸epG2細(xì)胞甘油三酯合成。牛磺酸抑制甘油三酯合成相關(guān)酶的報道較少，并且關(guān)于?；撬峤档图?xì)胞脂質(zhì)的有效濃度報道不一，需要進(jìn)一步深入的研究[5-8]。

固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterol-regulatory element binding proteins，SREBPs)是一種調(diào)節(jié)脂肪酸、甘油三酯和膽固醇合成代謝的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子，有三種亞型：SREBP-1a、SREBP-1c和SREBP-2。SREBP-2存在于大多數(shù)組織細(xì)胞中，主要參與調(diào)節(jié)膽固醇的合成；SREBP-1a 在肝臟及腎上腺較豐富，可調(diào)節(jié)脂肪酸、甘油三酯、膽固醇、磷脂等多種脂質(zhì)的生物合成，高濃度時促進(jìn)膽固醇的合成，低濃度時促進(jìn)脂肪酸的合成[9]。SREBP-1c主要表達(dá)在肝臟和脂肪細(xì)胞中，主要參與肝臟脂肪酸合成和脂肪前體細(xì)胞的分化，是脂肪酸和甘油三酯合成中關(guān)鍵調(diào)控因子，可調(diào)控乙酰輔酶 A合成酶(acetyl-CoA synthetase，AceCS)、乙酰輔酶 A 羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase，F(xiàn)AS)、硬脂酰 CoA 去飽和酶1(stearyl CoA desaturase 1，SCD-1)等脂肪酸合成相關(guān)的酶[10,11]。

本實(shí)驗(yàn)以油酸(oleic acid，OA)建立HepG2細(xì)胞脂肪變性模型，探討牛磺酸對正常與高脂條件下HepG2細(xì)胞的甘油三酯水平、SREBP-1c及FAS等脂肪合成相關(guān)酶蛋白表達(dá)的影響，以期為?；撬犷A(yù)防/改善機(jī)體高脂狀態(tài)的深入研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

HepG2細(xì)胞購自協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心； DMEM細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、ECL顯影試劑盒、CCK-8試劑盒購自美國GenView公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；雙抗(青霉素、鏈霉素)、RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)試劑盒購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司；?；撬?純度>99%)、油酸(純度>99%)購自美國Sigma公司；甘油三酯(TG)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所；SREBP-1c一抗(AF4782，兔抗)購自美國Affinity公司；FAS(3180)、AceCS1(3658)、ACSL1(9189)、ACC(3676)、p-ACC(11810)、GAPDH(2118)等一抗(兔抗)、二抗(7074S，抗兔IgG-HRP)購自美國CST(Cell Signaling Technology)公司。

1.2 儀器與設(shè)備

酶標(biāo)儀購自美國Thermo Fisher公司；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀購自美國Bio-Rad公司；凝膠成像系統(tǒng)購自北京Thmorgan生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理

細(xì)胞培養(yǎng)：用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，以1×105～2×105個/孔接種于6孔板中。

?；撬釋epG2細(xì)胞甘油三酯的影響：在培養(yǎng)液中加入以PBS溶解的終濃度分別為1、5、10、20 mmol/L的?；撬幔囵B(yǎng)24、48、72 h。

高脂模型的建立：以無水乙醇為溶劑，在培養(yǎng)液中加入終濃度分別為0.05、0.1、0.2 mmol/L的油酸，培養(yǎng)6、12、24 h后測定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平。

牛磺酸對高脂HepG2細(xì)胞甘油三酯的影響：設(shè)立對照組(N)，高脂模型組(OA)，在模型基礎(chǔ)上加入1、5、10、20 mmol/L?；撬峒磁；撬峤M(O+T)，共同培養(yǎng)24、48、72 h。

1.3.2 細(xì)胞內(nèi)甘油三酯測定[12]

細(xì)胞培養(yǎng)一定時間后棄上清，用PBS洗2次，每孔加入1mL正己烷-異丙醇(2∶1，V/V)置于搖床上慢搖1 h，以提取細(xì)胞內(nèi)脂類物質(zhì)；4 ℃、10 000 rpm離心10 min，上清通氮?dú)獬ビ袡C(jī)溶劑；以80 μL含10% TritonX-100的異丙醇渦旋震蕩溶解脂提取物后即得到待測樣品。以甘油三酯測定試劑盒檢測樣品甘油三酯濃度。

1.3.3 細(xì)胞內(nèi)蛋白含量的測定

細(xì)胞完成脂類物質(zhì)提取后加入裂解液冰上提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白，4 ℃、12 000 rpm離心10 min，上清液即為待測樣品。以BCA蛋白測定試劑盒測蛋白樣品的濃度。

細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量以甘油三酯與蛋白質(zhì)比值(μmol/g·pro)表示。

1.3.4 細(xì)胞存活率測定

取2×104～4×104個/孔細(xì)胞鋪于96孔板中，設(shè)立：對照組(N)，1、5、10、20 mmol/L牛磺酸組(T)，無水乙醇對照組(E)，油酸組(OA)，在油酸基礎(chǔ)上加入1、5、10、20 mmol/L?；撬?O+T)。培養(yǎng)24、48 h后用CCK-8試劑盒在450 nm測定吸光度。以正常對照為100%，計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.3.5 Western blot

加入PMSF終濃度為1 mmol/L的裂解液提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白，以BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白濃度，加入SDS蛋白電泳上樣緩沖液后沸水浴5 min使蛋白充分變性。每孔上樣30 μg樣品蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜后用5%脫脂奶粉封閉1 h，加入不同目的蛋白的一抗和內(nèi)參GAPDH抗體4 ℃孵育過夜。TBST洗三次后加入二抗，常溫孵育2 h，TBST洗三次后用ECL顯影試劑盒顯影。條帶結(jié)果用凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行目的蛋白及內(nèi)參(GAPDH)灰度值分析，以目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值之比作為所測目的蛋白的相對含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 ?；撬釋epG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響

表1 ?；撬釋epG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響Table 1 Effect of taurine on triglyceride level in HepG2 ± s,n = 10)(μmol/g·pro)

由表1可知，在HepG2細(xì)胞中添加1、5、10、20 mmol/L?；撬岱謩e作用24、48、72 h，甘油三酯水平有隨牛磺酸濃度升高而降低的趨勢，但是牛磺酸各劑量組與正常對照組相比無顯著差異，提示牛磺酸對正常HepG2細(xì)胞甘油三酯水平無顯著影響(P>0.05)。

2.2 油酸對HepG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響

表2 油酸對HepG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響Table 2 Effect of oleic acid on triglyceride level in HepG2 ± s,n = 10) (μmol/g·pro)

注：*與對照組相比，P<0.05。

Note:*Compared with control,P<0.05.

表2顯示：0.025 mmol/L油酸作用24 h，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平升高22.77%(P<0.05)；0.05 mmol/L油酸作用6 h，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平升高29.28%(P<0.05)，作用12和24 h甘油三酯含量均升高50%以上(P<0.05)；0.1、0.2 mmol/L油酸作用12和24 h甘油三酯含量均升高80%以上。故本實(shí)驗(yàn)選擇0.05 mmol/L油酸來建立高脂模型。

2.3 ?；撬釋τ退崽幚淼腍epG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響

表3 ?；撬釋τ退崽幚淼腍epG2細(xì)胞甘油三酯水平的影響Table 3 Effect of taurine on triglyceride level in HepG2 cells treated with oleic ± s,n = 10)(μmol/g·pro)

注：*與對照組相比P<0.05；#與模型組相比P<0.05。

Note:*Compared with control,P<0.05；#Compared with model,P<0.05.

由表3可知，與對照組相比，0.05 mmol/L油酸作用24和48 h細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平升高約50%(P<0.05)。但培養(yǎng)72 h，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平僅升高35.25%(P<0.05)，提示隨培養(yǎng)時間延長，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平并不持續(xù)升高。與高脂模型組相比：1 mmol/L?；撬嵝枳饔?2 h才使甘油三酯水平明顯下降(P<0.05)，5和10 mmol/L牛磺酸作用24、48、72 h以及20 mmol/L?；撬嶙饔?4和48 h細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平均明顯下降(P<0.05)，20 mmol/L?；撬嶙饔?2 h對細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平無明顯影響(P>0.05)可能是由于隨培養(yǎng)時間延長，細(xì)胞衰老，模型組甘油三酯水平下降。

2.4 牛磺酸和油酸對HepG2細(xì)胞存活率的影響

圖1 ?；撬岷陀退釋epG2細(xì)胞存活率的影響Fig.1 The effect of taurine and oleic acid on the viability of HepG2 cells注：A：牛磺酸對細(xì)胞存活率的影響；B：油酸對細(xì)胞存活率的影響；C：油酸與牛磺酸共同作用對細(xì)胞存活率的影響；N：對照組；T1、T5、T10、T20表示?；撬峤K濃度為1、5、10、20 mmol/L；E：無水乙醇對照組；OA 0.05、0.1、0.2表示油酸終濃度為0.05、0.1、0.2 mmol/L；OA：油酸對照組；O+T1、O+T5、O+T10、O+T20表示在油酸基礎(chǔ)上添加終濃度為1、5、10、20mmol/L的?；撬?；*與對照組相比P<0.05；#與乙醇對照組相比P<0.05。Note:A,B,C represent the effect of taurine,oleic acid and co-action of oleic acid and taurine on cell survival,respectively.N:Control;T1,T5,T10,T20:The concentration of taurine is 1,5,10,20 mmol/L;E:Absolute ethyl alcohol control group;OA 0.05,0.1,0.2:The concentration of oleic acid is 0.05,0.1,0.2 mmol/L;OA:Oleic acid control group;O+T1,O+T5,O+T10,O+T20:0.05mmol/L oleic acid with 1,5,10,20 mmol/L taurine;*Compared with control,P<0.05;#Compared with absolute ethyl alcohol control,P<0.05.

由圖1A可知1～20 mmol/L牛磺酸作用24和48 h，各組細(xì)胞存活率無明顯差異。由圖1B可知與正常對照和乙醇對照比0.1 mmol/L油酸作用48 h細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.05)，0.2 mmol/L油酸作用24和48 h細(xì)胞存活率均顯著下降(P<0.05)。由圖1C可知在0.05 mmol/L油酸基礎(chǔ)上添加1～20 mmol/L?；撬嶙饔?4和48 h，各組細(xì)胞存活率無明顯差異(P>0.05)。

綜合以上結(jié)果(表3、圖1)，0.05 mmol/L油酸作用24h，細(xì)胞甘油三酯水平升高約50%，表示模型建立成功。油酸是脂溶性物質(zhì)，易進(jìn)入細(xì)胞，并在較短時間內(nèi)合成甘油三酯。隨培養(yǎng)時間延長，細(xì)胞衰老，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平下降，所以細(xì)胞甘油三酯含量并不隨著油酸作用時間的延長而繼續(xù)升高，而是維持在一定水平并略呈下降趨勢。5 mmol/L牛磺酸作用24 h細(xì)胞甘油三酯水平即顯著下降(P<0.05)，所以本實(shí)驗(yàn)以0.05 mmol/L油酸建立高脂模型，以5 mmol/L?；撬嶙饔?4 h進(jìn)行后續(xù)SREBP-1c及脂肪合成相關(guān)酶蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)，此濃度和時間下?；撬岷陀退釋?xì)胞存活率均無明顯影響(P>0.05)。

圖2 ?；撬釋epG2細(xì)胞SREBP-1c表達(dá)的影響Fig.2 The effect of taurine on the protein expression of SREBP-1c in HepG2 cells注：A：SREBP-1c和GAPDH蛋白條帶圖；B：SREBP-1c相對表達(dá)柱狀圖；N：對照組；T：?；撬峤M；OA：油酸組；O+T：油酸+?；撬峤M；*與正常對照組相比P<0.05；#與模型對照組相比P<0.05。Note:A:SREBP-1c and GAPDH protein bands picture;B:SREBP-1c relative expression histogram;N:Control;T:Taurine;OA:Oleic acid;O+T:Oleic acid+taurine;*Compared with control,P<0.05;#Compared with oleic acid group,P<0.05.

2.5 牛磺酸對HepG2細(xì)胞SREBP-1c表達(dá)的影響

由圖2可知，與對照組相比，5 mmol/L牛磺酸對SREBP-1c表達(dá)無明顯影響(P>0.05)，高脂模型組SREBP-1c表達(dá)升高(P<0.05)提示油酸可增加HepG2細(xì)胞SREBP-1c的表達(dá)；與模型組相比，?；撬崾筍REBP-1c表達(dá)下降(P<0.05)，提示?；撬峥赡芡ㄟ^降低SREBP-1c表達(dá)而調(diào)控甘油三酯合成。

2.6 ?；撬釋epG2細(xì)胞中甘油三酯合成相關(guān)酶表達(dá)的影響

圖3顯示：與對照相比，牛磺酸組ACC表達(dá)下降(P<0.05)，F(xiàn)AS、AceCS1、ACSL1表達(dá)無明顯變化，而高脂模型組FAS、ACC、AceCS1、ACSL1表達(dá)上升(P<0.05)；與模型組相比，油酸+牛磺酸組FAS、ACC、AceCS1、ACSL1表達(dá)下降(P<0.05)。以上結(jié)果表明油酸可增加細(xì)胞FAS、ACC、AceCS1、ACSL1的表達(dá)，增加甘油三酯的合成；而?；撬崮芙档图?xì)胞ACC的表達(dá)，降低高脂HepG2細(xì)胞FAS、ACC、AceCS1、ACSL1的表達(dá)，提示牛磺酸通過抑制脂肪酸及甘油三酯合成相關(guān)酶的表達(dá)而抑制甘油三酯合成。圖3B顯示：與對照相比牛磺酸使P-ACC表達(dá)上升(P<0.05)，與模型組相比油酸+?；撬峤MP-ACC表達(dá)增加(P<0.05)，提示?；撬岢绊慉CC的表達(dá)外，還通過增加ACC磷酸化抑制其活性，從而抑制脂肪酸合成。

圖3 牛磺酸對HepG2細(xì)胞中甘油三酯合成相關(guān)酶表達(dá)的影響Fig.3 Effect of taurine on the protein expression of TG synthesis related enzymes in HepG2 cells注：A、B、C、D分別為FAS、ACC/P-ACC、AceCS1、ACSL1蛋白表達(dá)結(jié)果及目的蛋白相對表達(dá)量柱狀圖；N：對照組；T：牛磺酸組；OA：油酸組；O+T：油酸+?；撬峤M；*與正常對照組相比P<0.05；#與模型對照組相比P<0.05。Note:A,B,C,D represent the protein expression of FAS,ACC /p-ACC,AceCS1,ACSL in Hepg2 cells,respectively.N:Control;T:Taurine;OA:Oleic acid;O+T;Oleic acid + taurine;*Compared with control,P<0.05;#Compared with oleic acid group,P<0.05.

3 討論

研究顯示,在大鼠[13]、小鼠[14]、豚鼠[4]、線蟲[15]等模式生物中,?；撬峋憩F(xiàn)出降低甘油三酯、減少體脂肪/肝臟脂肪蓄積的作用;臨床實(shí)驗(yàn)[16]和流行病學(xué)調(diào)查[17]也顯示口服?；撬峄蝻嬍沉?xí)慣中富含牛磺酸能在一定程度上改善高血脂、肥胖，降低BMI以及動脈粥樣硬化指數(shù)， 降低高血脂癥等代謝疾病和心血管疾病的發(fā)生率。

牛磺酸降甘油三酯作用的體外實(shí)驗(yàn)及機(jī)制研究較少。Gentile等[5]報道，牛磺酸能減少大鼠H4IIE肝細(xì)胞和原代肝細(xì)胞中甘油三酯過度積累，并降低棕櫚酸介導(dǎo)的caspase-3活性、細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激，該研究提示在飲食中添加?；撬釋︻A(yù)防非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)生有良好作用。Yanagita等[6]的研究顯示，在培養(yǎng)基中添加1 mmol/L牛磺酸作用24 h可以使HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平下降近25%，而Hoang等[7]報道0.01 mmol/L牛磺酸使正常HepG2細(xì)胞甘油三酯水平減少近22%。兩個研究團(tuán)隊(duì)的結(jié)果雖相似但在?；撬釢舛壬蠀s相差了百倍之多。與他們的研究不同，本實(shí)驗(yàn)以1、5、10、20 mmol/L?；撬崽幚鞨epG2細(xì)胞24、48、72 h，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平雖有下降趨勢，但并無顯著降低(P>0.05)；以0.05 mmol/L油酸建立高脂模型后，對于油酸處理的HepG2細(xì)胞，?；撬釀t顯示出明顯的降低甘油三酯水平的作用，其中1 mmol/L?；撬嶙饔?2 h、5/10 mmol/L?；撬嶙饔?4、48、72 h、20 mmol/L牛磺酸作用24/48 h都可使細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量顯著下降(P<0.05)。

機(jī)體甘油三酯代謝的主要途徑有合成代謝和分解代謝，但是關(guān)于?；撬岽龠M(jìn)甘油三酯代謝的作用機(jī)制研究，主要集中在促進(jìn)脂肪分解代謝和脂肪酸β氧化，此外還有抑制炎癥反應(yīng)和提高抗氧化能力等方面[5,13]。?；撬嵋种聘视腿ズ铣傻木唧w機(jī)制尚需深入研究。

SREBP-1c主要參與肝臟脂肪酸合成和脂肪前體細(xì)胞的分化，是脂肪酸和甘油三酯合成中關(guān)鍵調(diào)控因子。SREBP-1c的調(diào)控除了受細(xì)胞膽固醇水平影響外還受機(jī)體營養(yǎng)條件和激素水平的影響，它在營養(yǎng)過剩時表達(dá)升高，在饑餓禁食狀態(tài)表達(dá)降低[10,11]。有研究表明，無論是ob/ob小鼠還是高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠，均存在肝臟SREBP-1c 水平異常升高的現(xiàn)象，SREBP-1c 過度表達(dá)會引起糖脂代謝紊亂，導(dǎo)致非脂肪組織脂質(zhì)積聚，引起組織病變，因此SREBP-1c 過度表達(dá)與肥胖相關(guān)疾病如糖尿病、高脂血癥、代謝綜合征的發(fā)生和發(fā)展有著密切關(guān)系[10,11]。Hoang等[7]曾報道，0.01 mmol/L?；撬峥梢种艸epG2細(xì)胞SREBP-1c表達(dá)但不影響其下游靶基因FAS表達(dá)。與Hoang的結(jié)果不同，本研究顯示?；撬釋φepG2細(xì)胞SREBP-1c表達(dá)無影響，但當(dāng)以油酸建立高脂模型時，0.05 mmol/L油酸可增加細(xì)胞SREBP-1c的表達(dá)，5 mmol/L?；撬釀t抑制了油酸誘導(dǎo)的SREBP-1c表達(dá)增加，提示正常狀態(tài)下牛磺酸不影響細(xì)胞SREBP-1c表達(dá)，僅在高脂狀態(tài)下抑制SREBP-1c表達(dá)。

脂肪酸從頭合成的二碳單位是乙酰輔酶A，合成起始于ACC催化乙酰輔酶A轉(zhuǎn)化為丙二酸單酰輔酶A，乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A在FAS催化下經(jīng)縮合、還原、脫水、再還原四步循環(huán)反應(yīng)完成脂肪酸的合成[18]。ACC的活性受可逆磷酸化快速調(diào)控，磷酸化使ACC失活，去磷酸化使ACC被激活。FAS和ACC都是脂肪酸生物合成過程中的關(guān)鍵酶，AceCS可催化醋酸鹽和輔酶A 轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴］o酶A，由 AceCS1 合成的乙酰CoA 用于脂肪酸和脂類生物合成[19]。FAS、ACC、AceCS1的表達(dá)均受到SREBP-1c的調(diào)控[10,11]。本研究顯示：0.05mmol/L油酸誘導(dǎo)了HepG2細(xì)胞FAS、ACC、AceCS1的表達(dá)；5 mmol/L?；撬嶙饔?4 h可減少正常細(xì)胞/高脂細(xì)胞ACC的表達(dá)、增加p-ACC的表達(dá)，并抑制高脂細(xì)胞FAS、AceCS1的表達(dá)。提示?；撬嵬ㄟ^抑制SREBP-1c的表達(dá)抑制脂肪酸合成相關(guān)酶的表達(dá)，并且通過增加ACC磷酸化水平抑制其活性從而減少脂肪酸的合成。

長鏈?；o酶A合成酶(long chain acyl-CoA synthetases，ACSL)催化脂肪酸與輔酶A 的連接，形成脂酰輔酶A。ACSL1主要表達(dá)在肝臟和脂肪細(xì)胞中，由ACSL1催化形成的脂酰輔酶A與L-α-磷酸甘油是甘油三酯合成的前體。ACSL1過度表達(dá)會導(dǎo)致脂代謝紊亂和甘油三酯沉積，Li[20]用腺病毒轉(zhuǎn)染大鼠原代肝細(xì)胞過度表達(dá)ACSL1，檢測到14C標(biāo)記的油酸鹽與甘油二酯的結(jié)合增加，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平增加。本研究顯示，油酸增加了HepG2細(xì)胞ACSL1表達(dá)，?；撬岵挥绊懻＜?xì)胞ACSL1表達(dá)，但可抑制高脂HepG2細(xì)胞的ACSL1表達(dá)。ACSL1是PPARγ的靶基因，這一結(jié)果提示牛磺酸除通過SREBP-1c途徑抑制甘油三酯合成外還可能通過PPARγ抑制甘油三酯合成。

4 結(jié)論

牛磺酸對HepG2細(xì)胞甘油三酯水平無影響，但能顯著降低油酸誘導(dǎo)的高脂細(xì)胞的甘油三酯水平，明顯減少高脂細(xì)胞SREBP-1c、FAS、ACC、AceCS1、ACSL1的表達(dá)，提高p-ACC的表達(dá)。這一結(jié)果提示牛磺酸通過調(diào)控SREBP-1c及其下游靶基因而抑制高脂細(xì)胞脂肪酸/甘油三酯的合成。深入的研究將進(jìn)一步揭示在高脂膳食狀態(tài)下牛磺酸營養(yǎng)的作用。