李延梅,陳 娟,龍 虎,唐俊妮,王月麗

(西南民族大學(xué),四川成都 610041)

金黃色葡萄球菌隸屬于葡萄球菌屬,是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表,在自然界中分布廣泛,在空氣、水、土壤及人和動(dòng)物的排泄物中均存在,因此很容易污染食物[1]。不同類型的食物,如肉制品、乳制品、蛋制品及各種剩飯和即食食品中均可檢測(cè)到。金黃色葡萄球菌引起的食物中毒是世界性的公共衛(wèi)生問題,每個(gè)國(guó)家由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒在細(xì)菌性食物中毒事件中均占較大比例[2]。據(jù)調(diào)查顯示,在美國(guó),金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致食源性疾病發(fā)生率較高的5種病原菌之一,每年由金黃色葡萄球菌引起的食源性疾病病例有24萬(wàn)余例[3]。在歐盟,1993～1998年間發(fā)生的金黃色葡萄球菌的中毒率達(dá)4.5%[4]。在中國(guó),由金黃色葡萄球菌引起的食源性疾病也被時(shí)常報(bào)道,據(jù)估計(jì)比例可達(dá)32.5%[5]。

自20世紀(jì)90年代以來,微生物的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物得到了廣泛的關(guān)注。微生物的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物是細(xì)菌、酵母、霉菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物的重要組成部分,與微生物生命活動(dòng)和生長(zhǎng)數(shù)量密切關(guān)聯(lián),是微生物與周圍各種生物進(jìn)行交流的重要信息[6]。因此,微生物的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物可以作為微生物生長(zhǎng)的指示性標(biāo)志物。金黃色葡萄球菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物包括酸類、酮類、醛類、醇類、酯類、含氮和含硫等多種化合物。O’Hara等[7]對(duì)金黃色葡萄球菌在三種培養(yǎng)基中的代謝特征進(jìn)行了分析,結(jié)果表明,不同培養(yǎng)基質(zhì)不會(huì)改變金黃色葡萄球菌代謝產(chǎn)物的類型,但會(huì)影響代謝產(chǎn)物的濃度。Wojciech等[8]分析了金黃色葡萄球菌胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)物的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物得出,3-甲基-丁醛、3-甲基-丁酸、甲硫醇和3-羥基-2-丁酮等是金黃色葡萄球菌釋放的主要代謝產(chǎn)物。本課題組前期研究結(jié)果包括,通過比較頂空固相微萃取的不同萃取參數(shù)對(duì)金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的萃取差異,確定了最適宜的萃取條件[9];分析獲得了金黃色葡萄球菌在胰蛋白胨大豆肉湯中的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物類型與特征[10]。

頂空固相微萃取/氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(headspace solid phase micro extraction/gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC/MS)是分析微生物揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的主要方法之一,其發(fā)揮了固相微萃取的高效吸附、氣相色譜法對(duì)復(fù)雜混合物的高效分離及質(zhì)譜在鑒定化合物中的高分辨能力,實(shí)現(xiàn)了多組分混合物的一次性定性、定量分析[11-12]。但是,在實(shí)際檢測(cè)中,從GC/MS中得到的離子流圖譜,可能會(huì)由于色譜的分離能力有限,一些極性、結(jié)構(gòu)比較類似的化合物會(huì)部分甚至全部重疊,影響物質(zhì)的檢索[13],從而降低GC/MS方法進(jìn)行復(fù)雜混合物中痕量組分的鑒定。自動(dòng)質(zhì)譜光譜反卷積與識(shí)別系統(tǒng)(automated mass spectral deconvolution and identification system,AMDIS)則是一種能夠自動(dòng)處理GC/MS所得離子流色譜圖中的所有峰,并鑒定是否有目標(biāo)化合物存在的應(yīng)用軟件,該軟件能夠?qū)]發(fā)性物質(zhì)的總離子流圖快速、自動(dòng)地進(jìn)行解卷積處理,可以提取未知組分更“純凈”的質(zhì)譜圖[14],使復(fù)雜離子流色譜圖去卷積處理得到“清晰”的單一成分的色譜圖及相關(guān)成分信息[15]。指紋圖譜是指某種物質(zhì)或者制劑在經(jīng)過一定處理后,釆用以光譜、波譜、色譜、核磁共振、X射線衍射等為代表的現(xiàn)代分析技術(shù),得到的能夠穩(wěn)定、真實(shí)、全面地標(biāo)示物質(zhì)特征信息的色譜圖或光譜圖[16]。通過分析指紋圖譜中峰面積的大小以及保留時(shí)間和各峰間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,得出物質(zhì)信息的種類和比例,可以描述測(cè)試樣品間的相似程度[17-18]。

本研究以金黃色葡萄球菌ATCC6538為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,在7.5%氯化鈉肉湯中培養(yǎng)24 h后,釆用HS-SPME-GC/MS技術(shù)檢測(cè)其揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,并運(yùn)用美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(national institute of standards and technology,NIST)開發(fā)的NIST檢索程序以及AMDIS軟件對(duì)揮發(fā)性代謝產(chǎn)物進(jìn)行準(zhǔn)確定性分析,結(jié)合《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》,擬建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜,以期為金黃色葡萄球菌的質(zhì)量監(jiān)測(cè)及分析提供參考方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(StaphylococcusaureusATCC6538) 由西南民族大學(xué)食品質(zhì)量與安全實(shí)驗(yàn)室保存;胰蛋白胨大豆肉湯(TSB) 杭州微生物試劑有限公司;7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基、Baird-Parker(BP)瓊脂基礎(chǔ)、亞碲酸鹽卵黃增菌液 青島海博生物技術(shù)有限公司。

Trace DSQ型GC-MS聯(lián)用儀(配Triplus自動(dòng)進(jìn)樣器) 美國(guó)Thermo公司;50/30 μm二乙基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧(divinylbenzene/carboxen/polydimethylsiloxane,DVB/CAR/PDMS)萃取頭 美國(guó)Supelco公司;TR-1701色譜柱(30 m×0.25 mm ID×0.25 μm) 美國(guó)Thermo公司;MOF-4086S低溫冰箱、MLS-3020高壓蒸汽滅菌鍋 日本三洋公司;SW-CJ-1F超凈工作臺(tái) 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;HZQ-F160振蕩培養(yǎng)箱 太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)物的制備 在參考《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》(GB 4789.10-2016)及課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,優(yōu)化得到了一套固定的培養(yǎng)條件:取S.aureusATCC6538保藏菌液50 μL接種至裝有5 mL TSB培養(yǎng)液的血清瓶中,37 ℃,150 r/min條件下培養(yǎng)13 h。用接種針勾取一環(huán)活化菌液,劃線于BP平板上,在37 ℃條件下,靜置培養(yǎng)18 h,至平板上長(zhǎng)出灰黑色至黑色,有淺色邊緣且周圍繞以不透明圈的菌落,放置于4 ℃冰箱中保藏備用。從BP平板上挑取S.aureusATCC 6538單菌落接種5 mL TSB培養(yǎng)液中,于37 ℃,150 r/min條件下培養(yǎng)13 h。將S.aureusATCC6538活化菌液進(jìn)行10倍梯度稀釋至適宜稀釋度,吸取菌懸液300 μL接入50 mL 7.5% NaCl肉湯中,于37 ℃下,150 r/min振蕩培養(yǎng),培養(yǎng)至24 h。吸取5 mL細(xì)菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入20 mL頂空瓶?jī)?nèi),加入2 g NaCl,加蓋密封,作為測(cè)試樣品。按此方法制備10組測(cè)試樣品(S1,S2，…,S10),同時(shí),以未接種金黃色葡萄球菌的7.5% NaCl肉湯作為空白對(duì)照。

1.2.2 HS-SPME-GC/MS分析條件 萃取條件:采用50/30 μm(DVB/CAR/PDMS)萃取頭,在60 ℃溫度下,預(yù)孵化30 min,萃取30 min。GC分析條件:TR-1701色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),分流模式,分流比為20∶1,流速1 mL/min,升溫程序?yàn)?0 ℃保持3 min,以7 ℃/min升溫至260 ℃并保持2 min,載氣為99.999%氦氣,進(jìn)樣口溫度230 ℃,解吸時(shí)間2 min。MS分析條件:電子電離源,電子能量70 eV,離子源溫度250 ℃,傳輸線溫度260 ℃,全掃描模式,質(zhì)量掃描范圍50～500 amu。

1.2.3 建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù) 通過NIST檢索程序以及AMDIS對(duì)測(cè)定到的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,依據(jù)金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物在NIST檢索程序以及AMDIS匹配度的數(shù)值,建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2.4 建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜 對(duì)金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物進(jìn)行GC/MS檢測(cè),經(jīng)AMDIS鑒定,將得到的色譜峰信息分析和數(shù)據(jù)處理后,采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》得到各圖譜間的數(shù)據(jù)信息,評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)信息,建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用NIST AMDIS _32軟件報(bào)告揮發(fā)性代謝產(chǎn)物色譜峰的物質(zhì)名稱、保留時(shí)間、峰面積、CAS編號(hào)及正反匹配度(M,RM),經(jīng)NIST檢索程序(NIST 08)報(bào)告匹配度(MF)。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)》得到指紋圖譜信息。

2 結(jié)果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的建立

2.1.1 篩選金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物色譜峰 本研究采用GC/MS測(cè)定金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,同時(shí),測(cè)定7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基揮發(fā)性組分。比較金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的總離子流色譜圖(圖1)和空白培養(yǎng)基揮發(fā)性組分的總離子流色譜圖(圖2),首先排除金黃色葡萄球菌7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)物中響應(yīng)強(qiáng)度(即峰面積)小于7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基的色譜峰,然后選定僅在金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的總離子流色譜圖中檢測(cè)到的色譜峰以及響應(yīng)強(qiáng)度高于空白培養(yǎng)基的色譜峰。

圖1 金黃色葡萄球菌7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)物揮發(fā)性代謝產(chǎn)物總離子流色譜圖Fig.1 Total ion flow chromatography of volatile metabolites from Staphylococcus aureus 7.5% NaCl broth culture

圖2 7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基揮發(fā)性代謝產(chǎn)物總離子流色譜圖Fig.2 Total ion flow chromatography of volatile metabolites from 7.5% NaCl broth blank medium

由表1可以看出,在7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基中沒有檢測(cè)出4、8、9、11、12、14、15和17號(hào)這八個(gè)色譜峰,說明這些色譜峰是金黃色葡萄球菌在7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)代謝所產(chǎn)生的;其他色譜峰在7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基中被檢測(cè)出,同時(shí)也在金黃色葡萄球菌7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)物中檢測(cè)到,由于金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)代謝活動(dòng),這些色譜峰在7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)物中的響應(yīng)強(qiáng)度有明顯的增加。因此,這17個(gè)色譜峰確定為金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)活動(dòng)的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,進(jìn)一步進(jìn)行定性分析。

表1 金黃色葡萄球菌7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)物與7.5% NaCl肉湯空白培養(yǎng)基的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物色譜峰信息Table 1 Chromatography peaks of volatile metabolites of Staphylococcus aureus culturedin 7.5% NaCl broth and 7.5% NaCl broth blank medium

2.1.2 構(gòu)建金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù) 采用NIST檢索程序?qū)Υb定的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的色譜峰進(jìn)行匹配,同時(shí)采用AMDIS軟件對(duì)待鑒定的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的色譜峰信息進(jìn)行自動(dòng)去卷積處理和定性分析。在NIST檢索時(shí),當(dāng)色譜峰和檢索顯示的化合物之間的正向匹配度(match,M)和反向匹配度(reverse match,RM)均大于800時(shí),則將該色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物及其需要的質(zhì)譜信息導(dǎo)出至AMDIS目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)中。然后設(shè)置AMDIS的最小匹配度(minimum match factor,MMF)為80,進(jìn)行自動(dòng)去卷積處理分析。如果80的匹配度下,該化合物依然可以檢測(cè)到,則認(rèn)為該化合物是金黃色葡萄球菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,并將其保留在目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)中;如果未檢測(cè)到,則將該化合物從目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)中移除。通過以上步驟,對(duì)通過NIST檢索程序匹配到的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的色譜峰所屬的化合物進(jìn)行AMDIS逐一鑒定,并將符合上述匹配度要求的化合物加入到金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)中,作為實(shí)驗(yàn)中所測(cè)定的總離子流色譜圖中揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的篩選和鑒定參考標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)最終確立的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)詳細(xì)信息如表2所示。

表2 金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)Table 2 Mass spectrometry database of target compounds of Staphylococcus aureus volatile metabolites

由表2可知,采用NIST檢索程序以及AMDIS軟件對(duì)金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的色譜峰進(jìn)行匹配鑒定后,在NIST檢索程序的正向匹配度和反向匹配度均大于800,AMDIS軟件的匹配度為80的條件下,最終確定的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的化合物共有17個(gè),卡西酮的峰面積最大,為107counts×sec,其余物質(zhì)的峰面積均為106counts×sec。

2.2 金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜的建立

依次將得到的10組色譜圖經(jīng)AMDIS鑒定,10組總離子流色譜圖中與確定的含有17個(gè)金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的物質(zhì)種類及數(shù)量完全符合,同時(shí)保留時(shí)間也基本一致,且符合與NIST檢索程序的正向匹配度和反向匹配度均大于800,AMDIS軟件的匹配度為80的條件。從GC/MS測(cè)定所得的10組總離子流色譜圖中,挑選并匯總17個(gè)揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的數(shù)據(jù)信息,包括積分?jǐn)?shù)據(jù)和色譜圖數(shù)據(jù)信息。將這10組金黃色葡萄球菌的17個(gè)揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的數(shù)據(jù)信息按照一定要求整理后,導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)》,得到10組圖譜,同時(shí)經(jīng)過設(shè)參照?qǐng)D譜(選擇S1為參照?qǐng)D譜)、自動(dòng)匹配、生成對(duì)照、相似度評(píng)價(jià)幾個(gè)步驟,采用平均數(shù)法得到對(duì)照指紋圖譜及各組圖譜的相關(guān)信息。圖3為中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件生成的10組圖譜,由虛線串連的17個(gè)峰為測(cè)試樣品的共有峰,即已確定的17個(gè)揮發(fā)性代謝產(chǎn)物色譜峰。

圖3 10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物圖譜Fig.3 Chromatograms of 10 sets of Staphylococcus aureus volatile metabolites注:1:2-甲基-丁醛;2:3-甲基-丁醛;3. 2,3-二甲基-戊醛;4:二甲基二硫化物;5:卡西酮;6:2-乙基-1-己醇;7:苯乙酮;8:2-甲基庚醛;9:3-癸醇;10:3-甲基-丁酸;11:環(huán)丙基甲基甲醇;12:1-癸-3-炔;13:2-硝基庚烷-2-烯-1-醇;14:3-辛烯-2-醇;15:2-甲基-十一烷醇;16:亞硫酸-異丁基戊酯;17:2-十二烷酮。

表3是由《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)》處理得到的10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物圖譜信息,包括保留時(shí)間、共有峰和生成對(duì)照指紋圖譜的峰面積信息、保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)及峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。表3中列出了10組金黃色葡萄球菌17個(gè)共有指紋峰的峰面積,并計(jì)算出10組測(cè)試樣品間各個(gè)共有指紋峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。17個(gè)色譜峰中,峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在30%以下。同時(shí),17個(gè)共有指紋峰的保留時(shí)間一致性非常強(qiáng),保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0～0.06%范圍內(nèi)。

表3 10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物圖譜信息 Table 3 Chromatograms data information of 10 groups of Staphylococcus aureus volatile metabolites

表4是由《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)》處理得到的10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物圖譜的相似度匹配結(jié)果,包括參照?qǐng)D譜(S1)與其余9張測(cè)試樣品圖譜相似度(第一行)和將10張測(cè)試樣品圖譜與建立起來的對(duì)照指紋圖譜的相似度(第二行)。一般情況下相似度在0.9～1.0之間即認(rèn)為符合建立指紋圖譜的要求。由表4可知,10組圖譜在兩種比較下的相似度均在此范圍內(nèi),分別最大為0.987、0.994,最小為0.935、0.958。相似度匹配結(jié)果表明,10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的數(shù)量相同,各揮發(fā)性代謝產(chǎn)物組分含量穩(wěn)定,同時(shí)進(jìn)一步表明建立的對(duì)照指紋圖譜有參考價(jià)值,可作為金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的指紋圖譜。

表4 金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物圖譜的相似度匹配結(jié)果Table 4 Similarity match results of chromatograms of Staphylococcus aureus volatile metabolites

3 討論

迄今,通過揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對(duì)病原微生物進(jìn)行辨別與區(qū)分的報(bào)道已有很多。Rees等[19]分析了來源于臨床的多種細(xì)菌和霉菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物特征,采用隨機(jī)森林算法確定了不同病原菌之間的差異代謝產(chǎn)物,并通過主成分分析法呈現(xiàn)了不同病原菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的差異性。Ratiu等[20]采用蒸騰型離子遷移光譜分析了大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,運(yùn)用主成分分析法對(duì)三種病原菌產(chǎn)生的不同離子流輪廓進(jìn)行了區(qū)分。Xu等[21]等檢測(cè)了鼠傷寒沙門氏菌污染的豬肉的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物和可溶性小分子代謝產(chǎn)物,采用偏最小二乘法對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,可以有效區(qū)分自然污染肉樣和鼠傷寒沙門氏菌人工污染肉樣。Hettinga等[22]對(duì)乳房炎乳中病原菌的揮發(fā)性代謝特征進(jìn)行了分析,采用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物輪廓進(jìn)行分析,可以實(shí)現(xiàn)乳房炎乳中四種病原菌的有效區(qū)分。然而,細(xì)菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜的相似度匹配能夠?qū)⒓?xì)菌的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的組成信息轉(zhuǎn)化為明確的微生物鑒定標(biāo)志,與上述采用的各種細(xì)菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物辨別方法有本質(zhì)區(qū)別。HS-SPME-GC/MS-AMDIS結(jié)合揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的指紋圖譜相似度匹配的鑒定方法操作簡(jiǎn)單,耗時(shí)短,提高了微生物鑒定的效率,可運(yùn)用于金黃色葡萄球菌的質(zhì)量監(jiān)測(cè)及分析。

4 結(jié)論

金黃色葡萄球菌ATCC6538在7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基中總共鑒定出17個(gè)揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,將17個(gè)化合物的質(zhì)譜信息導(dǎo)入到AMDIS軟件中,建立金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)》進(jìn)行處理,以國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局頒發(fā)的《中藥注射劑指紋圖譜的技術(shù)要求(暫行)》和建立的金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物目標(biāo)化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)為參考依據(jù),確定了10組金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物的17個(gè)共有指紋峰,建立了金黃色葡萄球菌揮發(fā)性代謝產(chǎn)物指紋圖譜。