馬平平,周君安,孫 琳

(江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司 江蘇 連云港 222000)

富馬酸貝達(dá)喹啉(Bedaquiline fumarate)由美國Jhonson&Jhonson 公司開發(fā)，可通過抑制ATP合成酶，來抑制結(jié)核分枝桿菌。該藥與2013年獲得美國FDA批準(zhǔn)，用于治療對多種藥物耐藥的成人結(jié)核患者[1-4]。根據(jù)ICH指導(dǎo)原則及中國藥典四部通則相關(guān)指導(dǎo)原則要求[5]，本實(shí)驗(yàn)建立了富馬酸貝達(dá)喹啉中二甲胺含量的檢測方法。

1 儀器與試劑

儀器：電子分析天平，梅特勒XS105；Thermo 公司DIONEX ICS-2100離子色譜儀，Thermo 公司CHROMELEON 6.8工作站；色譜柱：Dionex IonPac CS12A 4×250mm。試劑：甲磺酸為色譜純，來自MERCK公司；鹽酸二甲胺均為分析純，來自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水來源于杭州娃哈哈有限公司。

2 試驗(yàn)過程與結(jié)論

2.1 色譜條件

照離子色譜法(中國藥典2015年版)測定，用陽離子交換色譜柱(Dionex IonPac CS12A 4×250mm或柱效類似的色譜柱)和保護(hù)柱(Dionex IonPac CG12A 4×50mm或適合色譜柱的保護(hù)柱)；以10mmol/L甲磺酸溶液為流動相，流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；檢測器為電導(dǎo)檢測器，檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測，檢測器溫度為35℃。理論板數(shù)按二甲胺峰計(jì)算不得低于3000。

2.2 試驗(yàn)溶液配制

取本品約120mg，精密稱定，置20mL量瓶中，加水適量超聲5分鐘后稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；另取鹽酸二甲胺約55mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

量取對照品溶液25μL ，注入離子色譜儀，記錄圖譜。從實(shí)驗(yàn)圖譜看出，理論板數(shù)按二甲胺峰計(jì)算不低于3000。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密稱取鹽酸二甲胺18.09mg(約相當(dāng)于二甲胺10mg)，置100mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取此溶液0.1,1.0,2.0,3.0,5.0,10.0mL至100mL量瓶中，用稀釋溶液稀釋制成每1mL中分別含二甲胺0.1,1.0,2.0,3.0,5.0,10.0μg的溶液，精密量取上述溶液各25μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，量取峰面積 。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為：A=0.1427C - 0.0016，相關(guān)系數(shù)r=1.0000，說明二甲胺在0.10～9.99μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.5 檢測限與定量限

在本試驗(yàn)條件下，配制不同濃度的二甲胺對照品，檢測限以S/N≥3計(jì)，定量限以S/N≥10計(jì)，分別進(jìn)樣確定二甲胺的檢測限和定量限，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 二甲胺的檢測限和定量限

2.6 系統(tǒng)精密度

取“2.7含量測定精密度”項(xiàng)下第六份溶液，連續(xù)6針進(jìn)樣試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 系統(tǒng)精密度試驗(yàn)結(jié)果

由結(jié)果可見，重復(fù)6次測定的平均峰面積為0.3736，RSD=0.43%，表明該方法進(jìn)樣精密度很好。

2.7 含量測定精密度

取本品約120mg，精密稱定，置20mL量瓶中，加水適量超聲5min后稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，平行六份；另精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1mL含二甲胺約3μg的溶液，作為對照品溶液。按上述色譜條件，連續(xù)六針進(jìn)樣對照品溶液，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。連續(xù)6針進(jìn)樣試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 含量測定精密度試驗(yàn)結(jié)果

六份測定的平均值為0.0002%，RSD=0.00002(n=6)，表明該測定含量的方法在本色譜條件下精密度很好

2.8 回收率

精密稱取鹽酸二甲胺54.19mg置100mL量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，精密量取4.0mL至100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為二甲胺含量母液備用。

以二甲胺含量限度(0.05%)的濃度為基準(zhǔn)100%，分別精密量取上述母液1.0 ，2.5，5.0mL和7.5mL，置含基質(zhì)樣品的20mL量瓶中，加水適量超聲5分鐘后稀釋至刻度，搖勻，過濾，分別配制成限度為20%,50%,100%和150%的溶液各三份，作為供試品溶液。另精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1mL含二甲胺約3μg的溶液，平行兩份，作為二甲胺含量對照品溶液，樣品配制過程見表3.2.S.4.3.4-7分別精密量取上述溶液各25L注入離子色譜儀，記錄色譜圖，測量峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算回收率(其中供試品需要扣除樣品基質(zhì)中相對應(yīng)的二甲胺含量)計(jì)算回收量和回收率。平均回收率為99.6%，RSD為2.3%(n=12)，說明本分析方法檢測富馬酸貝達(dá)喹啉中雜質(zhì)二甲胺含量準(zhǔn)確、可靠。

3 討論

用離子色譜法測定富馬酸貝達(dá)喹啉中二甲胺的含量專屬性良好；對線性關(guān)系、系統(tǒng)精密度、回收率進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)本方法均能滿足上述實(shí)驗(yàn)的要求，對富馬酸貝達(dá)喹啉中二甲胺的含量進(jìn)行準(zhǔn)確定量，能滿足對富馬酸貝達(dá)喹啉中二甲胺的含量的控制。