吳慧，李春紅，孟祥吉

（1.山東衛(wèi)康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司，淄博市精準(zhǔn)基因檢測關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 淄博 255000；2.山東省遺傳性疾病基因檢測技術(shù)應(yīng)用示范中心，山東 濟(jì)南 250000）

0 引言

新生兒聽力篩查時(shí)需采取早發(fā)現(xiàn)和早診斷等重要手段，但是目前有資料顯示耳聾患者多為遲發(fā)性，在出生時(shí)并未表現(xiàn)出聽力損失，因此單純進(jìn)行新生兒聽力篩查具有一定局限性，聯(lián)合耳聾基因分子篩查能夠有效降低先天性耳聾發(fā)病率[1]。現(xiàn)階段來看，人類基因組計(jì)劃已經(jīng)基本完成，加上日益完善的遺傳病檢測技術(shù)可顯著預(yù)防先天性耳聾的發(fā)生。我國流行病學(xué)研究資料顯示，聾人群體中的遺傳性耳聾比例比較高，其中GJB2 基因、GJB3 基因、SrRNA 基因以及SLC26A4基因等是導(dǎo)致我國人群發(fā)生耳聾的重要致病因子[2]。有關(guān)研究資料顯示，GJB2 基因突變會導(dǎo)致先天中重度感音神經(jīng)性耳聾發(fā)生，SLC26A4 基因突變會導(dǎo)致大前庭水管綜合征發(fā)生或先天性/后天性中重度感音神經(jīng)性耳聾發(fā)生，GJB3 基因突變會導(dǎo)致后天高頻感音神經(jīng)性耳聾，SrRNA 基因突變會導(dǎo)致藥物性耳聾情況發(fā)生[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院（在2016 年2 月至2019 年2 月）出生的1500 例嬰幼兒一般資料。1500 例嬰幼兒中有792 例男、708 例女，平均年齡為（2.15±0.98）歲。在患兒家長知情下采集血液標(biāo)本（1 mL～2 mL），采取本院自制問卷調(diào)查表調(diào)查患兒的基本資料（姓名、性別、年齡、家族有無耳聾病史等）。

1.2 方法

采用聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增（擴(kuò)增儀型號：美國公司生產(chǎn)的CFX96 型）反向點(diǎn)雜交法（采用恒溫雜交儀以及遺傳性耳聾基因檢測試劑盒）檢測1500 例嬰幼兒的4 個(gè)基因。提取DNA 方法 首先裂解紅細(xì)胞、再收集白細(xì)胞，最后通過變性液使得蛋白質(zhì)變性，釋放DNA，在高鹽低pH 狀態(tài)下利用DNA 吸附劑吸附DNA，再在低鹽高pH 狀態(tài)下溶解DNA。聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增：取出反應(yīng)液管、低速離心、做好標(biāo)記，再加入已經(jīng)提取的2uLDNA 檢測標(biāo)本，再進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增。雜交與顯色：在離心管中放置標(biāo)有編號的膜條，加入雜交液以及聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增產(chǎn)物；將離心管置入沸水中加熱10 min，再放置恒溫雜交儀中90 min；將膜條移送到預(yù)熱后的50 mL 雜交液塑料管中，搖勻洗滌15 min；配置顯色液、孵育液、雜交液，棄液體，將膜條置于雜交液中輕搖浸泡0.5 h，棄除孵育液，再用雜交液洗滌兩次，每次5 min。

1.3 觀察指標(biāo)

分析聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反向點(diǎn)雜交法檢測1500 例嬰幼兒的4 個(gè)基因結(jié)果（根據(jù)膜條藍(lán)色顯色位點(diǎn)加以判斷）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

資料分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或精確概率法。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。

2 結(jié)果

1500 例嬰幼兒中共檢測出36 例基因攜帶者（占2.4%），其中有18 例GJB2 基因突變（占1.2%，18/1500）、10 例SLC26A4 基因突變（占0.7%，10/1500）、5 例GJB3 基因突變（占0.3%，5/1500）、3 例12SrRNA 基因突變（占0.2%，3/1500）。各組數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 分析1500 例嬰幼兒先天性耳聾基因檢測結(jié)果

3 討論

有關(guān)研究顯示，導(dǎo)致先天性耳聾發(fā)生的因素有：其一，遺傳因素；其二，環(huán)境因素[4]。在遺傳中，常見的致遺傳性耳聾基因有：GJB2 基因、SLC26A4 基因、GJB3 基因、12SrRNA 基因等[5]。本文研究結(jié)果顯示1500例嬰幼兒中共檢測出36例基因攜帶者（占2.4%），其中有18 例GJB2 基因突變（占1.2%，18/1500）、10 例SLC26A4 基因突變（占0.7%，10/1500）、5 例GJB3 基因突變（占0.3%，5/1500）、3 例12SrRNA基因突變（占0.2%，3/1500）。各組數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。先天性耳聾是一種常見的出生缺陷，主要是因?yàn)槟阁w在妊娠以及分娩過程中因遺傳而導(dǎo)致聽力受損。為了有效減少先天性耳聾嬰幼兒的出生，早期診斷和早期干預(yù)是最為重要的方法。目前來看，篩查先天性耳聾手段以聽力檢查方式為主，根據(jù)新生兒的年齡選擇合適的方法具有重要意義[6-7]。隨著基因分子遺傳學(xué)的研究日益深入，遺傳因素對先天性耳聾的相關(guān)影響日益受到醫(yī)學(xué)專家的高度重視，而采用基因檢測手段具有重要意義。綜上所述，1500 例嬰幼兒先天性耳聾基因檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)GJB2 基因突變?yōu)橹鱗8-10]。