余書(shū)平，徐禮羿，吳榮梅，王麗鴛，吳立赟，韋康，成浩*，汪永奇

浙江開(kāi)化縣茶樹(shù)種質(zhì)資源的遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析

余書(shū)平1，徐禮羿2，吳榮梅1，王麗鴛2，吳立赟2，韋康2，成浩2*，汪永奇1

1. 浙江省開(kāi)化縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 開(kāi)化 324300；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/國(guó)家茶樹(shù)改良中心，浙江 杭州 310008

收集了浙江省開(kāi)化縣的不同茶樹(shù)種質(zhì)資源，利用SSR標(biāo)記對(duì)資源的遺傳多樣性及個(gè)體間的遺傳關(guān)系進(jìn)行評(píng)估，篩選適于分子鑒別的核心標(biāo)記組合，并分析樣本的親緣關(guān)系。研究結(jié)果顯示：（1）14個(gè)SSR標(biāo)記在供試樣本中具有多態(tài)性，每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位基因數(shù)為3~6個(gè)，平均等位基因數(shù)為4.14個(gè)，平均有效等位位點(diǎn)數(shù)為2.927個(gè)；（2）14個(gè)SSR位點(diǎn)的基因分型組合能精確的識(shí)別出每份種質(zhì)資源，基于復(fù)合位點(diǎn)分析，成功篩選出10個(gè)核心SSR位點(diǎn)作為簡(jiǎn)化的組合，以該組合檢測(cè)本試驗(yàn)的36份種質(zhì)資源，其PE-1和PE-3分別超過(guò)0.99，PE-2超過(guò)0.95；（3）基于UPGMA構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，將36份樣本分為3個(gè)類群，并通過(guò)親緣分析初步推測(cè)樣本組中5個(gè)組合可能存在親子關(guān)系。研究表明開(kāi)化的茶樹(shù)種質(zhì)資源具有區(qū)別于現(xiàn)有育成品種的遺傳背景，遺傳多樣性豐富。

SSR標(biāo)記；遺傳背景；親緣分析；開(kāi)化縣；茶樹(shù)

浙江省屬經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)省份，但其山區(qū)面積達(dá)到717萬(wàn)hm2，占全省土地面積的70.4%，山區(qū)縣市是經(jīng)濟(jì)發(fā)展相對(duì)緩慢的地區(qū)[1]。因此大力發(fā)展山區(qū)經(jīng)濟(jì)是浙江省經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要部分。浙江省衢州市開(kāi)化縣為典型的山區(qū)縣，生態(tài)環(huán)境優(yōu)越，具有豐富的茶樹(shù)資源[2]。茶樹(shù)是我國(guó)經(jīng)濟(jì)效益較高的作物[3]，對(duì)大力發(fā)展山區(qū)經(jīng)濟(jì)，具有良好的效果。截至2013年，開(kāi)化縣已發(fā)展8?000?hm2高山茶園，春茶總產(chǎn)量1?165?t，產(chǎn)值達(dá)到4.22億元[4]。但目前仍存在產(chǎn)品結(jié)構(gòu)單一等問(wèn)題限制了茶產(chǎn)業(yè)進(jìn)一步的發(fā)展[5]。因此，收集開(kāi)化縣地區(qū)的茶樹(shù)種質(zhì)資源，研究其遺傳背景和親緣關(guān)系是未來(lái)培育新品種茶樹(shù)，豐富茶類結(jié)構(gòu)和茶產(chǎn)品，以及進(jìn)一步提升茶產(chǎn)業(yè)的基礎(chǔ)。

微衛(wèi)星標(biāo)記（Simple sequence repeats，SSR）作為PCR技術(shù)分子標(biāo)記的代表，在上世紀(jì)90年代末至21世紀(jì)初被廣泛應(yīng)用于各種作物的遺傳研究中[6-7]。SSR是廣泛分布于真核生物基因組中的重復(fù)DNA片段（1~6?bp）[8]，具有共顯性、多態(tài)性高、易檢測(cè)、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，較之目前常用的SNP標(biāo)記成本更為低廉，因此擁有極強(qiáng)的實(shí)用性[9]。目前，SSR標(biāo)記已廣泛應(yīng)用于茶樹(shù)的遺傳多樣性和遺傳圖譜等方面的研究[10-11]。王松琳等[12]利用62個(gè)SSR標(biāo)記分析了白化和黃化茶樹(shù)資源的遺傳多樣性，并初步明確SSR標(biāo)記在此類茶樹(shù)資源的適用性；王讓劍等[13]采用熒光標(biāo)記的SSR建立了54個(gè)福建無(wú)性系茶樹(shù)品種的鑒別圖，實(shí)現(xiàn)品種的快速、穩(wěn)定鑒別。Chang等[14]結(jié)合SSR、RAPD和AFLP標(biāo)記對(duì)79個(gè)單株的F1群體建立了1份包含309個(gè)標(biāo)記的遺傳圖譜；徐禮羿等[15]利用SSR標(biāo)記構(gòu)建的遺傳圖譜實(shí)現(xiàn)茶樹(shù)炭疽病的QTL分析，成功挖掘了8個(gè)與茶樹(shù)炭疽病相關(guān)的QTLs。

本研究通過(guò)15個(gè)SSR位點(diǎn)，分析浙江省開(kāi)化縣茶樹(shù)資源的遺傳多樣性，旨在為開(kāi)化縣茶樹(shù)資源構(gòu)建SSR指紋圖譜，篩選1組用于鑒別該地區(qū)種質(zhì)資源的核心SSR標(biāo)記，并檢測(cè)其在指紋圖譜中的檢測(cè)能力，研究開(kāi)化茶樹(shù)資源的遺傳背景，為后續(xù)新品種選育提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選取浙江省開(kāi)化縣的26份茶樹(shù)資源作為試驗(yàn)材料，分別編號(hào)1—26，以種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所嵊州基地的10個(gè)育成品種作為對(duì)照材料，分別編號(hào)27—36。取其新鮮的幼嫩組織置于–20℃下保存。供試樣品詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

1.2 DNA提取

DNA提取使用改良CTAB法，待測(cè)樣品的組織材料經(jīng)液氮冷凍后，快速置于自動(dòng)研磨儀中以30?r·s-1的速度研磨2?min，若材料未充分研磨可重新置于液氮中冷凍后再次研磨。研磨徹底的材料粉末采用植物基因組提取試劑盒（DP305 Plant Genomic DNA Kit，天根生化科技有限公司）提取DNA，詳細(xì)提取方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)?；蚪M提取后，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，使用超微量分光光度計(jì)（Nano Drop ND-1000，賽默飛世爾）測(cè)定DNA的濃度和純度；根據(jù)DNA的濃度將每份樣品DNA稀釋到20~30?ng·μL-1，–20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 候選SSR引物的PCR擴(kuò)增

從課題組前期已構(gòu)建完成的遺傳圖譜[16]上挑選多態(tài)性高、條帶清晰的15對(duì)SSR引物（表2）對(duì)樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

PCR反應(yīng)體系：Reaction Mix 5.0?μL（含DNA Polymerase、2×PCR Buffer、MgCl2和dNTP）；模板DNA 2.0?μL；Primer-F、Primer-R（10?ng·μL-1）各0.2?μL，加ddH2O至10?μL。

PCR循環(huán)參數(shù)：94℃預(yù)變性4?min；94℃變性30?s，最適退火溫度退火30?s，72℃延伸30?s，共計(jì)35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10?min；4℃保存（根據(jù)各個(gè)引物合成信息，Tm為52~58℃）。

表1 36份供試樣本信息表

1.4 擴(kuò)增產(chǎn)物的PAGE電泳和銀染顯色

擴(kuò)增產(chǎn)物加入2?μL上樣緩沖液（6×Loading Buffer）混勻，進(jìn)行10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳（Polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE），電泳在CBS MGV-202-33型垂直電泳儀上進(jìn)行。電泳結(jié)束后進(jìn)行銀染顯色，用Bio-Rad Gel Doc 2000凝膠成像儀拍照，然后用保鮮膜將凝膠封存。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用人工讀帶的方法，將電泳圖上的目的片段范圍內(nèi)清晰的條帶，按照分子量大小，從大到小依次記作A、B、C、D…，單一條帶為純合基因型，兩條條帶為雜合基因型，因條帶的大小不同分別記錄為AA、AB、BB、AC、AD、CD等，條帶缺失記為“..”。得到的數(shù)據(jù)計(jì)入Excel表，建立起原始基因型數(shù)據(jù)矩陣。

表2 15對(duì)SSR引物信息

注：*未擴(kuò)增出特異性條帶，在后續(xù)分析中排除

Note: * represented un-amplified band, which is excluded in subsequent analysis

利用GenAlEx 6.5.0.3軟件[17]進(jìn)行基因頻率、雜合度、標(biāo)記鑒別力等一系列遺傳參數(shù)的運(yùn)算。首先，將原始基因型數(shù)據(jù)矩陣格式化為軟件所需的格式，Excel的第一行分別填寫(xiě)位點(diǎn)數(shù)、樣本數(shù)、種群數(shù)及各個(gè)種群所含有的樣本數(shù)；Excel第一列為樣本編號(hào)，第二列為樣本對(duì)應(yīng)的種群名，第3列起為標(biāo)記列，每個(gè)標(biāo)記占2列，將等位位點(diǎn)分列，并將基因型A、B、C…替換為數(shù)字形式的1、2、3…，缺失位點(diǎn)用“0”表示。

按照供試樣本的基因型數(shù)據(jù)，將其轉(zhuǎn)換成PowerMarker v3.25軟件[18]要求的數(shù)據(jù)格式，例如基因型“AA，AB，BB…”轉(zhuǎn)換為“1/1，1/2，2/2…”，缺失數(shù)據(jù)用“？”替代?；凇癗ei.1983”計(jì)算樣本間的遺傳距離并進(jìn)行UPGMA進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建。使用FigTree v1.2.4軟件繪制UPGMA進(jìn)化樹(shù)。

將按照供試樣本的基因型導(dǎo)入Cervus軟件[19]進(jìn)行親緣分析，其中檢測(cè)樣本比例設(shè)定為0.95，檢測(cè)位點(diǎn)設(shè)定為0.8，缺失位點(diǎn)設(shè)定為0.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 遺傳多態(tài)性

本試驗(yàn)采用的14對(duì)SSR標(biāo)記在26份開(kāi)化茶樹(shù)資源的樣本中表現(xiàn)出中等水平的多態(tài)性，除標(biāo)記CsFM1660（65%）以外，其余13對(duì)SSR標(biāo)記均在超過(guò)88%的樣本中能成功擴(kuò)增出目的片段（圖1，表3）。14個(gè)SSR標(biāo)記共計(jì)擴(kuò)增出58個(gè)等位基因，標(biāo)記的等位位點(diǎn)范圍為3~6個(gè)，平均每個(gè)SSR標(biāo)記擴(kuò)增出4.14個(gè)等位位點(diǎn)，平均有效等位位點(diǎn)數(shù)為2.927個(gè)。標(biāo)記CsFM1781、CsFM1835和CsFM1843擴(kuò)增的等位基因較少，僅為3個(gè)；標(biāo)記CsFM1735擴(kuò)增的等位基因最多，達(dá)到6個(gè)（表4）。所選用的SSR標(biāo)記超過(guò)70%（10對(duì)）在樣本組中具有鑒別出4個(gè)及以上等位基因的能力。

通過(guò)表3可以發(fā)現(xiàn)，本研究中SSR位點(diǎn)的有效位點(diǎn)數(shù)Ne與多態(tài)信息量I存在正相關(guān)，SSR位點(diǎn)擁有的有效等位位點(diǎn)數(shù)越多，其多態(tài)信息量越高。例如，在14個(gè)標(biāo)記中，標(biāo)記CsFM1735的有效等位位點(diǎn)數(shù)最多，達(dá)到4.380，其多態(tài)信息量（1.602）同樣為所有標(biāo)記中的峰值。與之相反的，CsFM1737在樣本組中的有效等位位點(diǎn)數(shù)僅為1.688，為14個(gè)標(biāo)記的最低值，其多態(tài)信息量（0.777）同樣為樣本組中的最低值。同時(shí)，本研究中CsFM1660、CsFM1671、CsFM1715、CsFM1735和CsFM1839等5個(gè)標(biāo)記的有效標(biāo)記數(shù)均超過(guò)3個(gè)，在樣本組中表現(xiàn)出的多態(tài)性較高，具有較強(qiáng)的鑒別能力。此外，標(biāo)記CsFM1640、CsFM1651、CsFM1671、CsFM1714、CsFM1715、CsFM1717、CsFM1735、CsFM1737、CsFM1781、CsFM1835和CsFM1839等11個(gè)位點(diǎn)的觀測(cè)雜合度均高于0.5，表明這些位點(diǎn)在樣本組中呈現(xiàn)出中高度多樣性的特點(diǎn)，可以選用這11個(gè)SSR標(biāo)記作為本試驗(yàn)樣本組遺傳多樣性分析的核心標(biāo)記組合。

在CsFM1640、CsFM1651、CsFM1714、CsFM1715、CsFM1735、CsFM1737和CsFM1835等7個(gè)位點(diǎn)中，固定系數(shù)F為負(fù)值，即Ho值略高于He值，表明在這些位點(diǎn)上存在輕微雜合子過(guò)量的情況。

2.2 指紋圖譜與標(biāo)記的鑒別能力

利用GenAlEx軟件，將基因分型數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)合位點(diǎn)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基于14個(gè)SSR標(biāo)記組合，36份供試樣本的數(shù)字化基因分型如圖2所示。本試驗(yàn)的14個(gè)SSR標(biāo)記鑒別結(jié)果顯示，編號(hào)17和18的兩個(gè)樣本具有相同的基因型，因此我們推測(cè)這兩個(gè)樣本的遺傳背景相同。此外，我們進(jìn)一步計(jì)算了復(fù)合位點(diǎn)的非同一概率值PE（表5）。PE-1表示位點(diǎn)未缺失時(shí)的PE值，PE-2表示缺失1個(gè)位點(diǎn)的PE值，PE-3表示去除1個(gè)純合位點(diǎn)的PE值。由表5可知，14個(gè)SSR位點(diǎn)的PE-1值的范圍在0.212?1~0.588?8，均值為0.403?3；PE-2值的范圍在0.079?1~0.409?8，均值為0.244?0；PE-3值的范圍在0.352?7~0.771?3，均值為0.569?5；在位點(diǎn)未缺失的情況下，14個(gè)SSR位點(diǎn)組合后，兩個(gè)隨機(jī)樣本基因型組合不同的概率值（PE-1）為0.999?4；若缺失一個(gè)位點(diǎn)時(shí)，14個(gè)SSR位點(diǎn)組合后兩個(gè)隨機(jī)樣本基因型組合不同的概率（PE-2）為0.981?5；在去除一個(gè)純合位點(diǎn)的情況下，14個(gè)SSR位點(diǎn)組合后兩個(gè)隨機(jī)樣本基因型組合不同的概率（PE-3）為1.000?0。

圖1 標(biāo)記CsFM1715的部分電泳條帶

表3 14對(duì)SSR標(biāo)記的遺傳參數(shù)

表4 14個(gè)SSR標(biāo)記在36份供試樣本中的位點(diǎn)頻率與位點(diǎn)數(shù)

注：條形碼編碼格式為code 39

基于表5可知，PE-1、PE-2和PE-3之間存在極顯著正相關(guān)。由圖3可知，隨著SSR位點(diǎn)組合從1個(gè)增加到14個(gè)，樣本組中隨機(jī)2個(gè)樣本具有不同基因型組合的概率值PE-1從0.442?5上升為0.999?4，PE-2從0.259?6上升為0.981?5，PE-3從0.595?9上升為1.000?0；因此，當(dāng)我們選擇10個(gè)核心SSR標(biāo)記組合時(shí)，PE-1和PE-3分別超過(guò)0.99，PE-2超過(guò)0.95。為了能夠用盡可能少的核心引物準(zhǔn)確地識(shí)別本試驗(yàn)的種質(zhì)資源，篩選出本試驗(yàn)中PE值排名前10的標(biāo)記作為核心標(biāo)記，包括CsFM1640、CsFM1651、CsFM1660、CsFM1671、CsFM1714、CsFM1715、CsFM1717、CsFM1735、CsFM1757和CsFM1839。

2.3 親緣分析

基于Nei’s遺傳距離構(gòu)建了36個(gè)供試樣品的UPGMA進(jìn)化樹(shù)圖（圖4）。按遺傳距離的遠(yuǎn)近，供試樣品可大致分為3個(gè)類群（Group 1、Group 2和Group 3）。Group 1共有9個(gè)樣本，包含1個(gè)育成品種龍井43，且樣本KH-2015-13與龍井43遺傳距離最近，推測(cè)其與龍井43親緣關(guān)系較近；樣本SZ-2和KH-2015-1之間遺傳距離相同，推測(cè)其遺傳背景極度近似或相同。Group 2共有15個(gè)樣本，包含烏牛早、白毫早、金萱、南江1號(hào)和農(nóng)抗早等5個(gè)育成品種；海順1號(hào)和海順2號(hào)、KH-2015-14和KH-2015-15為2個(gè)遺傳距離相等的組合，推測(cè)其遺傳背景極度近似或相同。Group 3共有12個(gè)樣本，包含福鼎大白、迎霜、中黃1號(hào)和中黃2號(hào)等4個(gè)育成品種。

表5 14個(gè)SSR標(biāo)記的PE值

注：PE-1表示位點(diǎn)未缺失時(shí)的PE值，PE-2表示缺失1個(gè)位點(diǎn)的PE值，PE-3表示去除1個(gè)純合位點(diǎn)的PE值

基于UPGMA進(jìn)化樹(shù)劃分的3個(gè)類群，分子方差分析（Analysis of molecular variance，AMOVA）結(jié)果顯示（圖5），14個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型頻率在樣本中的分子變異表現(xiàn)出組間（8%）＜組內(nèi)（14%）＜個(gè)體（78%），即按遺傳距離對(duì)樣本組進(jìn)行分群可以發(fā)現(xiàn)，36份供試樣本的分子遺傳變異主要源于個(gè)體間。

采用Cervus軟件對(duì)各個(gè)樣本之間的親緣關(guān)系進(jìn)行模擬分析可知，在置信度水平為80%和95%時(shí)，其Δ閾值分別為1.00和1.25，即樣本兩兩間的LOD值高于閾值時(shí)，表明二者存在該置信度水平下的親子關(guān)系。由表6可知，樣本SZ-2和KH-2015-1存在顯著的親子關(guān)系，且二者均與KH-2015-8存在親子關(guān)系。此外，樣本KH-2015-7和大龍黃化、KH-2015-11和KH-2015-22、KH-2015-18和KH-2015-19等3個(gè)組合存在親子關(guān)系。

3 討論

3.1 SSR標(biāo)記的多樣性和檢測(cè)能力

本研究采用的SSR標(biāo)記源于Tan等[20]開(kāi)發(fā)的分子標(biāo)記，已廣泛的應(yīng)用于茶樹(shù)資源的分子指紋圖譜構(gòu)建和遺傳分析[21]。徐禮羿等[22]對(duì)勐庫(kù)大葉種茶樹(shù)進(jìn)行SSR遺傳分析后認(rèn)為，8個(gè)核心SSR標(biāo)記即可成功識(shí)別200份以上的試驗(yàn)材料。因此，本試驗(yàn)初期選取15個(gè)SSR標(biāo)記進(jìn)行多樣性分析，結(jié)果顯示共有14個(gè)SSR標(biāo)記具有多態(tài)性，標(biāo)記的等位位點(diǎn)3~6個(gè)，平均每個(gè)SSR標(biāo)記擴(kuò)增出4.14個(gè)等位位點(diǎn)，平均有效等位位點(diǎn)數(shù)為3.08個(gè)。除初期排除的1個(gè)標(biāo)記外，14個(gè)SSR標(biāo)記的多態(tài)信息量均較高（I＞0.5），表明本研究選取的14個(gè)標(biāo)記整體多態(tài)性較好，符合構(gòu)建指紋圖譜進(jìn)行品種鑒定的要求?；趶?fù)合位點(diǎn)的非同一性分析發(fā)現(xiàn)，選擇10個(gè)核心SSR標(biāo)記組合時(shí)，PE-1和PE-3分別超過(guò)0.99，PE-2超過(guò)0.95，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)本試驗(yàn)36份材料的成功識(shí)別。與Tan等[21]和徐禮羿等[22]的結(jié)果相比，本研究鑒定的材料較少，但需要增加2個(gè)核心標(biāo)記才能實(shí)現(xiàn)資源的精確識(shí)別，結(jié)合親緣分析和進(jìn)化樹(shù)圖，推測(cè)樣本之間親緣關(guān)系較近是導(dǎo)致該現(xiàn)象的原因，因此后續(xù)有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)更適合此類資源鑒別的多態(tài)性標(biāo)記，降低用于鑒定的核心標(biāo)記數(shù)，提高性價(jià)比。

圖4 36份供試樣本的UPGMA進(jìn)化樹(shù)

注：Among Pops表示組間變異；Among Indiv表示組內(nèi)變異；Within Indiv表示個(gè)體間變異

表6 36份樣本的親緣分析

注：*表示相關(guān)性極顯著；+表示相關(guān)性顯著

Note: * indicated highly significant correlation, + indicated significant correlation

3.2 36份材料的親緣分析

本文基于Nei’s遺傳距離將供試樣本分為3個(gè)類群，Group 1中的樣品主要與對(duì)照品種龍井43的親緣關(guān)系較近，其中KH-2015-13與龍井43的親緣關(guān)系最為接近。此外，基于親緣分析，Group 1中樣本SZ-2和KH-2015-1之間存在顯著的親子關(guān)系，且二者均與KH-2015-8存在親子關(guān)系。由表1可知，SZ-2和KH-2015-8均種植于蘇莊鎮(zhèn)，而KH-2015-1種植于齊溪鎮(zhèn)大龍村，結(jié)合三者的遺傳分析和地理位置，推測(cè)SZ-2和KH-2015-8可能為KH-2015-1的父母本，KH-2015-1由蘇莊鎮(zhèn)引種至齊溪鎮(zhèn)大龍村。

Group 2中存在遺傳距離相等的2個(gè)組合，海順1號(hào)和海順2號(hào)、KH-2015-14和KH-2015-15。其中，海順1號(hào)和海順2號(hào)表型特征接近，均為特異的白化種質(zhì)資源（圖6-A），在未來(lái)研究中，可用于優(yōu)異白化品種的選育；基于KH-2015-14和KH-2015-15的基因分型可以發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)樣本之間的14個(gè)標(biāo)記基因分型完全相同，且兩個(gè)樣本表型相似，均有發(fā)芽特早的特點(diǎn)，推測(cè)兩個(gè)樣本源于同一親本茶樹(shù)。此外，Group 2中KH-2015-18和KH-2015-19之間存在顯著的親子關(guān)系。

親緣分析顯示Group 3中的樣本組合KH-2015-7和大龍黃化、KH-2015-11和KH-2015-22存在顯著的親子關(guān)系。其中KH-2015-11和KH-2015-22均具有葉色黃綠的特征。此外，作為對(duì)照樣本的10個(gè)育成品種分布于3個(gè)類群之中，除龍井43和中黃2號(hào)外，其余8個(gè)品種與26份開(kāi)化的茶樹(shù)種質(zhì)資源遺傳距離較遠(yuǎn)，表明開(kāi)化的茶樹(shù)資源具有區(qū)別于現(xiàn)有育成品種的遺傳背景，遺傳多樣性豐富，這與表型觀測(cè)結(jié)果一致。表型性狀觀測(cè)發(fā)現(xiàn)，開(kāi)化的茶樹(shù)種質(zhì)資源中具有白化（圖6-A）、黃化（圖6-B）和紫化的特異種質(zhì)資源，本研究結(jié)果對(duì)未來(lái)開(kāi)化地區(qū)特異性狀茶樹(shù)種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)和選育具有重要意義。

圖6 海順1號(hào)（A）和KH-2015-13（B）的表型特征

本研究基于14個(gè)SSR分子標(biāo)記，分析浙江省開(kāi)化縣26份有性群體種茶樹(shù)種質(zhì)資源和10個(gè)育成茶樹(shù)品種之間的親緣關(guān)系，并構(gòu)建SSR指紋圖譜，進(jìn)一步篩選出10個(gè)核心SSR位點(diǎn)作為簡(jiǎn)化的組合，在位點(diǎn)未缺失的情況下，識(shí)別率可達(dá)99%以上，在缺失1個(gè)位點(diǎn)的情況下，識(shí)別率也可達(dá)到95%；結(jié)合群體遺傳結(jié)構(gòu)分析，36份供試樣本被分為3個(gè)類群，并初步推測(cè)樣本組中存在親子關(guān)系的5個(gè)組合。綜上，本文分析了開(kāi)化縣26份茶樹(shù)種質(zhì)資源的遺傳背景，為該地區(qū)未來(lái)新品種選育及種質(zhì)資源保存提供了研究基礎(chǔ)。

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Genetic and Phylogenetic Analysis for Resources offrom Kaihua County in Zhejiang Province

YU Shuping1, XU Liyi2, WU Rongmei1, WANG Liyuan2, WU Liyun2, WEI Kang2, CHENG Hao2*, WANG Yongqi1

1. Bureau of Agriculture and Rural Affairs of Kaihua, Kaihua 324300, China 2. National Centre for Tea Improvement, Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China

In this study, various tea resources from Kaihua County were collected to evaluate genetic diversity and phylogenetic relationships among individuals by SSR markers. Meanwhile, suitable core marker combinations were screened to construct fingerprint map. The results show that: (1) 14 SSR markers were polymorphic in the samples. The number of alleles per SSR locus was from 3 to 6 with the mean value of 4.14, and the average number of effective alleles was 3.08. (2) each germplasm resource could be identified by using 14 SSR markers. And based on the analysis of complex loci, the value of PE-1 and PE-3 were over 0.99 and PE-2 over 0.95, respectively, when 10 core SSR loci, as a simplified combination, were successfully screened to distinguish 36 germplasm resources. (3) 36 samples were divided into three groups based on UPGMA phylogenetic tree, and it was preliminarily speculated that five combinations might have parent-child relationship in the sample group through phylogenetic analysis. Present study indicated that tea germplasms in Kaihua County displayed highly diverse genetic backgrounds and might provide useful plant resources for breeding of new cultivars.

SSR marker, genetic background, phylogenetic analysis, Kaihua County,

S571.1；S154.1

A

1000-369X(2020)03-341-11

2019-09-18

2019-10-20

中央級(jí)科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（1610212018004）、國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（CARS-19）、浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大專項(xiàng)（2016C02053）

余書(shū)平，男，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事茶樹(shù)資源、茶葉加工方面的研究。*通信作者：chenghao@tricaas.com

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