高佳兒 魏文娟 彭俊 張靜 陸云燕

高血壓是腦卒中及冠心病發(fā)病的首要危險(xiǎn)因素，是全球?qū)е滤劳龅淖钪饕蛩刂唬l(fā)病機(jī)制仍不明確，是多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用引起的復(fù)雜性疾病。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)單核苷酸多態(tài)性（SNP）影響原發(fā)性高血壓的機(jī)制進(jìn)行較多研究，然而結(jié)果卻不盡相同［1-4］。本文選取高血壓最重要的發(fā)病機(jī)制之一的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中2 個(gè)主要的高血壓候選基因：血管緊張素原（AGT）基因、血管緊張素Ⅱ1 型受體（AGTR1）基因，及國外研究較多的質(zhì)膜Ca2+-ATP 酶1（ATP2B1）基因?yàn)檠芯磕繕?biāo)，旨在發(fā)現(xiàn)原發(fā)性高血壓患者的基因多態(tài)性，以及基因多態(tài)性與環(huán)境危險(xiǎn)因素交互作用對(duì)高血壓形成的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選擇2016 年10 月至2018 年12月本院就診原發(fā)性高血壓患者100 例（HTN 組），正常血壓對(duì)照組70 例（對(duì)照組）。HTN 組納入標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓≥140mmHg 和（或）舒張壓≥90mmHg，或自述正在服用抗高血壓藥物。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓<140mmHg 且舒張壓<90mmHg，并從未行降壓治療。排除繼發(fā)性高血壓患者；有原發(fā)性腎臟疾病者；有內(nèi)分泌疾病者；合并妊娠者。

1.2 方法 （1）一般資料采集：所有研究對(duì)象均留取清晨空腹肘靜脈血樣，30min 內(nèi)分離血漿并于-20℃保存。測量身高、體重、腰圍和血壓等，計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)（BMI），采集有無吸煙、飲酒史等一般病史。所有生化指標(biāo)在本院檢驗(yàn)科同批次專人檢測完成包括空腹血糖（FBG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿酸、血肌酐、同型半胱氨酸（Hcy）等。（2）基因多態(tài)性位點(diǎn)的檢測及分析：取空腹EDTA 抗凝靜脈血300μl，應(yīng)用血液基因組DNA 抽提試劑盒（美國Axygen 公司生產(chǎn)）提取基因組DNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。采用直接測序法對(duì)所有研究對(duì)象的目標(biāo)SNP 位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測。將需要檢測的SNP 位點(diǎn)作為靶序列，根據(jù)SNP 位點(diǎn)兩側(cè)的保守序列設(shè)計(jì)引物，引物設(shè)計(jì)合成以后（由上海派森諾生物科技股份有限公司合成），確認(rèn)DNA 模板質(zhì)量合格的情況下，使用BI-2720 PCR 擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件按試劑盒說明書設(shè)定，PCR 產(chǎn)物純化后應(yīng)用美國ABI 3730XL DNA 自動(dòng)測序儀進(jìn)行基因分型（由上海派森諾生物科技股份有限公司協(xié)助完成）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。非正態(tài)分布計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較用t 檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料以M（Q1，Q3）表示，組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以%表示，用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic 回歸模型分析原發(fā)性高血壓的獨(dú)立相關(guān)因素，及基因與環(huán)境因素交互作用對(duì)高血壓的影響。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組人群一般特征比較 HTN 組腰圍、BMI、FBG、TG、尿酸、血肌酐水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；兩組人群在性別、年齡、是否吸煙及飲酒、血膽固醇水平、血Hcy 水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見表1）。

表1 兩組人群一般特征比較（±s）

表1 兩組人群一般特征比較（±s）

項(xiàng)目 HTN組（n=100） 對(duì)照組（n=70） t/χ2值 P值年齡（歲） 58.36±12.70 57.26±13.29 0.409 0.684腰圍（cm） 92.75±9.74 74.52±16.46 8.241 0.001 BMI（mmol/L） 25.38±3.00 22.07±4.98 5.248 0.001 FBG（mmol/L） 6.29±1.35 5.05±0.56 8.078 0.001 TC（mmol/L） 4.58±1.00 4.22±0.89 1.770 0.079 TG（mmol/L） 1.81±1.02 1.38±0.78 2.105 0.037 LDL-C（mmol/L） 2.71±0.72 2.51±0.65 0.727 0.469 HDL-C（mmol/L） 1.35±0.29 1.33±0.30 0.277 0.782尿酸（mmol/L） 392.70±103.79 334.72±102.71 2.533 0.013肌酐（mmol/L） 75.98±19.95 65.85±21.18 3.123 0.002 Hcy（μmol/L） 15.08±10.53 11.68±5.93 1.646 0.103吸煙（n） 14/86 10/60 0.038 0.845飲酒（n） 22/78 10/60 1.383 0.240性別（男/女）（n） 53/47 46/24 3.397 0.065

2.2 兩組人群AGT、AGTR1、ATP2B1 基因代表性SNP 位點(diǎn)基因型分布的差異 AGT 基因兩個(gè)SNP 位點(diǎn)rs699、rs5051，AGTR1 基因一個(gè)SNP 位點(diǎn)rs5186，ATP2B1 基因一個(gè)SNP 位點(diǎn)rs12817819 的基因型頻率分布符合H-W 遺傳平衡定律（P>0.05），樣本具有群體代表性。上述SNP 位點(diǎn)兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見表2）。

表2 兩組人群各SNP位點(diǎn)基因型分布的差異

2.3 基因多態(tài)性及環(huán)境因素與高血壓的相關(guān)性 經(jīng)Logistic 回歸校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy、尿酸后顯示，F(xiàn)BG、腰圍及TC 為原發(fā)性高血壓獨(dú)立危險(xiǎn)因素，未發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性與高血壓相關(guān)聯(lián)（P>0.05）（見表3）。

表3 基因多態(tài)性及環(huán)境因素與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性

2.4 基因多態(tài)性及環(huán)境因素交互作用對(duì)原發(fā)性高血壓的影響 Logistic 回歸分析顯示基因多態(tài)性與環(huán)境因素交互作用對(duì)原發(fā)性高血壓的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。FBG、TC、腰圍三者交互作用與原發(fā)性高血壓顯著相關(guān)（P<0.01），校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy 水平、尿酸、吸煙等因素后，上述相關(guān)性仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3 討論

隨著人口老齡化，以及肥胖、睡眠呼吸暫停低通氣綜合征的增多，我國高血壓患病率在2012 年已達(dá)25.2%，高血壓患者為2.7 億［5］，血壓達(dá)標(biāo)率卻不足10%，嚴(yán)重危害人民群眾的生命安全，影響生活質(zhì)量［6-7］。因此，闡明患者血壓升高的遺傳機(jī)制，尋找高血壓相關(guān)基因，具有非常重要的意義。

全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）發(fā)現(xiàn)較多與原發(fā)性高血壓有關(guān)的基因和單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)［8-10］。ATP2B1 基因便是其中之一，Kohara 等［11］在1484 例日本個(gè)體中進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性和候選基因分析，首次發(fā)現(xiàn)ATP2B1 基因?yàn)楦哐獕阂赘谢?。Xu 等［12］發(fā)現(xiàn)ATP2B1 基因rs17249754 位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與寧波漢族人群原發(fā)性高血壓發(fā)生密切相關(guān)。本資料未發(fā)現(xiàn)ATP2B1 基因位點(diǎn)rs12817819 與原發(fā)性高血壓存在相關(guān)性。兩個(gè)目標(biāo)基因AGT、AGTR1 的所有SNP 位點(diǎn)兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），經(jīng)Logistic回歸分析，未發(fā)現(xiàn)上述基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)聯(lián)。

原發(fā)性高血壓的發(fā)生是由遺傳基因與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，具有病因的多元性和復(fù)雜性，可能受到多個(gè)基因位點(diǎn)及環(huán)境危險(xiǎn)因素的共同影響［13-14］。本資料顯示，HTN 組腰圍、BMI、FBG、TG、尿酸、血肌酐水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic 回歸分析顯示FBG、TC 及腰圍為原發(fā)性高血壓獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外本研究采用交互作用模型理論，探討基因多態(tài)性與環(huán)境因素交互作用對(duì)原發(fā)性高血壓的影響。Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，基因多態(tài)性與環(huán)境因素交互作用對(duì)原發(fā)性高血壓的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），F(xiàn)BG、TC、腰圍三者交互作用與原發(fā)性高血壓顯著相關(guān)（P<0.01），校正性別、年齡、BMI、血肌酐、血Hcy 水平、尿酸、吸煙等因素后，上述相關(guān)性仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

綜上所述，在蕭山區(qū)原發(fā)性高血壓患者中，環(huán)境因素FBG、TC、腰圍是原發(fā)性高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，三者交互作用與原發(fā)性高血壓顯著相關(guān)。但未發(fā)現(xiàn)目標(biāo)基因位點(diǎn)多態(tài)性與原發(fā)性高血壓發(fā)病相關(guān)聯(lián)。本研究為高血壓遺傳學(xué)研究提供本地區(qū)的相關(guān)信息，但由于樣本量較小，會(huì)產(chǎn)生一定的局限性，未來有待于更大樣本量更多基因位點(diǎn)的研究揭示高血壓遺傳學(xué)方面的病因。