高威芳 章禮平 朱鵬，2

（1. 寧波海洋研究院，寧波 315832；2. 寧波大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院，寧波 315832）

病原微生物是指可以侵犯人體與動(dòng)植物、引發(fā)感染甚至傳染現(xiàn)象的微生物，其中以細(xì)菌和病毒的危害性最大［1-4］。病原微生物威脅著人類公共衛(wèi)生系統(tǒng)，它們通過(guò)環(huán)境（空氣、水源）或食物進(jìn)入到動(dòng)物或人體，引發(fā)多種疾病，甚至爆發(fā)大面積、突然的疫情，嚴(yán)重威脅動(dòng)物和人類的生命，因此，對(duì)病原微生物的防控至關(guān)重要，而針對(duì)病原微生物的準(zhǔn)確快速的檢測(cè)技術(shù)是防控病原微生物的必要手段。

對(duì)病原微生物檢測(cè)的傳統(tǒng)策略主要是微生物培養(yǎng)及鑒定方法，操作繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。然而準(zhǔn)確的判定致病微生物來(lái)源具有時(shí)間關(guān)鍵性（Timecritical）［5-6］，若不能及時(shí)得出正確的結(jié)論，很可能錯(cuò)過(guò)最佳時(shí)機(jī)。這樣的延遲是造成發(fā)病率和死亡率上升的重要原因，不適當(dāng)?shù)目咕煼ㄒ驯蛔C明能使嚴(yán)重感染的存活率降低5 倍［5］。而且傳統(tǒng)培養(yǎng)法只適用于可培養(yǎng)的活菌，對(duì)于活的但非可培養(yǎng)（Viable but non-culturable，VBNC）狀態(tài)下的微生物或者對(duì)生長(zhǎng)培養(yǎng)環(huán)境非常挑剔的微生物無(wú)法進(jìn)行分離、培養(yǎng)和鑒定，這就需要其他的檢測(cè)手段。

核酸體外擴(kuò)增技術(shù)的發(fā)明補(bǔ)充了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的不足，相關(guān)技術(shù)被大量應(yīng)用于傳染病、食源性致病菌污染、環(huán)境污染、腫瘤的遺傳標(biāo)記物等分析中［7］。其中PCR 是比較成熟的一項(xiàng)技術(shù)，通過(guò)快速擴(kuò)增病原微生物中帶有其物種特異性信息的核酸，在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)就能將病原微生物鑒定出來(lái)。但是因?yàn)镻CR需要精密控溫的溫度循環(huán)器，該儀器的價(jià)格比較昂貴，又不夠便攜。而且，由于許多樣品中含有PCR反應(yīng)抑制物，使得PCR 檢測(cè)中通常對(duì)樣品準(zhǔn)備的要求比較嚴(yán)苛。以上這些因素使PCR 技術(shù)往往在實(shí)驗(yàn)室中使用，而不能在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中發(fā)揮作用。所以，不依賴熱循環(huán)儀的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)得到了廣泛關(guān)注。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)儀器要求簡(jiǎn)單，在保證較高的靈敏度和特異性基礎(chǔ)上，對(duì)樣品中抑制劑的抗性也較強(qiáng)，擴(kuò)增時(shí)間短，便于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)監(jiān)控，非常適用于病原微生物的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

通常，基于核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的快速檢測(cè)有3個(gè)關(guān)鍵步驟：核酸提取、等溫?cái)U(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)。核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)發(fā)展過(guò)程中需要解決一些問(wèn)題，比如如何進(jìn)一步簡(jiǎn)化并提高核酸提取效率、盡可能擺脫儀器約束以適應(yīng)條件有限的現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境、拓寬等溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)溫度范圍、提高反應(yīng)體系的穩(wěn)定性和對(duì)抑制劑的抗性、提高核酸擴(kuò)增效率、降低檢測(cè)成本等。為了解決這些困難，諸多研究者針對(duì)核酸擴(kuò)增技術(shù)的3 個(gè)關(guān)鍵步驟進(jìn)行了優(yōu)化與改進(jìn)，使該類技術(shù)在準(zhǔn)確度、靈敏度、便攜性等方面的優(yōu)勢(shì)更加突出，促進(jìn)核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的科學(xué)、快速發(fā)展。本文分別從這3 個(gè)環(huán)節(jié)出發(fā)，詳細(xì)闡述基于等溫?cái)U(kuò)增的核酸快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，介紹本課題組研究涉及到的兩項(xiàng)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）和重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（Recombinase polymerase amplification，RPA），主要關(guān)注其在病原微生物快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用研究進(jìn)展，并結(jié)合最新研究成果，對(duì)核酸快速檢測(cè)技術(shù)未來(lái)發(fā)展進(jìn)行思考和展望，以期對(duì)相關(guān)研究起到推動(dòng)作用。

1 核酸快速提取技術(shù)研究

核酸提取是核酸擴(kuò)增技術(shù)中的關(guān)鍵步驟，但因?yàn)閺纳飿悠分刑崛『怂岬膶?shí)驗(yàn)室方法通常比較繁瑣，其在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的使用常受到限制。研究者試圖尋找一種簡(jiǎn)便、快速、高效、低耗能的核酸提取方法。

常用的固相提取試劑盒快速提取核酸的原理是在離液序列高的環(huán)境（Chaotropic agents）下［8］將核酸結(jié)合在固相二氧化硅支持物上，雜質(zhì)則通過(guò)一系列的清洗和離心步驟去除，最后在低濃度鹽溶液中將核酸從支持物中洗脫下來(lái)。但是這樣的方法仍然依靠離心機(jī)。而且膜基質(zhì)上殘留的物質(zhì)（如乙醇、Chaotropic agents）可能抑制下游DNA的擴(kuò)增［9］。另外，磁珠法提取核酸采用經(jīng)過(guò)特殊修飾的磁珠進(jìn)行核酸的特異性捕捉和純化［10］，擺脫了對(duì)離心的依賴，通過(guò)外磁場(chǎng)作用分離固液相，防止在清洗和洗脫過(guò)程中核酸的流失，磁珠法能夠快速地提取核酸，約需10 min，而且不需要電器設(shè)備。因此，磁珠法通常適合基質(zhì)成分復(fù)雜的樣品檢測(cè)，如用于提取糞便標(biāo)本的核酸［11-12］，但因?yàn)榇胖樘幚沓杀据^高，限制了此方法在快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用。由此，研究者致力于篩選穩(wěn)定、靈敏的抗體的同時(shí)，需要考慮該方法在實(shí)際應(yīng)用中的成本問(wèn)題，或考慮尋找成本更加低廉的核酸提取材料，以滿足經(jīng)濟(jì)條件較差的地區(qū)的要求。

目前有一些關(guān)于膜法快速提取核酸的報(bào)道，包括氧化鋁膜［13］、基于二氧化硅的Fusion 5 號(hào) 膜［14-15］、基于纖維素膜的FTA 卡紙［16］。這些新的方法直接將核酸從膜上轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增體系中，省去核酸洗脫步驟，達(dá)到簡(jiǎn)化核酸純化的目的。盡管這樣，這些方法仍然因?yàn)閺?fù)雜的制造工藝或?qū)嶒?yàn)前處理而限制其在核酸快速檢測(cè)中得到更實(shí)際有效的應(yīng)用。然而纖維素膜便宜、易得、一次性且易修飾，顯然是非常理想的材料［17-19］。因此，如何發(fā)揮纖維素膜材料的自身優(yōu)勢(shì)，開(kāi)發(fā)既操作簡(jiǎn)便，又能與下游核酸擴(kuò)增反應(yīng)順利銜接的膜法核酸快速提取方法，是核酸快速提取技術(shù)發(fā)展中非常有意思的切入點(diǎn)。從這一點(diǎn)來(lái)看，纖維素膜材料的篩選、改性以及核酸提取試劑的優(yōu)化將是未來(lái)值得研究的方向。

2 核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)研究

核酸擴(kuò)增是關(guān)系到后續(xù)檢測(cè)準(zhǔn)確性的一個(gè)必要步驟，因?yàn)楹怂嶂笖?shù)擴(kuò)增步驟為結(jié)果判斷提供了足夠的核酸濃度，能夠避免由于樣品濃度過(guò)低或受到背景值影響較大而被判斷為假陰性的情況。近幾年，一些等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)已有商業(yè)化的產(chǎn)品，如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）［20］、重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）［21］、等溫指數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)（Isothermal exponential amplification reaction，EXPAR）［22］、依賴解旋酶恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)（Helicase-dependent amplification，HDA）［23］、 鏈置換擴(kuò)增（Strand displacement amplification，SDA）［24］、依 賴核酸序列型擴(kuò)增（Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）［25］、滾環(huán)擴(kuò)增（Rolling circle amplification，RCA）［26］等。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是核酸快速檢測(cè)發(fā)展中的后起之秀，兼具準(zhǔn)確性和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)適用性，在環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、疾病診斷等相關(guān)病原微生物快速檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

2.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用研究

在等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中，LAMP 是研究較多的一種方法，該方法最初由Notomi 等［20］設(shè)計(jì)，通過(guò)針對(duì)靶基因的6 個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)了4 種特異性引物，利用具鏈置換活性的BstDNA 聚合酶在恒溫條件下（60-65℃）高效（0.5-1 h）擴(kuò)增目標(biāo)DNA。如今，LAMP技術(shù)被廣泛應(yīng)用于食品過(guò)敏源、轉(zhuǎn)基因成分及致病菌的快速檢測(cè)中。不僅如此，結(jié)合了LAMP 的快速、高效與側(cè)向流層析試紙條（Lateral flow dipstick，LFD）的便攜、靈敏、結(jié)果可視化等優(yōu)勢(shì)，LAMPLFD 技術(shù)應(yīng)用于病原微生物快速檢測(cè)領(lǐng)域的相關(guān)研究已蔚然成風(fēng)（表1），檢測(cè)靈敏度能夠達(dá)到pg 數(shù)量級(jí)的DNA，甚至更微量，或者是單拷貝數(shù)和單菌落的病原微生物等。

本課題研究者主要關(guān)注LAMP 技術(shù)在有毒有害藻類快速檢測(cè)中的應(yīng)用（表1），在此基礎(chǔ)上拓寬LAMP 技術(shù)的應(yīng)用范圍將是未來(lái)的一個(gè)意義重大的研究方向。而且LAMP 已成為商檢行業(yè)推薦標(biāo)準(zhǔn)常用方法。根據(jù)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布的食品安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，LAMP 方法已被應(yīng)用于23 個(gè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)涉及20 種食源性致病菌的快速檢測(cè)［27-49］，這說(shuō)明LAMP 方法得到了制度層面的認(rèn)可。為了保護(hù)我國(guó)的食品安全，需要研究者開(kāi)發(fā)更多針對(duì)食源性致病菌的基于LAMP 方法的穩(wěn)定、高效、快速的適用于野外現(xiàn)場(chǎng)條件的快速檢測(cè)方法，以促進(jìn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)更快、更科學(xué)的制定。

2.2 核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與基因編輯技術(shù)結(jié)合的創(chuàng)新研究

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)是本實(shí)驗(yàn)室關(guān)注的另一種非常適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。RPA 于2006 年被發(fā)明出來(lái)，該方法反應(yīng)條件溫和（37-42℃），并且能在20 min 以內(nèi)完成核酸擴(kuò)增，檢測(cè)靈敏度卻可與LAMP 相媲美，針對(duì)RPA 的原理及其在醫(yī)療診斷、食品、農(nóng)業(yè)等方面的研究進(jìn)展我們已經(jīng)做過(guò)專題綜述［75］，本文將關(guān)注等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與基因編輯技術(shù)的創(chuàng)新結(jié)合，期望對(duì)核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的未來(lái)發(fā)展帶來(lái)啟發(fā)。

2.2.1 RPA 與基因編輯技術(shù)的結(jié)合 2017 年，美國(guó)麻省理工學(xué)院張鋒教授所在團(tuán)隊(duì)對(duì)RPA 技術(shù)的檢測(cè)能力做了全新詮釋，即等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與基因編輯技術(shù)的雙劍合璧為核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展創(chuàng)建了一個(gè)新的平臺(tái)。研究表明，RPA 能與一種被稱為CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）/ Cas13a 的基因編輯系統(tǒng)相結(jié)合，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到了attomolar 級(jí)（attomolar =10-3fmol），能夠識(shí)別單個(gè)堿基差異［76］。檢測(cè)的原理是通過(guò)RPA 或RT-RPA 實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸的指數(shù)擴(kuò)增，反轉(zhuǎn)錄成RNA，Cas13a 蛋白在crRNA 引導(dǎo)下定位目標(biāo)RNA，切割核酸，同時(shí)激活Cas13a 蛋白的附屬效應(yīng)（Collateral effect），切割帶有熒光和猝滅基團(tuán)標(biāo)記的二核苷酸（Di-nucleotide motifs），使反應(yīng)體系發(fā)出熒光，熒光信號(hào)被捕捉，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的檢測(cè)。研究者賦予這種結(jié)合一個(gè)新的名稱：SHERLOCK（Specific High Sensitivity Enzymatic Reporter UnLOCKing）（ 圖1-A），并將其應(yīng)用于寨卡病毒、登革熱病毒、病原菌、人類基因分型及游離DNA 癌變基因檢測(cè)，靈敏度和特異性都非常理想［76］。2018 年，張峰團(tuán)隊(duì)對(duì)SHERLOCK 進(jìn)行完善［77］，降低反應(yīng)體系引物濃度為240 nmol/L，開(kāi)發(fā)多重?zé)晒舛繖z測(cè)多個(gè)靶標(biāo)的方法，定量檢測(cè)限低至2 amol/L 的寨卡病毒RNA。

表1 LAMP 快速檢測(cè)在病原微生物及藻類中的應(yīng)用研究

同年，張峰團(tuán)隊(duì)與哈佛大學(xué)研究人員合作，進(jìn)一步推進(jìn)SHERLOCK 在病毒快速檢測(cè)方面的實(shí)際應(yīng)用。采用RPA 擴(kuò)增20 min 后，用CRISPR/ Cas13系統(tǒng)孵育1 h 即可完成寨卡病毒cDNA 的檢測(cè)，靈敏度達(dá)到0.9 amol/L，也就是說(shuō)能夠檢測(cè)到1 μL 里的單拷貝數(shù)的寨卡病毒［78］。同時(shí)，他們提出，通過(guò)加熱消除核酸酶但不對(duì)核酸進(jìn)行專門(mén)的提取純化 （Heating Unextracted Diagnostic Samples to Obliterate Nucleases，HUDSON）（圖1-B）也可以實(shí)現(xiàn)微生物核酸的高靈敏檢測(cè)，即通過(guò)加熱使病毒和核酸酶失活。研究者采用HUDSON 處理樣品，結(jié)合SHERLOCK，并通過(guò)試紙條顯色將檢測(cè)結(jié)果可視化，實(shí)現(xiàn)2 h 內(nèi)體液中寨卡病毒的RNA 快速檢測(cè)，全血、血清、唾液、尿液4 種不同基質(zhì)中的靈敏度分別為90 amol/L、90 amol/L、0.9 amol/L 和20 amol/L。

不僅如此，美國(guó)加利福尼亞大學(xué)Doudna 研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，Cas12a 也可以與RPA 結(jié)合（圖1-C），他們將這種結(jié)合起名為“DNA Endonuclease Targeted CRISPR Trans Reporter（DETECTR）”［79］。DETECTR 被用于HPV 病毒的快速檢測(cè)，靈敏度達(dá)到了attomolar 水平，特異性為≤ 7 個(gè)堿基。因?yàn)镃as12a-crRNA 能夠識(shí)別單鏈或雙鏈DNA，DETECTR不需要將底物轉(zhuǎn)換成RNA，省去了反轉(zhuǎn)錄步驟，因此，與SHERLOCK 相比，DETECTR 的操作更加簡(jiǎn)便。2018 年10 月，Doudna 團(tuán)隊(duì)將新發(fā)現(xiàn)的一種更小的Cas14 蛋白［80］與RPA 結(jié)合，進(jìn)行高靈敏度、高特異性的診斷和檢測(cè)方法研究。實(shí)驗(yàn)證明，Cas14-DETECTR 比Cas12-DETECTR 的特異性更高，能達(dá)到單堿基。作者將該方法應(yīng)用于SNP 基因分型，進(jìn)行核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在分子診斷領(lǐng)域的創(chuàng)新探究。

圖1 CRISPR 與RPA 結(jié)合［76，78-79］

2.2.2 EXPAR 與基因編輯技術(shù)的結(jié)合 華南師范大學(xué)周小明研究團(tuán)隊(duì)［81］利用Cas9 能作用于ssDNA的特性，將CRISPR/ Cas9 與等溫指數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)（EXPAR）結(jié)合（圖2），特異性高，檢測(cè)靈敏度為0.82 amol/L，并將此方法成功應(yīng)用于DNA 甲基化和單增李斯特菌mRNA 的快速檢測(cè)。

Cas12、Cas13、Cas14 及Cas9，都將等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的檢測(cè)水平提升到了更靈敏、更特異、更高效、更便捷的水平。因此，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與基因編輯技術(shù)的結(jié)合在檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展?jié)摿赡艹跸胂螅嚓P(guān)的應(yīng)用研究意義重大。期望這兩項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合在未來(lái)能夠被更加廣泛地應(yīng)用于病原微生物的快速檢測(cè)、SNP 檢測(cè)、腫瘤篩選、抗生素抗性篩選等領(lǐng)域中，發(fā)揮核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)最大的優(yōu)勢(shì)。

3 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)技術(shù)研究

核酸等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物有多種檢測(cè)方法，繁簡(jiǎn)程度不同，有研究者將其分為電化學(xué)檢測(cè)方法和光學(xué)檢測(cè)方法［82］。然而適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)場(chǎng)合的理想方法是操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器，甚至是不借助任何儀器，比如用肉眼就可以讀出結(jié)果，而且結(jié)果的呈現(xiàn)方式便于使用者進(jìn)行判斷。從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，基于比色和熒光的光學(xué)檢測(cè)方法更加適合配搭核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用［83］。

常用的核酸等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物的便攜的光學(xué)檢測(cè)方法有實(shí)時(shí)熒光法、可視化熒光染料法、免疫試紙條法、濁度法、比色法等。有學(xué)者對(duì)核酸等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)方法做了詳細(xì)的介紹［82，84］，這里不再贅述。這里將探討既廉價(jià)又方便的紙質(zhì)材料在核酸等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)中的應(yīng)用前景。

圖2 CAS-EXPAR 的原理圖［81］

紙質(zhì)材料作為最便宜的基質(zhì)，具有輕、薄、靈活、便于儲(chǔ)存、環(huán)保的特點(diǎn)，其白色的表面非常適用于比色檢測(cè)。而且紙能夠利用毛細(xì)作用推動(dòng)液體流動(dòng)，省去了對(duì)泵的需求。因此，紙質(zhì)材料是目前低廉核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)設(shè)備的最理想材料。側(cè)向流層析試紙條（LFD）是紙基檢測(cè)設(shè)備中深受歡迎、應(yīng)用頻繁的一種核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析工具［83］，非常適用于未經(jīng)專業(yè)訓(xùn)練的操作者使用，而且具有至少一年的保存期，這些優(yōu)點(diǎn)推動(dòng)了LFD 的商業(yè)化發(fā)展。但是直接使用試紙條檢測(cè)存在靈敏度不足的問(wèn)題。

解決這個(gè)難題的一種途徑是將紙基材料與其他工具結(jié)合起來(lái)，實(shí)現(xiàn)相得益彰的效果。事實(shí)上，這一方面的研究已取得進(jìn)展，比如聯(lián)合量子點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)妊娠測(cè)試中的人絨毛膜促性腺激素［85］，聯(lián)合生物傳感器檢測(cè)獸藥殘留［86］，以及聯(lián)合等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)致病菌［77，87-89］等。這些LFD 主要采用的是膠體金作為標(biāo)記物，借助核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速、便攜等優(yōu)勢(shì)，核酸等溫?cái)U(kuò)增-LFD 技術(shù)在病原微生物的檢測(cè)方面得到了快速發(fā)展，涉及醫(yī)療診斷、藥物測(cè)試以及食品質(zhì)量監(jiān)督等多個(gè)領(lǐng)域。由此可見(jiàn)，核酸等溫?cái)U(kuò)增-LFD 技術(shù)的創(chuàng)新開(kāi)發(fā)與研究將仍是未來(lái)快速檢測(cè)研究的熱點(diǎn)。

4 總結(jié)與展望

為了滿足核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)的需要，必須明確三大關(guān)鍵步驟相關(guān)技術(shù)上的短板，才能針對(duì)每一個(gè)環(huán)節(jié)選擇正確的材料和技術(shù)。隨著研究的發(fā)展，新的技術(shù)與材料擴(kuò)寬了研究思路，并且已有的研究表明，創(chuàng)新的嘗試有很多驚喜的發(fā)現(xiàn)和突破。比如紙基材料在核酸提取和檢測(cè)方面的創(chuàng)新增加了現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)設(shè)備的靈活性，為現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)提供更多的可能；隨著研究的不斷深入，核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)被廣泛應(yīng)用于多種微生物快速檢測(cè)，還有更多領(lǐng)域值得探究；以及核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與最新的基因編輯技術(shù)的結(jié)合，將檢測(cè)診斷技術(shù)的靶標(biāo)精準(zhǔn)性與檢測(cè)速度都提升到了更高的水平?？偠灾?，不論是從技術(shù)方面，還是材料改進(jìn)方面，已經(jīng)報(bào)道出來(lái)的研究都表明研究者正努力推動(dòng)著核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速發(fā)展，為中心實(shí)驗(yàn)室外的病原微生物快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用創(chuàng)造更多的便利，為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)更低的材料成本、更簡(jiǎn)化的操作步驟提供新思路。