張芬芬，沈文斌，徐開兵，楊 明

定量核磁共振氫譜測定新藥替格瑞洛

張芬芬1，沈文斌2，徐開兵1，楊 明1*

1. 東華大學(xué) 分析測試中心，上海 201620；2. 中國藥科大學(xué) 藥物研究院，江蘇 南京 210009

本文建立了基于核磁共振氫譜（1H NMR）測定新藥替格瑞洛絕對含量的方法．采用Bruker Avance 300型NMR譜儀，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)；以替格瑞洛中質(zhì)子信號H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s），磺胺多辛質(zhì)子信號H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）作為定量峰；以氘代甲醇（CD3OD）為溶劑進(jìn)行測定．測定條件為：探頭溫度為308 K，譜寬為3 511.5 Hz，中心頻率為1 470.6 Hz，脈沖翻轉(zhuǎn)角為30?，延遲時(shí)間為10 s，采樣次數(shù)為16，線寬因子為0.3 Hz．在此實(shí)驗(yàn)條件下，替格瑞洛樣品與內(nèi)標(biāo)磺胺多辛的定量峰分離良好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果精密度較高、重復(fù)性較好、線性范圍較寬，其線性擬合方程為：=1.053- 0.081（=0.996，=5）．最終測得樣品中替格瑞洛含量為99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（）為0.20%．該方法簡便、準(zhǔn)確、快速，適用于替格瑞洛樣品的絕對含量測定．

核磁共振氫譜；替格瑞洛；含量測定

引 言

替格瑞洛[ticagrelor圖1(a)]，化學(xué)名為(1S,2S,3R,5S)-3-[7-[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙氨基]-5-(硫丙基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羥基乙氧基)環(huán)戊烷-1,2-二醇，是由英國阿斯利康公司研制開發(fā)的一種新的治療急性冠狀動脈綜合征的藥物[1]，其通過防止血液中血小板形成結(jié)塊來預(yù)防血栓，進(jìn)而減少心血管事件的發(fā)生．2011年7月20日，美國食品及藥物管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）正式批準(zhǔn)替格瑞洛上市．目前，《中國藥典》2015年版及最新版的《美國藥典》、《歐洲藥典》、《日本藥局方》均未收載替格瑞洛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)．作為創(chuàng)新藥，目前報(bào)道較多的是替格瑞洛的藥理作用及療效[2-7]，其檢測方法也有少量報(bào)道，如高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectroscopy，LC/MS/MS）[8]．雖然光譜法準(zhǔn)確可靠，但需特定的對照品才能完成定量測定[9,10]．目前，還未見使用核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）技術(shù)對其含量進(jìn)行測定的報(bào)道．

定量核磁共振法（Quantitative NMR，QNMR）基于各化學(xué)環(huán)境中質(zhì)子吸收峰的面積與質(zhì)子數(shù)呈正比，不需特定的對照品、快速準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)，特別適合無對照品的新藥的含量測定．核磁共振氫譜（1H NMR）因具有較高的檢測靈敏度，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥[11]、化學(xué)[12]及化工[13]等領(lǐng)域，已被收載于《中國藥典》2015版．本文以磺胺多辛，化學(xué)名為4-(對氨基苯磺酰氨基)-5,6-二甲氧基嘧啶[圖1(b)]為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)作者所在課題組的經(jīng)驗(yàn)[14]建立了基于1H NMR測定替格瑞洛原料藥絕對含量的方法，研究了溶劑、內(nèi)標(biāo)物及NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)對測量結(jié)果的影響，為該物質(zhì)的含量測定提供了一種新思路．

圖1 (a)替格瑞洛和(b)磺胺多辛的化學(xué)結(jié)構(gòu)（字母標(biāo)記處的質(zhì)子信號為所選定量峰）

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 300型超導(dǎo)NMR譜儀，配備QNP探頭；分析用電子天平（Mettler Toledo，AB265-S，感量0.01 mg）；真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）．替格瑞洛待測樣品（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供）；磺胺多辛內(nèi)標(biāo)（批號40918，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.0%，中國食品藥品檢定研究院提供）；氘代甲醇（CD3OD，99.8%氘代，Sigma-Aldrich公司）．

1.2 樣品制備

分別精密稱取一定量的磺胺多辛及替格瑞洛待測樣品，置于同一離心管，加入0.5 mL的CD3OD，振蕩溶解、渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至5 mm NMR樣品管中。

1.3 NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理

通過分析溶劑、NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)，包括延遲時(shí)間（1）、采樣次數(shù)（）、脈沖翻轉(zhuǎn)角（），及圖譜處理技術(shù)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響（后文將給出具體的實(shí)驗(yàn)參數(shù)及其對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響分析），本文最終確定的NMR檢測方案為以CD3OD為溶劑，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)，測試條件如下：譜寬為3 511.5 Hz（譜儀對應(yīng)的質(zhì)子共振頻率為300.1 MHz時(shí)）、中心頻率為1 470.6 Hz（譜儀對應(yīng)的質(zhì)子共振頻率為300.1 MHz時(shí)）、30?、時(shí)間域數(shù)據(jù)點(diǎn)為32 k，測定溫度為308 K，延遲時(shí)間為10 s，為16．每份樣品平行測定5次，取平均值．采用線寬因子為0.3 Hz的窗函數(shù)對原始的自由感應(yīng)衰減（Free Induction Decay，F(xiàn)ID）信號進(jìn)行傅里葉變換得到頻域譜，然后對譜圖進(jìn)行手動相位和基線校正，以及化學(xué)位移定標(biāo)處理．

1.4 替格瑞洛含量的測定

采用(1)式計(jì)算待測樣品替格瑞洛樣品的含量：

I為替格瑞洛待測樣品定量峰的積分面積，IS為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積；N和IS分別為替格瑞洛待測樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰包含的質(zhì)子數(shù)（N= 3，IS= 5）；M和IS分別為替格瑞洛和磺胺多辛的相對分子質(zhì)量（M= 522.57，IS= 310.33）；m和IS分別為替格瑞洛待測樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的稱樣量；P和IS分別為替格瑞洛和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（IS= 98.0%）．

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的確定

2.1.1 溶劑的選擇

合適的溶劑除了對樣品和內(nèi)標(biāo)均有良好的溶解性外，其殘留的信號峰應(yīng)不干擾所分析樣品的信號峰．替格瑞洛在氯仿、二甲亞砜及甲醇中溶解較好，在水中微溶．但經(jīng)過試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶劑為氯仿和二甲亞砜時(shí)，替格瑞洛某些質(zhì)子的NMR信號呈現(xiàn)為兩組峰，影響定量的準(zhǔn)確性；而當(dāng)溶劑為CD3OD時(shí)，上述現(xiàn)象會隨著探頭溫度的升高而消失．而且內(nèi)標(biāo)磺胺多辛在甲醇中也較易溶解．因此本文最終確定溶劑為CD3OD、測試溫度為308 K．

2.1.2 NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)的選擇

2.1.2.11的選擇

在QNMR實(shí)驗(yàn)中，1必須設(shè)定的足夠長（≥51）[15]，才能使原子核完全弛豫，進(jìn)而確保被積分的信號強(qiáng)度與原子核數(shù)目呈正比．為考量1對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對同一待測樣品，我們分別將1設(shè)置為2 s、5 s、10 s、20 s和40 s．結(jié)果表明，當(dāng)1≥10 s后，待測樣品及內(nèi)標(biāo)的定量峰的積分面積不再變化．為同時(shí)滿足1≥51，且節(jié)省采樣時(shí)間，本文選擇1為10 s．

2.1.2.2的選擇

的大小直接影響NMR信號的信噪比（Signal to Noise Ratio，/）：越大，信噪比越高，定量越準(zhǔn)確；反之，則會影響定量的準(zhǔn)確性．對于QNMR，一般要求/≥ 250[16]．但越大，采樣時(shí)間也越長．為考量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對同一待測樣品，我們分別將設(shè)定為2、4、8、16、32和64．結(jié)果表明，當(dāng)≥16時(shí)，待測樣品及內(nèi)標(biāo)NMR定量峰的信噪比已滿足定量分析的要求，為節(jié)省采樣時(shí)間，本文選擇為16．

2.1.2.3的選擇

為考量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對同一待測樣品，我們對設(shè)置為10?~90?范圍，間隔為10?，對樣品與內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積之比進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，當(dāng)≥ 20?時(shí)，樣品與內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積之比已無明顯變化，定量峰信噪比滿足定量要求．當(dāng)= 30?時(shí)，實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定，所需延遲時(shí)間較少，故選擇= 30?作為實(shí)驗(yàn)的脈沖角度．

2.1.3 圖譜處理技術(shù)

NMR圖譜的正確處理可以提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度．采集到樣品的自由感應(yīng)衰減（Free Induction Decay，F(xiàn)ID）信號后，需首先利用傅里葉變換將時(shí)域譜變換為頻域譜。較大的線寬因子可以提高信號的信噪比，但是也會使得臨近信號分辨率下降[15]．綜合考慮，本文采用線寬因子為0.3 Hz的窗函數(shù)對原始的FID信號進(jìn)行傅里葉變換得到頻域譜．然后，對NMR圖譜的后處理包括相位和基線校正、化學(xué)位移定標(biāo)，以及定量峰積分．相位和基線校正的質(zhì)量會顯著影響積分面積，進(jìn)而影響定量的準(zhǔn)確性．在 QNMR 實(shí)驗(yàn)中，最理想的相位校正方式是經(jīng)驗(yàn)豐富的操作者進(jìn)行手動相位校正．基線校正有多種方法，包括多項(xiàng)式函數(shù)法、sine 函數(shù)法、指數(shù)函數(shù)法、三次樣條差值法、分段校正法等．其中多項(xiàng)式函數(shù)法易于操作、直觀簡單，應(yīng)用較多；而且手動校正的效果明顯優(yōu)于自動校正．正確進(jìn)行相位和基線校正、準(zhǔn)確進(jìn)行化學(xué)位移定標(biāo)之后，即可對所選的定量峰進(jìn)行積分．一般而言，為使積分面積的準(zhǔn)確度達(dá)到99%，積分范圍應(yīng)為峰寬的32倍[17]．本文嚴(yán)格按照圖譜處理技術(shù)的要求對NMR圖譜進(jìn)行處理，以得到準(zhǔn)確的結(jié)果．

2.1.4 內(nèi)標(biāo)及定量峰的選擇

理想的內(nèi)標(biāo)應(yīng)滿足以下條件：內(nèi)標(biāo)的定量峰與待測樣品的定量峰分離良好，易溶于測試溶劑，不與待測樣品相互作用，分子量與待測樣品接近，等等．替格瑞洛的1H NMR譜圖（圖2）顯示其在高場區(qū)H0.5~5.5和低場區(qū)H6.8~7.7信號較為密集，因此，可選擇在低場區(qū)（H5.5~6.8和H7.7~8.5）出現(xiàn)信號的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)．綜合考慮NMR圖譜特征、所用溶劑，參照文獻(xiàn)[18]以及本課題組的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)：磺胺多辛在H5.5~6.8和H7.7~8.5 區(qū)域峰型簡單、與樣品信號無重疊；性質(zhì)穩(wěn)定；分子量較大，與替格瑞洛分子量之比約為1:2；作為內(nèi)標(biāo)物稱樣量與樣品稱樣量近似，可減少稱樣量誤差；溶解性良好．因此，本文選擇磺胺多辛作為內(nèi)標(biāo)物．而鹽酸吉西他濱在甲醇中溶解性較差，不宜作為內(nèi)標(biāo)．

待測樣品及內(nèi)標(biāo)的定量峰均應(yīng)選擇不受其他信號干擾的孤立峰．若化合物中多個信號均符合上述條件，最好采用其積分面積之和，以減小誤差．處于不同化學(xué)環(huán)境的質(zhì)子的NMR弛豫時(shí)間不同，在 QNMR 實(shí)驗(yàn)中，待測樣品和內(nèi)標(biāo)最好選擇處于相似化學(xué)環(huán)境的質(zhì)子作為定量峰．由圖2可知，替格瑞洛位于H7.14和H7.04的信號盡管裂分為多重峰，但是仍相對獨(dú)立，而且與磺胺多辛位于H8.04、H7.73和H6.54的信號均無重合，因此本文選定H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s）為替格瑞洛待測樣品的定量峰，H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的定量峰．為驗(yàn)證選用替格瑞洛中多重質(zhì)子峰做定量的影響，我們進(jìn)一步做了19F NMR定量實(shí)驗(yàn)，其測定結(jié)果為替格瑞洛含量是99.3%。在95%的置信水平時(shí)，結(jié)果與1H NMR結(jié)果相比較沒有顯著性差異．

2.2 替格瑞洛待測樣品的含量測定

通過上述分析，本文最終確定的NMR實(shí)驗(yàn)條件如1.3節(jié)所述．替格瑞洛待測樣品1H NMR譜中位于H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s）的信號作為其定量峰，磺胺多辛內(nèi)標(biāo)1H NMR譜中位于H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）的信號作為其定量峰．并按照(1)式計(jì)算待測樣品中替格瑞洛的含量：I為替格瑞洛待測樣品的1H NMR譜中位于H7.14和H7.04的信號的積分面積之和，IS為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)1H NMR譜中位于H8.04、H7.73和H6.54的信號的積分面積之和；N和IS分別為替格瑞洛待測樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰包含的質(zhì)子數(shù)（N= 3，IS= 5）．

測定供試品的結(jié)果如表1所示，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)，含量均值為99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，）為0.20%．

表1 替格瑞洛含量測定結(jié)果

目前，國際上尚未發(fā)布關(guān)于NMR定量分析方法建立與驗(yàn)證的相關(guān)技術(shù)規(guī)范，參照人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（International Conference on Harmonization，ICH）[19]的指導(dǎo)原則和相關(guān)文獻(xiàn)[20]，我們對該方法的線性范圍、精密度、穩(wěn)定性和耐用性進(jìn)行了驗(yàn)證．

2.2.1 線性范圍的測定

保持內(nèi)標(biāo)質(zhì)量不變，使替格瑞洛待測樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量之比在0.8:1~1.2:1范圍內(nèi)變化，精密稱取內(nèi)標(biāo)和替格瑞洛樣品適量于離心管中．按照1.2節(jié)所述配制5份系列溶液，依據(jù)1.3節(jié)所述進(jìn)行NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理，以替格瑞洛待測樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的物質(zhì)的量比為橫坐標(biāo)，其單位質(zhì)子數(shù)的積分面積（定量峰積分面積之和除以所用定量質(zhì)子數(shù)）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：=1.053- 0.081（= 0.996，=5），表明在替格瑞洛待測樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量之比在0.8:1~1.2:1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（具體結(jié)果見表2）．

表2 線性范圍測定

2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密稱取磺胺多辛內(nèi)標(biāo)和替格瑞洛待測樣品適量于離心管中，平行制備6份樣品，按照1.3節(jié)所述于不同天進(jìn)行1H NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理，每份樣品平行測定5次，按照(1)式計(jì)算替格瑞洛含量，考察該方法的日內(nèi)精密度及日間精密度．結(jié)果表明，第一天和第二天測得替格瑞洛含量分別為99.1%、99.4%，分別為0.08%、0.10%（=6）；不同天測得樣品中替格瑞洛含量平均值為99.2%，為0.17%（=6），表明該方法的日內(nèi)及日間精密度均良好，具體結(jié)果見表3．

表3 日內(nèi)及日間精密度的測定

2.2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一待測樣品溶液分別在一天內(nèi)的第0、6、12和24 h進(jìn)行NMR實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示待測樣品中替格瑞洛與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的峰面積之比的為0.09%（=4）．表明待測樣品的CD3OD溶液室溫放置24 h穩(wěn)定．

2.2.4 耐用性實(shí)驗(yàn)

耐用性系指當(dāng)測試條件有微小變動時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度．本文主要考察采樣次數(shù)、溫度及內(nèi)標(biāo)的量變化對該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，按1.2節(jié)所述配制樣品，在采樣次數(shù)為12、16、20，測試溫度為308 K、313 K，內(nèi)標(biāo)稱樣量變化范圍小于1 mg實(shí)驗(yàn)條件下分別采集1H NMR譜圖．結(jié)果表明，在采樣次數(shù)為12~20范圍內(nèi)變化時(shí)，采樣次數(shù)對測定結(jié)果的影響較小，待測樣品中替格瑞洛含量測定值的為0.20%；測試溫度在308~313 K的范圍變化時(shí)，待測樣品中替格瑞洛含量測定值的為0.16%；當(dāng)內(nèi)標(biāo)稱樣量在(5.9±1) mg范圍內(nèi)變化時(shí)，待測樣品中替格瑞洛含量測定值的為0.19%：表明該方法耐用性較好．

3 結(jié)論

各國藥典尚未收載新藥替格瑞洛含量測定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而且相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道也較少，故對其研究具有重要意義．本文基于1H NMR技術(shù)，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)、CD3OD為溶劑，直接稱量法配制待測樣品溶液，在理想的實(shí)驗(yàn)條件下，選擇1H NMR譜中位于H7.14和H7.04的信號為替格瑞洛定量峰，位于H8.04、H7.73和H6.54的信號為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的定量峰，測得待測樣品中替格瑞洛含量為99.4%（= 0.20%）．雖然在本文所采用的原料藥及內(nèi)標(biāo)質(zhì)量較大（均為毫克級），但是提高NMR譜儀磁場強(qiáng)度或者采用超低溫探頭等方法均可以大大降低所需的樣品量．本文所建立的方法操作簡便、快速準(zhǔn)確、不破壞樣品，為替格瑞洛研發(fā)過程中的含量測定提供了一種新的手段，也為其質(zhì)量控制研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)．

[1] LIANG D W, DONG J H. Ticagrelor[J]. Chin J Med Chem, 2011, 21(6): 509-510.

梁大偉, 董金華. 替格瑞洛[J]. 中國藥物化學(xué)雜志, 2011, 21(6): 509-510.

[2] JAMES S, AKERBLOM A, CANNON C P, et al. Comparison of ticagrelor, the first reversible oral P2Y 12 receptor antagonist, with clopidogrel in patients with acute coronary syndromes: rationale, design, and baseline characteristics of the PLATelet inhibition and patient outcomes (PLATO) trial[J]. Am Heart J, 2009, 157(4): 599-605.

[3] YANG X W, ZHANG J Y, YI F, et al. Effect of ticagrelor on patients undergoing percutaneous coronary intervention with acute coronary syndrome[J]. Chin J Clinicians, 2013, 7(19): 8696-8670.

楊曉偉, 張君毅, 易甫, 等. 替格瑞洛對急性冠狀動脈綜合征擇期介入治療患者近中期療效觀察[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志, 2013, 7(19): 8696-8670.

[4] MA Y Y, WANG Y X, XU B G, et al. Short term clinical efficacy and safety of ticagrelor in patients received percutaneous coronary intervention[J]. Chin J Intervent Cardiol, 2014 (6): 380-383.

馬穎艷, 王艷霞, 徐白鴿, 等. 替格瑞洛用于經(jīng)皮冠狀動脈介入治療術(shù)后患者抗血小板治療短期內(nèi)的有效性和安全性研究[J]. 中國介入心臟病學(xué)雜志, 2014 (6): 380-383.

[5] GURBEL P A, BLIDEN K P, BUTLER K, et al. Randomized double-blind assessment of the ONSET and OFFSET of the antiplatelet effects of ticagrelor versus clopidogrel in patients with stable coronary artery disease[J]. Circulation, 2009, 120(25): 2577-2585.

[6] ZHU Y H, JIA G L, ZHOU M, et al. Clinical effects of ticagrelor in 41 Chinese acute coronary syndrome patients[J]. Chin J Intervent Cardiol, 2013, 21(6): 374-375.

朱永宏, 賈國良, 周妙, 等. 替格瑞洛治療41例急性冠狀動脈綜合征患者的臨床療效[J]. 中國介入心臟病學(xué)雜志, 2013, 21(6): 374-375.

[7] TENG R, OLIVER S, HAYES M A, et al. Absorption, distribution, metabolism, and excretion of ticagrelor in healthy subjects[J]. Drug Metab Dispos, 2010, 38(9): 1514-1521.

[8] SILLEN H, COOK M, DAVIS P. Determination of ticagrelor and two metabolites in plasma samples by liquid chromatography and mass spectrometry[J]. J Chromatogr B, 2010, 878(25): 2299-2306.

[9] HUANG P, GAO L, SIMA L, et al. The method improvement of determination of tetracycline tablets by HPLC[J]. Northwest Pharml J, 2014, 29(3): 255-257.

黃萍, 高林, 司馬磊, 等. 高效液相色譜法測定四環(huán)素片含量的方法改進(jìn)[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2014, 29(3): 255-257.

[10] HU M, HU C Q, LIU W Y. Determination of drug reference substance content by1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy[J]. Chinese J Anal Chem, 2004, 32(4): 451-455.

胡敏, 胡昌勤, 劉文英. 核磁共振波譜法測定藥物基準(zhǔn)物質(zhì)的絕對含量[J]. 分析化學(xué), 2004, 32 (4): 451-455.

[11] GUO S Q, LIU M K, YU S, et al. A quantitative NMR method to analyze vitamin B1, vitamin B2, nicotinamide and calcium pantothenate contents in compound vitamin B tablets [J]. Chinese J Magn Reson, 2016, 33(3): 442-451.

郭強(qiáng)勝, 劉明珂, 禹珊, 等. 定量核磁共振法同時(shí)測定復(fù)合維生素B片中B1、B2、煙酰胺和泛酸鈣[J]. 波譜學(xué)雜志, 2016, 33(3): 442-451.

[12] ZHANG M, ZHAI G Q, LI G Y, et al. An auto-processing algorithm for liver fat quantification[J]. Chinese J Magn Reson, 2018, 35(4): 427-439.

張苗, 翟國強(qiáng), 李改英, 等. 定量肝臟脂肪的波譜自動后處理算法[J]. 波譜學(xué)雜志, 2018, 35(4): 427-439.

[13] FLORES I S, GODINHO M S, DE OLIVEIRA A E, et al. Discrimination of biodiesel blends with1H NMR spectroscopy and principal component analyses[J]. Fuel, 2012, 99: 40-44.

[14] ZHANG F F, JIANG M H, SUN L L, et al. Quantitative determination of sitafloxacin hydrate by proton nuclear magnetic resonance (1H NMR)[J]. Northwest Pharml J, 2015, 30(2):137-141.張芬芬, 蔣孟虹, 孫林林, 等. 核磁共振氫譜法(1H NMR)測定西他沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2015, 30(2):137-141.

[15] HOLZGRABE U. Quantitative NMR spectroscopy in pharmaceutical applications[J]. J Prog Nucl Magn Reson Spectrosc, 2010, 57(2): 229-240.

[16] HOLZGRABE U, DEUBNER R, SCHOLLMAYER C, et al. Quantitative NMR spectroscopy-applications in drug analysis[J]. J Pharm Biomed Anal, 2005, 38(5): 806-812.

[17] RABENSTEIN, D L, KEIRE, D A, POPOV, A I, et al. Practical spectroscopy[M]. New York: Marcel Dekker Inc., 1991: 323-369.

[18] BEKIROGLU S, MYRBERG O, ?STMAN K, et al. Validation of a quantitative NMR method for suspected counterfeit products exempli?ed on determination of benzethonium chloride in grapefruit seed extracts [J]. J Pharm Biomed Anal, 2008, 47 (4/5): 958-961.

[19] ICH EXPERT WORKING GROUP. Validation of analytical procedures: Text and methodology Q2 (R1)[M]//ICH Harmonized Tripartite Guidelines. 2005: 1-13.

[20] GADAPE H H, PARIKH K S. Quantitative determination and validation of metformin hydrochloride in pharmaceutical using quantitative nuclear magnetic resonance spectroscopy[J]. J Chem, 2011, 8(2): 767-781.

A Proton Nuclear Magnetic Resonance Method for Quantitative Analysis of Ticagrelor

-1，-2，1，1*

1. Research Center for Analysis and Measurement, Donghua University, Shanghai 201620, China; 2. Pharmaceutical Research Institute, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China

A novel proton nuclear magnetic resonance (1H NMR) method for determining the absolute content of ticagrelor was proposed. The ideal spectra were obtained on a Bruker Avance-300 spectrometer with deuterated methanol (CD3OD) as the solvent and sulfadoxin as the internal standard. The ticagrelor signals atH7.14 (2H, m) andH7.04 (1H, s), as well as those of sulfadoxin atH8.04 (1H, s),H7.73 (2H, d) andH6.54 (2H, d), were selected for quantitative analysis. The detection conditions were as following: probe temperature 308 K, spectrum width 3 511.5 Hz, center frequency 1 470.6 Hz, pulse angle30?, delay time (1) 10 s, number of scans 16 and line broadening 0.3 Hz. The signals from ticagrelor and internal standard sulfadoxin showed good separation, precision, reproducibility, and wide linearity ranges with=1.053-0.081 (=0.996,=5). The content of ticagrelor was estimated to be 99.4% (=0.20%). This method was proven simple, accurate and rapid.

proton nuclear magnetic resonance (1H NMR), ticagrelor, content determination

O657.61；O482.53

A

10.11938/cjmr20192705

2019-01-03;

2019-04-08

* Tel: 021-67792192, E-mail: yangming@dhu.edu.cn.