王燕 葉敏 高仁里

【摘 要】目的：研究p16和Ki67在宮頸脫落細(xì)胞中的表達(dá)和臨床意義。方法：在本院2019年1月至2019年4月收治的婦科病患者中選出1000例，均取宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行p16/Ki67雙染檢測(cè)。結(jié)果：隨著宮頸病變程度加重，p16/Ki67雙染陽(yáng)性率明顯提高，P<0.05，p16/Ki67單染陽(yáng)性率變化則無(wú)明顯規(guī)律，P>0.05;其中p16/Ki67在非典型鱗狀細(xì)胞（不能除外上皮內(nèi)高度病變）中細(xì)胞量少，提示有高度病變可能。結(jié)論：p16/Ki67雙染具體高度的敏感性和特異性，在宮頸高級(jí)別病變中陽(yáng)性率明顯高于低級(jí)別病變及正常細(xì)胞，二者聯(lián)合檢測(cè)可作為宮頸脫落細(xì)胞的輔助手段，與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用，早期篩查宮頸癌和癌前病變。

【關(guān)鍵詞】p16;Ki67;宮頸脫落細(xì)胞;陽(yáng)性率;宮頸癌;癌前病變

宮頸癌是發(fā)病率較高的女性生殖道腫瘤，嚴(yán)重危害女性的生命安全。特別是近幾年發(fā)病年齡趨于年輕化，越來(lái)越多的女性重視宮頸癌以及癌前病變的篩查，而在宮頸癌的篩查中，金標(biāo)準(zhǔn)的組織病理學(xué)檢查存在一定損傷，不利于廣泛應(yīng)用，為了及早發(fā)現(xiàn)及早治療，改善預(yù)后[1-2]。目前應(yīng)用最廣的便是新柏氏TCT細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)，但TCT檢測(cè)存在一定的誤差，靈敏度存在人為誤差，為了降低漏診率，近年來(lái)不少文獻(xiàn)報(bào)道指出抑癌基因（p16）、腫瘤增殖抗原（Ki67）與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，發(fā)現(xiàn)在宮頸癌前病變、鱗癌活檢石蠟包埋組織中存在p16、Ki67陽(yáng)性表達(dá)[3]。本研究探索p16和Ki67在宮頸脫落細(xì)胞中表達(dá)的意義，匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在本院婦產(chǎn)科2019年1月至2019年4月收治的婦科病患者中選出1000例，年齡23～71歲，平均（43.9±10.2）歲。

1.2 方法

對(duì)患者擴(kuò)陰后將宮頸刷插入陰道，于宮頸鱗柱交界順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，將取得的宮頸脫落細(xì)胞放入保存液中。然后將宮頸脫落細(xì)胞制成液基薄層涂片，配制PBS緩沖液和抗原修復(fù)液，然后使用p16/Ki-67檢測(cè)試劑盒進(jìn)行雙染檢測(cè)，操作流程為：抗原修復(fù)→繪制疏水圈→滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑→滴加p16/ki67一抗→滴加二抗→滴加顯色劑A→滴加顯色劑B→蘇木素復(fù)染→PBS返藍(lán)→晾片封片。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

p16/Ki67雙染陽(yáng)性：薄片中見(jiàn)1個(gè)或1個(gè)以上細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈紅色著色且同一細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕黃色或紅褐色著色。p16單染色陽(yáng)性：細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞核均呈紅色著色。Ki-67單染色陽(yáng)性：細(xì)胞核呈黃色或棕黃色著色，而細(xì)胞質(zhì)不著色。染色陰性：不著色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 21.0軟件檢驗(yàn)數(shù)據(jù)資料，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以率進(jìn)行描述，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1所示，隨著宮頸病變程度的加重，p16/Ki67雙染陽(yáng)性率也隨之提高，P<0.05;其中p16/Ki67在非典型鱗狀細(xì)胞（不能除外上皮內(nèi)高度病變）中細(xì)胞量少，p16/Ki67雙染的表達(dá)可以在非典型鱗狀細(xì)胞（不能除外上皮內(nèi)高度病變）中起到提示作用，減少漏診率，大大增加了TCT檢測(cè)的陽(yáng)性率。隨著宮頸病變程度加重，p16/Ki67單染陽(yáng)性率的變化不具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

p16基因是直接參與到細(xì)胞周期調(diào)控中的抑癌基因，其對(duì)細(xì)胞有絲分裂起到負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用[4]。在炎癥性宮頸病變或正常宮頸細(xì)胞中，p16呈陰性或弱陽(yáng)性，但是隨著宮頸病變程度的加重，p16表達(dá)也會(huì)隨之升高，故而p16可作為宮頸癌及癌前病變嚴(yán)重程度的判定依據(jù)之一。Ki67抗原早在1983年被發(fā)現(xiàn)，是目前較為肯定的核增殖標(biāo)識(shí)，其功能與細(xì)胞合成代謝有關(guān)，除了細(xì)胞G0期和G1早期外，其他各期均有Ki67抗原表達(dá)，在惡性腫瘤中呈高表達(dá)[5]。已有研究指出Ki67抗原與淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、頭頸腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤等的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)密切相關(guān)，可以作為診斷、療效預(yù)測(cè)的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示：隨著宮頸病變程度加重，p16/Ki67雙染陽(yáng)性率隨之提高，P<0.05，在宮頸高級(jí)別病變和低級(jí)別病變中，p16/Ki67雙染陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05;p16/Ki67雙染陽(yáng)性率與宮頸病變程度密切相關(guān)。當(dāng)p16和Ki67雙染色均為陽(yáng)性者說(shuō)明可能潛在高級(jí)別病變，這可以為臨床上患者的篩查項(xiàng)目進(jìn)行分流，對(duì)于雙染色陽(yáng)性者，可要求進(jìn)一步進(jìn)行陰道鏡檢查，以明確診斷。本研究結(jié)果顯示：隨著宮頸病變程度加重，p16/Ki67單染陽(yáng)性率變化不規(guī)律，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05;許多研究中，p16、Ki67在宮頸良性反應(yīng)性增生中也可表達(dá)，故而在宮頸病變中不宜單獨(dú)使用。

綜上所述，p16、Ki67在宮頸脫落細(xì)胞中的表達(dá)程度與宮頸鱗狀細(xì)胞病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，呈正相關(guān)，p16/Ki67聯(lián)合檢測(cè)可作為宮頸脫落細(xì)胞的輔助手段，與宮頸細(xì)胞學(xué)聯(lián)合應(yīng)用，在宮頸癌和癌前病變篩查中應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 王嬌，舒麗莎，陳書(shū)玲，等.P16、Ki67聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸脫落細(xì)胞中的診斷意義[J].中國(guó)婦幼保健，2016，31（10）：2176-2179.

[2] 張婷.P16、Ki67聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查用于宮頸脫落細(xì)胞中的診斷價(jià)值探究[J].現(xiàn)代診斷與治療，2018，29（18）：2912-2914.

[3] 張瑤，袁思梅，朱丹陽(yáng)，等.宮頸脫落細(xì)胞中P16、Ki67聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在意義不明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞診斷中的意義[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2018，30（01）：91-93.

[4] 黃平，張雪，陳光元，等.p16、Ki67、PHH3和HPV-L1在宮頸脫落細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué)，2016，27（21）：3464-3466.

[5] 雷蕾，葉斌，王西川.p16、p53和Ki67在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2014，11（04）：123-125.