紀(jì)小敏，李 建，李 萌，曹福祥，董旭杰

（1.中南林業(yè)科技大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410004； 2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

珙桐Davidia involucrata是珙桐科珙桐屬高大喬木，我國(guó)特有的珍稀孑遺植物，國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物[1]。珙桐種子休眠期長(zhǎng)，敗育率高，嚴(yán)重限制了其自然更新能力。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)在分析珙桐遺傳變異中得到應(yīng)用，Long 等[2]從珙桐葉片mRNA 轉(zhuǎn)錄本中開發(fā)基因的簡(jiǎn)單重復(fù)序列（SSRs），共獲得了30 411個(gè)基因的SSR 位點(diǎn)，12 208 對(duì)引物，該研究建立和完善了珙桐表達(dá)序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)和新SSR 標(biāo)記，為揭示珙桐物種的適應(yīng)性進(jìn)化、種群結(jié)構(gòu)和解決遺傳多樣性等問題提供依據(jù)[3-4]。珙桐中的關(guān)鍵基因也不斷被克隆鑒定，例如季紅春等[5]從珙桐cDNA 文庫(kù)中克隆獲得了一個(gè)未知基因DiRCI，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該基因編碼低溫誘導(dǎo)膜蛋白。劉美等[6]成功得到了珙桐熱休克蛋白18（HSP18）的基因序列，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，推測(cè)該基因可能與珙桐種子對(duì)不良環(huán)境的適應(yīng)性相關(guān)。戴鵬輝等[7]克隆了一個(gè)與花青素相關(guān)且編碼MYB 轉(zhuǎn)錄因子的DiMYB1基因，表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)DiMYB1在敗育種子中的表達(dá)量均高于正常種子，推測(cè)該基因可能在珙桐種子敗育過程中發(fā)揮重要作用。熊亞麗等[8]克隆了珙桐纖維素合酶CesA基因，表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)其在敗育種子中上調(diào)表達(dá)，推測(cè)該基因是調(diào)控纖維素合成的關(guān)鍵基因并且在珙桐敗育過程中起到調(diào)控作用。吳曉波等[9]克隆得到了珙桐內(nèi)果皮發(fā)育過程中差異表達(dá)基因DiCCoAOMT1， 功能分析顯示該基因可能是珙桐內(nèi)果皮木質(zhì)素合成的關(guān)鍵基因。Ren 等[10]以珙桐不同器官為材料，定量分析了珙桐不同器官中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因，研究結(jié)果表明苞片發(fā)育中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)門IP41、CAC和CSD，正常和敗育種子中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)镾AND、CAC和eIF，不同顏色的葉片中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)镾AND、18SrRNA和eIF。越來越多的基因被克隆鑒定，為從分子水平上研究珙桐提供了一定的理論支撐。

為研究珙桐種子發(fā)育的分子機(jī)制，本研究小組前期完成了珙桐轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，構(gòu)建了珙桐unigene 庫(kù)，從unigene 庫(kù)中發(fā)現(xiàn)大量與生殖發(fā)育相關(guān)的關(guān)鍵基因。其中篩選到一個(gè)編號(hào)為c37849.graph_c0的轉(zhuǎn)錄本，其在珙桐正常種子中高量表達(dá)，而在發(fā)育異常的種子中幾乎檢測(cè)不到表達(dá)。序列分析顯示，該基因是一個(gè)編碼CCCH 型鋅指蛋白的轉(zhuǎn)錄因子，同源序列比對(duì)結(jié)果表明該基因含有植物特有的RR-TZF 結(jié)構(gòu)域。

鋅指蛋白（Zinc finger protein）是由一段小分子肽鏈組成，可與Zn2+結(jié)合形成指形結(jié)構(gòu)，從而發(fā)揮特定功能的轉(zhuǎn)錄因子，最早發(fā)現(xiàn)于非洲爪蟾Xenopus laevis的卵母細(xì)胞中[11-12]，其指形結(jié)構(gòu)能與核酸、蛋白質(zhì)及一些小分子結(jié)合而行使調(diào)控功能。根據(jù)結(jié)構(gòu)域中半胱氨酸（Cys）及組氨酸（His）的數(shù)量與位置，鋅指蛋白可分為C2H2、C2HC、C2HC5、CCCH、C3HC4、C4、C4HC3、C6和C89個(gè)亞類[13]。其中CCCH 型鋅指蛋白在結(jié)構(gòu)上含有一個(gè)或多個(gè)由3 個(gè)半胱氨酸（Cys）和1 個(gè)組氨酸（His）按序排列組成的鋅指模體，這種結(jié)構(gòu)可以被歸納為：C-X6-14-C-X4-5-C-X3-H （X 代表任意氨基酸殘基）[14]。TZF 蛋白（Tandemn zinc finger protein）是CCCH 型鋅指蛋白的一個(gè)亞家族，具有C-X7-8-C-X5-C-X3-H-X18-C-X5-C-X4-C-X3-H 的結(jié)構(gòu)特征，如人類的hTTP、ZFP36L1 和ZFP36L2 均屬于此亞家族[15-16]。根據(jù)結(jié)構(gòu)域組成，TZF 蛋白可分為RR-TZF 與ANK-RR-TZF 2 種類型，其中RR-TZF 蛋白是其中最大的亞家族之一，是植物特有的一類TZF 蛋白，其主要特征是在TZF 結(jié)構(gòu)域上游有一段富含精氨酸的50 多個(gè)氨基酸的保守區(qū)域C-X5-H-X4-C-X3-H motif（RR）[17]。大多數(shù)植物RR-TZF 編碼的基因在不同組織的不同發(fā)育階段特異表達(dá)。例如，擬南芥Arabidopsis thaliana中的AtTZF4、AtTZF5、AtTZF6基因被發(fā)現(xiàn)參與種子萌發(fā)[18]；AtSZF1和AtSZF2可以增加擬南芥鹽脅迫抗性[19]。水稻Oryza sativa中的OsLIC基因參與了葉鞘夾角形成[20]；OsDOS能延緩葉片衰老[21]。 楊樹Populus deltoides中的PdC3H17基因影響次生細(xì)胞壁的形成[22]。棉花Gossypium hirsutum中的GhZFP1超量表達(dá)，可通過改變鈉鉀離子平衡以增強(qiáng)擬南芥抗鹽脅迫的能力[23]。本研究克隆了珙桐DiZF-CCCH1的cDNA 全長(zhǎng)序列，利用生物信息學(xué)方法對(duì)其編碼的氨基酸的理化性質(zhì)、保守功能域、磷酸化位點(diǎn)、信號(hào)肽結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)組成等進(jìn)行了分析預(yù)測(cè)，并且分析了該基因在不同組織器官和種子不同發(fā)育階段的表達(dá)模式，以期為珙桐DiZF-CCCH1基因的功能驗(yàn)證和調(diào)控機(jī)制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

珙桐小葉、大葉、葉柄、小苞片、大苞片、生長(zhǎng)點(diǎn)（頂端分生組織）、種子和花序等均取自湖南省張家界市桑植縣八大公山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)。7—11月為種子的采集時(shí)間，4—5月為其余組織樣品采集時(shí)間，每份樣品設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。將新鮮樣品采集后迅速置于液氮中速凍，然后放置-70 ℃冰箱中保存。

1.2 珙桐總RNA 的提取及cDNA 的合成

選取約100 mg 樣品，加入液氮快速研磨成粉，采用E.Z.N.A.TMPlant RNA 試劑盒提取總RNA，將各樣品的RNA 的濃度稀釋至合適的范圍內(nèi)后，采用Prime ScriptTM1stStrand cDNA Synthesis Kit 試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，產(chǎn)物于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 目標(biāo)基因的克隆

使 用Primer 5.0對(duì)目的基因ORF（Open reading frame，開放閱讀框）序列設(shè)計(jì)特異引物 DiZF-F/DiZF-R（引物序列見表1），分別在引物兩端加入BamHI 和SacI 酶切位點(diǎn)及保護(hù)位點(diǎn)。以珙桐種子cDNA 為模板進(jìn)行PCR 全長(zhǎng)擴(kuò)增，將克隆片段與pMD18-T 載體連接的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α 感受態(tài)中，將經(jīng)PCR 鑒定的陽(yáng)性單菌落送至鉑尚生物技術(shù)有限公司測(cè)序。

1.4 目標(biāo)基因生物信息學(xué)分析

使用Expasy-ProtParam tool、SMART 等在線軟件對(duì)NCBI 中的ORF Finder 工具預(yù)測(cè)的目標(biāo)基因編碼蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量、氨基酸組成、理論pI 值、親水性/疏水性等理化性質(zhì)進(jìn)行初步分析。使用在線工具Netphos 3.1 server 和TMHMM Server 2.0 等對(duì)目的蛋白的磷酸位點(diǎn)和跨膜區(qū)域等進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。使用軟件MEGA 7.0 對(duì)NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中與目標(biāo)基因編碼的氨基酸同源性較高物種的氨基酸序列進(jìn)行序聚類分析，并采用軟件SPOMA 與Swissmodel 對(duì)目標(biāo)基因編碼的氨基酸進(jìn)行二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析。

1.5 目標(biāo)基因表達(dá)模式分析

通過qRT-PCR 檢測(cè)目標(biāo)基因在珙桐不同組織部位以及種子不同發(fā)育階段中的表達(dá)情況，qRTPCR 反應(yīng)體系使用2×SYBR Green qPCR Master Mix（High ROX）（Biotool，US），引物序列見表1。選擇在珙桐各組織中穩(wěn)定表達(dá)的UBQ基因?yàn)閮?nèi)參基因[24]，每組樣品設(shè)置3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，通過2-ΔΔCT方法[25]分析數(shù)據(jù)。

表1 引物序列及擴(kuò)增信息Table 1 Primer sequences and amplification information

2 結(jié)果與分析

2.1 珙桐種子中差異表達(dá)基因的篩選

在珙桐轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選到21 個(gè)在正常種子和發(fā)育異常種子中差異表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄本，對(duì)它們的表達(dá)模式進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)除了c20843.graph_c1 和c39573.graph_c0 在發(fā)育異常種子中上調(diào)表達(dá)外，其余19 個(gè)轉(zhuǎn)錄本均下調(diào)表達(dá)，最明顯的是c37849.graph_c0 和c41816.graph_c0，其中編號(hào)為c37849.graph_c0 的轉(zhuǎn)錄本在正常種子中高量表達(dá)，而在發(fā)育異常的種子中表達(dá)量極低（圖1）。通過c37849.graph_c0 在轉(zhuǎn)錄組中的功能注釋及其序列在NCBI 中的比對(duì)結(jié)果，預(yù)測(cè)該基因編碼一個(gè)與種子發(fā)育相關(guān)的CCCH 型鋅指蛋白，將其選擇為本研究的目的基因。

2.2 目標(biāo)基因的克隆

分別以珙桐gDNA 和cDNA 為模板，通過PCR 擴(kuò)增得到了2 條長(zhǎng)度約為700 bp 的DNA 片段（圖2），測(cè)序發(fā)現(xiàn)gDNA 中擴(kuò)增獲得的片段與從cDNA 中擴(kuò)增獲得的片段序列完全相同。結(jié)果證明該基因無內(nèi)含子，ORF 長(zhǎng)度為711 bp，編碼236 個(gè)氨基酸。通過測(cè)序及BLAST 比對(duì)，確定該基因編碼一個(gè)CCCH 型鋅指蛋白，將其命名為DiZF-CCCH1。

2.3 生物信息學(xué)分析

2.3.1 蛋白質(zhì)氨基酸序列的預(yù)測(cè)

通過ProParam 在線軟件分析DiZF-CCCH1編碼蛋白的理化性質(zhì)，結(jié)果表明，DiZF-CCCH1編碼的蛋白分子質(zhì)量為26.74 kDa，理論等電點(diǎn)（PI）為9.02，包括3 656 個(gè)原子，分子式為C1184H1770N352O337S13。蛋白的脂肪指數(shù)為47.20，親水指數(shù)為-0.664，不穩(wěn)定指數(shù)為44.24，為不穩(wěn)定蛋白。在DiZF-CCCH1 蛋白中含有2 個(gè)CCCH 鋅指結(jié)構(gòu)，C-x7-C-x5-Cx3-H 和C-x5-C-x4-C-x3-H 位于83 ～133 處（圖3），由16 個(gè)氨基酸隔開，也就是TZF 結(jié)構(gòu)域（C-X7-8-C-X5-C-X3-H-X16-C-X5-C-X4-C-X3-H）。TZF 結(jié)構(gòu)域上游有一段富含精氨酸的50 多個(gè)氨基酸保守區(qū)域C-x5-H-x4-C-x3-H，位于48 ～63 處，并且含2 個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域SHDWTEC 和ARRRDPR，分 別 位 于53 ～59 和68 ～74 處，因此DiZF-CCCH1 屬于植物特有的RR-TZF 蛋白。

圖1 珙桐種子發(fā)育相關(guān)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)模式Fig.1 Expression patterns of selected transcripts in normal and aborted seeds of Davidia

圖2 DiZF-CCCH1 基因的克隆Fig.2 Cloning of DiZF-CCCH1gene

圖3 推導(dǎo)出的DiZF-CCCH1 蛋白的氨基酸序列Fig.3 Deduced amino acid sequence of DiZF-CCCH1

2.3.2 序列分析及聚類分析和亞細(xì)胞定位

利用軟件MEGA 7.0 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)DiZF-CCCH1 蛋白進(jìn)行序聚類分析，結(jié)果顯示，DiZF-CCCH1 與來源于甜橙Citrus sinensis的親緣關(guān)系最近，在一個(gè)支，與蓮Nelumbo nucifera、銀白楊Populus alba和毛果楊樹Populus trichocarpa親緣關(guān)系較近（圖4）。用TargetP 1.1 Server 對(duì)DiZF-CCCH 蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位，結(jié)果顯示，該蛋白定位于葉綠體的概率為0.134，定位于線粒體的概率為0.010，定位于細(xì)胞核或其他細(xì)胞器的概率為0.236，作為信號(hào)肽的概率為0.502。

2.3.3 磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測(cè)和跨膜區(qū)域的預(yù)測(cè)

通過Netphos 3.1 server（http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/）軟件預(yù)測(cè)了珙桐DiZF-CCCH1蛋白的磷酸化位點(diǎn)，結(jié)果（圖5A）顯示，DiZFCCCH1基因編碼的氨基酸序列可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有20 個(gè)，絲氨酸（Ser）可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有11 個(gè)，蘇氨酸（Thr）可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有5 個(gè)，酪氨酸（Tyr）可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有4 個(gè)。利用TMHMM Server 2.0 在線預(yù)測(cè)珙桐DiZF-CCCH1基因編碼的氨基酸序列的跨膜結(jié)構(gòu)域（圖5B），發(fā)現(xiàn)其不存在跨膜結(jié)構(gòu)，由此推測(cè)DiZF-CCCH1 蛋白不經(jīng)過跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。

圖4 DiZF-CCCH1 蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig.4 Phylogentic analysis of DiZF-CCCH1

圖5 DiZF-CCCH1 磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測(cè)和跨膜區(qū)域的預(yù)測(cè)Fig.5 Transmembrance domain prediction and phosphotylation site prediction of DiZF-CCCH1

2.3.4 二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)

通過SOPMA 對(duì)DiZF-CCCH1 的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果如圖6A所示。在其二維結(jié)構(gòu)組分中，α-螺旋（H）占13.50%，β-折疊（E）占17.30%，無規(guī)則卷曲（C）占68.78%，其他結(jié)構(gòu)占0.42%。無規(guī)則卷曲是該蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中最大的結(jié)構(gòu)元件。運(yùn) 用SWISS-MODEL（http://swissmodel.expasy.org/）在線軟件對(duì)DiZF-CCCH1 蛋白的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果如圖6B 所示。

2.4 珙桐DiZF-CCCH1 基因表達(dá)模式分析

使用qRT-PCR 在珙桐各組織中對(duì)DiZFCCCH1基因的表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果表明，DiZF-CCCH1基因在種子中的表達(dá)量顯著高于其他組織，在小葉、大葉、生長(zhǎng)點(diǎn)中表達(dá)量較低，在葉柄、小苞片、大苞片、花序和子房中表達(dá)量極低。種子中DiZF-CCCH1基因的表達(dá)量約為小葉的6 倍，約為大葉、生長(zhǎng)點(diǎn)的15 倍，約為葉柄、小苞片、大苞片、花序和子房中的80 倍（圖7）。對(duì)珙桐種子不同發(fā)育階段DiZF-CCCH1基因的表達(dá)量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，DiZF-CCCH1基因在種子發(fā)育各個(gè)時(shí)期中均有表達(dá)，其中在發(fā)育前期種子中的表達(dá)量最高，約為在發(fā)育中期和后期種子中的2 倍，暗示該基因可能主要在種子發(fā)育前期發(fā)揮功能。

圖6 DiZF-CCCH1 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)Fig.6 Prediction of secondary structure and three-dimensional structure of DiZF-CCCH1

圖7 DiZF-CCCH1 基因在不同組織中的表達(dá)水平Fig.7 Expression levels of DiZF-CCCH1gene in different tissues

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié) 論

本研究克隆了在珙桐種子中差異表達(dá)明顯的基因DiZF-CCCH1，序列分析發(fā)現(xiàn)該基因ORF 長(zhǎng)度為711 bp，編碼236 個(gè)氨基酸，無內(nèi)含子。分析DiZF-CCCH1編碼蛋白的理化性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)DiZFCCCH1編碼的蛋白分子質(zhì)量為26.74 kDa ，理論等電點(diǎn)（PI）為9.02，包括3 656 個(gè)原子，分子式為 C1184H1770N352O337S13。蛋白的脂肪指數(shù)為47.20，親水指數(shù)為-0.664，不穩(wěn)定指數(shù)為44.24，為不穩(wěn)定蛋白，屬于植物特有的RR-TZF 蛋白。DiZFCCCH1 蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明，DiZFCCCH1 與來源于甜橙Citrus sinensis的親緣關(guān)系最近。DiZF-CCCH1基因編碼的氨基酸序列可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有20 個(gè)且不存在跨膜結(jié)構(gòu)，無規(guī)則卷曲是DiZF-CCCH1 二級(jí)結(jié)構(gòu)中最大的結(jié)構(gòu)元件。qRT-PCR 結(jié)果表明，DiZF-CCCH1基因在種子中的表達(dá)量顯著高于其他組織，在其他組織中僅有微量表達(dá)，在種子發(fā)育前期的表達(dá)量最高約為發(fā)育中期和后期的2 倍，暗示該基因可能主要在種子發(fā)育前期發(fā)揮功能。

3.2 討 論

3.2.1 珙桐DiZF-CCCH1 結(jié)構(gòu)域分析

本研究從珙桐中克隆到一個(gè)編碼CCCH 型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子的基因DiZF-CCCH1，對(duì)該基因的核苷酸序列及其編碼產(chǎn)物進(jìn)行生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)DiZF-CCCH1基因編碼的蛋白含有2 個(gè)C-X6-14- C-X4-5-C-X3-H 結(jié)構(gòu)域，并且在這2 個(gè)CCCH 結(jié)構(gòu)域的上游還含有一段富含精氨酸的50 多個(gè)氨基酸保守區(qū)C-X5-H-X4-C-X3-H，因此認(rèn)為該蛋白屬于RR-TZF 型鋅指蛋白。RR-TZF 是植物特有的一類TZF 蛋白，其在玉米、水稻、擬南芥、楊樹等基因組分布廣泛，玉米基因組中有68 個(gè)編碼CCCH 鋅指結(jié)構(gòu)蛋白的基因，分為7 個(gè)亞家族，其中有12 個(gè)基因編碼RR-TZF 蛋白[26]；水稻中有67 個(gè)編碼TZF 蛋白的基因，分為8 個(gè)亞家族，其中有9 個(gè)基因編碼RR-TZF 蛋白[14]；擬南芥中有68 個(gè)編碼TZF 蛋白的基因，分為11 個(gè)亞家族，其中有11 個(gè)基因編碼 RR-TZF 蛋白[14]；楊樹含有91 個(gè)編碼TZF 蛋白的基因，分為13 個(gè)亞家族，其中有16 個(gè)結(jié)構(gòu)保守的RR-TZF 蛋白[27]。目前關(guān)于珙桐CCCH1基因及其功能還未見報(bào)道，因此對(duì)DiZFCCCH1功能的研究有利于豐富對(duì)CCCH 型鋅指蛋白功能的認(rèn)識(shí)。

3.2.2DiZF-CCCH1 在珙桐種子中的特異性表達(dá)

有研究發(fā)現(xiàn)，CCCH 型鋅指蛋白可參與植物種子發(fā)育，例如：擬南芥AtTZF4、AtTZF5、AtTZF6在種子中特異表達(dá)，并且參與種子的萌發(fā)，對(duì)種子的萌發(fā)調(diào)節(jié)至關(guān)重要[18]；擬南芥的PEI1是胚胎特異性轉(zhuǎn)錄因子，主要在胚胎頂端區(qū)域發(fā)揮作用，參與胚的發(fā)育[28]。本研究分析DiZF-CCCH1表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)其在種子發(fā)育前期的表達(dá)量最高，后期表達(dá)量降低，在其他組織中僅有微量表達(dá)，并且該基因是珙桐種子中差異表達(dá)顯著的一個(gè)基因，意味著該基因可能在種子發(fā)育中具有一定的功能。本研究對(duì)珙桐DiZF-CCCH1基因的克隆與表達(dá)分析，為研究該基因在珙桐種子發(fā)育過程中的功能鑒定奠定了基礎(chǔ)，對(duì)珙桐DiZF-CCCH1基因進(jìn)行的生物信息學(xué)分析，為后續(xù)驗(yàn)證DiZF-CCCH1基因的功能提供了參考，但該基因的功能及調(diào)控機(jī)制尚不明確。下一步將通過載體構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥，以期明確DiZF-CCCH1的具體功能。