梅小偉 歐陽(yáng)燕 譚濤

摘要：為了查明湖南省某豬場(chǎng)保育豬厭食、發(fā)燒、咳嗽、皮膚發(fā)紺致保育豬死亡的原因，采用臨床癥狀觀察、現(xiàn)場(chǎng)剖檢及實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)等方法，結(jié)果表明，送檢病死保育豬發(fā)病是由豬繁殖與呼吸綜合征類NADC-30毒株和HP-PRRSV毒株及豬圓環(huán)病毒2型混合感染，繼發(fā)細(xì)菌性疾病，應(yīng)采取相應(yīng)的治療及預(yù)防措施，降低該病造成的損失。

關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征;NADC-30;HP-PRRSV;PCV-2;繼發(fā)感染

中圖分類號(hào)：S858.28 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：1007-273X（2020）03-0005-02

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）主要以妊娠母豬發(fā)生明顯的繁殖障礙以及仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病和生長(zhǎng)遲緩為主要特征，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起一種嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病。尤其是2006年由高致病性PRRSV（HP-PRRSV）引發(fā)的豬“高熱病”給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了沉重的打擊。2009年、2011年和2015年P(guān)RRS在我國(guó)都出現(xiàn)不同程度的暴發(fā)。此外，2015年來(lái)自美國(guó)的NADC-30 like毒株在我國(guó)不同省份引發(fā)母豬嚴(yán)重的流產(chǎn)或早產(chǎn)[1]。豬圓環(huán)病毒病在我國(guó)廣泛流行，給豬場(chǎng)造成了嚴(yán)重?fù)p失，該病是由圓環(huán)病毒2型引起，主要表現(xiàn)為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，臨床上斷奶仔豬最易感（6～15周齡），發(fā)病率4%～30%，死亡率50%～90%[2]，其主要臨床癥狀為生長(zhǎng)發(fā)育緩慢、食欲減退、體重漸進(jìn)性下降、消瘦、貧血、黃疸、呼吸困難以及腹瀉等[3]。保育豬由于感染了豬藍(lán)耳病毒及圓環(huán)病毒等免疫抑制性疾病，往往容易繼發(fā)豬鏈球菌病、副豬嗜血桿菌病等細(xì)菌病，從而導(dǎo)致更大的損失。筆者對(duì)發(fā)病仔豬通過(guò)發(fā)病過(guò)程的了解、現(xiàn)場(chǎng)解剖及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)最終確診為豬繁殖與呼吸綜合征類NADC-30毒株和HP-PRRSV毒株及PCV-2共感染，繼發(fā)細(xì)菌性疾病，現(xiàn)將診斷過(guò)程報(bào)道如下。

1 ?發(fā)病情況

湖南省某豬場(chǎng)母豬存欄400頭左右，保育豬（40日齡）開(kāi)始發(fā)病，死亡率達(dá)20%以上。主要臨床癥狀為厭食、發(fā)燒、咳嗽、皮膚發(fā)紺、消瘦、關(guān)節(jié)腫大等癥狀。發(fā)病后該豬場(chǎng)用氟苯尼考、金霉素、土霉素等藥物拌料進(jìn)行治療，未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。

2 ?剖檢變化

現(xiàn)場(chǎng)剖檢病豬，主要表現(xiàn)為下頜淋巴結(jié)、肺門(mén)淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)明顯腫大，肺臟腫脹，呈褐紅色花斑狀。心包積液，腹腔積液，肝脾腫大與腹腔粘連。

3 ?實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 ?PRRSV的檢測(cè)

3.1.1 ?RNA的提取 ?采集病死豬的肺臟及淋巴結(jié)，取樣適量勻漿器研磨10 min后收集勻漿，12 000 r/min離心10 min，取上清液200 μL于DEPC處理過(guò)的1.5 mL EP管中，然后按照相關(guān)操作說(shuō)明提取病毒RNA，提取的RNA可小量分裝于-80 ℃低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

3.1.2 ?兩步法RT-PCR ?第一步：cDNA的合成。將表1體系與第一步反應(yīng)體系混勻，反應(yīng)條件為42 ℃ 30 min，99 ℃ 5 min，5 ℃ 5 min。合成好的cDNA立即用于第二步PCR反應(yīng)（表2）。

第二步：特異性DNA片段的合成。得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖電泳分離后，用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。結(jié)果病料中檢測(cè)出NADC-30 like PRRSV與HP-PRRSV共感染（表3、圖1）。

3.2 ?PCV-2的檢測(cè)

3.2.1 ?DNA的提取 ?采集病死豬的肺臟及淋巴結(jié)，適量取樣勻漿器研磨10 min后收集勻漿，12 000 r/min離心10 min，取上清液200 μL于DEPC處理過(guò)的1.5 mL EP管中，然后按照相關(guān)操作說(shuō)明提取病毒DNA，提取的DNA可小量分裝于-80 ℃低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2.2 ?PCR擴(kuò)增 ?得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖電泳分離后（表4），用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。結(jié)果病料中檢測(cè)出PCV-2（表5、圖2）。

4 ?診斷

根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)觀察、臨床剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診該豬場(chǎng)送檢患病豬為NADC-30 like PRRSV、HP-PRRSV與PCV-2共感染，同時(shí)繼發(fā)細(xì)菌性疾病。

5 ?措施

對(duì)已發(fā)病豬，每噸飼料添加替米考星2 000 g+磺胺氯噠嗪鈉400 g，連續(xù)飼喂15 d，降低因?yàn)槔^發(fā)細(xì)菌性疾病導(dǎo)致的死亡。由于該豬場(chǎng)出現(xiàn)了藍(lán)耳的2種毒株及與圓環(huán)的共感染，對(duì)未斷奶仔豬加強(qiáng)對(duì)圓環(huán)的免疫，建議疫苗加大劑量到2頭份，斷奶后每噸飼料立即添加替米考星2 000 g+磺胺氯噠嗪鈉400 g，連續(xù)飼喂15 d。

6 ?討論

當(dāng)前，豬藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒病仍然是困擾豬場(chǎng)的最主要的疾病，由于豬藍(lán)耳病病毒具有高度變異性，當(dāng)前的藍(lán)耳病毒疫苗接種對(duì)疫病的防控很難達(dá)到滿意的效果，且因?yàn)闉E用疫苗，導(dǎo)致我國(guó)部分豬場(chǎng)出現(xiàn)PRRSV不同毒株共感染的情況。另外從臨床檢測(cè)來(lái)看，NADC-30 like PRRSV有逐漸擴(kuò)大的趨勢(shì)。因此，豬場(chǎng)應(yīng)慎重選用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗免疫接種，田克恭[4]認(rèn)為對(duì)于疫情相對(duì)穩(wěn)定的豬場(chǎng)，一般不推薦使用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗。周磊等[5]認(rèn)為采用生物安全控制措施、閉群技術(shù)、后備母豬馴化、PRRSV檢測(cè)與淘汰等綜合措施，是防控 PRRS的明智之舉。PCV-2引起的豬圓環(huán)病毒病目前尚無(wú)有效的治療措施，而且PCV-2對(duì)外界抵抗力強(qiáng)，豬場(chǎng)凈化難度高。疫苗接種仍然是當(dāng)前防控該病的最有效的手段之一。

通過(guò)對(duì)該豬場(chǎng)的現(xiàn)場(chǎng)考察，解剖及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，最終找到了該豬場(chǎng)出現(xiàn)保育豬高死亡的原因，通過(guò)使用替米考星+磺胺氯噠嗪鈉的組合控制繼發(fā)感染，同時(shí)加強(qiáng)圓環(huán)疫苗的免疫，取得了顯著效果，下一批保育豬的死亡率明顯降低，不到5%。而對(duì)已發(fā)病豬使用該藥物組合，死亡率稍有降低，未有明顯改善，可能受圓環(huán)病毒的影響，導(dǎo)致發(fā)病豬死亡，也降低了機(jī)體的免疫力及抵抗力，因此在斷奶前一定要做好圓環(huán)疫苗的免疫工作。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張洪亮，張 ?晶，李 ?真，等.2016年我國(guó)部分地區(qū)類NADC30新亞群豬繁殖與呼吸綜合征病毒的遺傳變異分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，38（9）：675-680.

[2] 周緒斌，許秀梅，張馨玉.豬圓環(huán)病毒疫苗的研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2007，43（4）：47-49.

[3] 王忠田，楊漢春，郭 ?鑫.豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2004，40（3）：33-35.

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[5] 周 ?磊，楊漢春，姜 ?平，等.豬繁殖與呼吸綜合征綜合防控技術(shù)及應(yīng)用[J].中國(guó)畜牧雜志，2015，51（6）：62-67.