章彥琳，沈荷美

(浙江杭康檢測技術(shù)有限公司，杭州 310011)

隨著農(nóng)業(yè)及農(nóng)業(yè)投入品的迅速發(fā)展，我國已成為全世界生產(chǎn)和使用農(nóng)藥最多的國家。據(jù)統(tǒng)計，農(nóng)業(yè)投入品如農(nóng)藥，在使用過程中，約80%未起到殺蟲作用，而隨著雨水、沉降等作用進入到土壤系統(tǒng)中。丙烯酸酯類農(nóng)藥主要通過作用于真菌的線粒體呼吸鏈中的細胞色素復合物，阻止電子傳遞進而起到殺蟲的作用，具有內(nèi)吸活性好、廣譜殺菌、調(diào)節(jié)植物生長等特點［1–6］。丙烯酸酯類農(nóng)藥非常容易溶解于水中，意味著它在環(huán)境中的流動性非常大，尤其對水生生物影響較大。因此加強土壤中丙烯酸酯類農(nóng)藥的監(jiān)測［7–10］，具有十分重要的現(xiàn)實意義。

土壤中農(nóng)藥殘留的提取、凈化方法主要有凝膠凈化色譜法、分散固相萃取法和加速溶劑萃取法等。國內(nèi)外部分學者進行了大量研究，余衛(wèi)娟、鄭健琨等采用凝膠滲透色譜法檢測土壤中阿特拉津等農(nóng)藥殘留［11–12］；孫明娜、李欣等研究了分散固相萃取提取法檢測土壤中酰胺類除草劑等農(nóng)藥殘留的方 法［13–14］；梅文泉、葛謙等研究了快速溶劑萃取法檢測土壤中戊唑醇等農(nóng)藥殘留的方法［15–16］；吳小春、王娜等研究了分散固相萃取法檢測土壤中氰氟草酯和雙草醚等農(nóng)藥殘留的方法［17–18］。凝膠凈化色譜法自動化程度高，但儀器價格昂貴，方法不便于推廣；分散固相萃取法提取速度快，實驗成本低，但處理步驟復雜，且提取率偏低導致檢測準確度偏低，不適用于土壤中極微量農(nóng)藥殘留的檢測；加速溶劑萃取法在一定的溫度、壓力條件下，采用有機溶劑萃取，實驗在密閉條件下進行，具有有機溶劑用量少、環(huán)境污染小、操作簡便、效率高等特點［9–11］。目前關(guān)于土壤中丙烯酸酯類農(nóng)藥殘留檢測的研究很少，筆者建立了一種加速溶劑萃取法提取土壤中的4 種丙烯酸酯類農(nóng)藥，用GC–MS／MS 法定性定量檢測的分析方法，實驗表明該方法具有操作簡單、準確度高、重復性好等優(yōu)點。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀：TQ 8040 型，日本島津科技有限公司；

加速溶劑萃取儀：Dionex ASE 300 型，美國熱電科技有限公司；

電子天平：AB135S 型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒科技有限公司；

嘧菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌酯標準溶液：濃度均為100 μg／mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研所；

丙酮、乙酸乙酯：色譜純，美國Tedia 試劑有限公司；

氦氣：純度不小于99.999%，浙江海天氣體有限責任公司；

氬氣：純度為99.999%，浙江海天氣體有限責任公司；

氟羅里硅土：13～15 μm，農(nóng)殘級，國藥集團上?；瘜W試劑廠。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：HP–5MS 毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司)；進樣口溫度：250℃；載氣：氦氣，流量為1.6 mL／min；進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 μL；程序升溫設(shè)置：初始溫度70℃，保持2 min，以20℃／min 升至200℃，保持8 min，再以15℃／min 升至280℃，保持5 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：EI 源；電離能量：70 eV；離子源溫度：230℃；接口溫度：260℃；碰撞氣：氬氣；溶劑延遲時間：2.5 min；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；定性、定量離子與保留時間列于表1。

表1 種丙烯酸酯類農(nóng)藥的保留時間、定性、定量離子

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品預處理

將采集到的土壤樣品除去根莖葉等雜物后自然風干，粉碎后過250 μm（60 目）篩備用。

1.3.2 樣品提取

稱取5.0 g 預處理后的樣品，加入2.5 g 左右的氟羅里硅土與樣品充分混勻后，放入加速溶劑萃取儀的33 mL 萃取小池中，按照表2 的萃取條件于加速溶劑萃取儀中萃取。收集全部提取液，于氮吹儀上吹至近干，用丙酮定容至1 mL，渦旋1 min 后，用0.45 μm 濾膜過濾。

表2 加速溶劑萃取儀萃取條件

1.4 標準儲備溶液配制

精密移取質(zhì)量濃度均為100 μg／mL 的嘧菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌酯標準溶液，用丙酮作溶劑，配制成嘧菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌酯質(zhì)量濃度均為10 μg／mL 的混合標準儲備溶液，置于2～8℃冷藏箱保存，備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取溶劑的選擇

萃取溶劑的選擇使用直接影響樣品的凈化效果和檢測結(jié)果的準確度。理想的溶劑既能對目標組分有良好的萃取率，又能有較低的共存物萃出率。分別試驗了乙腈、乙酸乙酯、丙酮等溶劑對4 種丙烯酸酯類萃取回收率的影響，結(jié)果見表3。

表3 不同溶劑萃取回收率

由表3 可知，乙腈和丙酮作為提取溶劑，回收率較低；乙酸乙酯萃取時，回收率較高；使用體積比為1∶1 的乙酸乙酯–丙酮溶液，4 種丙烯酸酯類的回收率最高。因此選擇體積比為1∶1 的乙酸乙酯–丙酮溶液作為萃取溶劑。

2.2 萃取溫度及提取時間的優(yōu)化

萃取溫度與提取時間直接影響最終目標物的萃取效率。為得到最佳的萃取溫度，測試了50～90℃溫度區(qū)間內(nèi)4 種丙烯酸酯類殘留的趨勢變化。研究發(fā)現(xiàn)隨著溫度的升高，各農(nóng)藥殘留萃取效率增加顯著，升溫70℃以后，萃取效率提高緩慢。因此確定70℃作為最佳萃取溫度。

于萃取儀中設(shè)置4，6，8 min 三個不同的靜態(tài)提取時間，保持其它參數(shù)不變，考察不同提取時間對4種丙烯酸酯類殘留的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提取6 min比提取4 min 各丙烯酸酯類殘留回收率均有較大的提升，而提取8 min，回收率未見明顯的提高。因此選擇6 min 作為最終靜態(tài)提取時間。

2.3 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

首先采用SCAN 全掃描方式確定嘧菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌酯農(nóng)藥的母離子和保留時間；對母離子進行再掃描，得到相應(yīng)的特征離子對，選擇響應(yīng)值高的一對離子對作為定量離子對，再選擇2 對離子對定性。離子對結(jié)合色譜保留時間定性及響應(yīng)高的離子對定量，使定性定量結(jié)果更加準確、可靠。初步設(shè)定MRM 掃描模式，對碰撞時間、碰撞電壓、離子比率等進行優(yōu)化，使三種農(nóng)殘的響應(yīng)值及靈敏度達到最優(yōu)狀態(tài)，最終確定采用MRM 方法。4 種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)見1.2 中的表1，標準譜圖見圖1。

2.4 線性方程、線性范圍及檢出限

圖1 4 種農(nóng)藥殘留標準色譜圖

吸取一定量的10 μg／mL 混合標準儲備溶液，配制成4 種農(nóng)藥質(zhì)量濃度均分別為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0，5.0 μg／mL 的系列標準工作溶液，按1.2 儀器工作條件進樣分析。以4 種丙烯酸酯類農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積響應(yīng)值為縱坐標，繪制工作曲線，以3 倍信號噪聲比(S／N)計算各農(nóng)藥的檢出限。計算得線性方程、回歸系數(shù)及檢出限見表4。

表4 4 種農(nóng)藥線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.5 加標回收與精密度試驗

在確定不含以上4 種丙烯酸酯類農(nóng)藥的土壤中，加入最終質(zhì)量濃度均分別為0.1，0.5，1.0 mg／kg的混合標準溶液進行加標回收試驗。每個加標點的樣品平行進樣6 次，考察儀器的精密度。加標回收與精密度試驗結(jié)果見表5。由表5 可以看出，4 種丙烯酸酯類農(nóng)藥的加標回收率良好，測定結(jié)果的相對標準偏差為2.49%～4.29%，符合分析測試的要求。

2.6 實際樣品的測定

采集本地區(qū)20 份土壤樣品，用該方法進行測定，結(jié)果表明，4 種丙烯酸酯類農(nóng)藥均未檢出。表明該地區(qū)目前未受到丙烯酸酯類農(nóng)藥的污染。

3 結(jié)語

建立了快速溶劑萃取–氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定土壤中的4 種丙烯酸酯類(嘧菌酯，嘧菌胺，苯氧菌胺，醚菌酯)殘留量的分析方法。該方法應(yīng)用于土壤中丙烯酸酯類檢測，具有樣品前處理簡單、靈敏度高、重復性好等優(yōu)點。該方法適用于土壤中極微量農(nóng)藥殘留的檢測，為國家標準建立提供技術(shù)參考，并為當?shù)剞r(nóng)業(yè)投入品的合理、正確使用提供技術(shù)依據(jù)。

表5 4 種農(nóng)藥加標回收與精密度試驗結(jié)果

化合物(mg·kg–1) 測得量／(mg·kg–1) 平均值／(mg·kg–1)加標量／ 平均回收率／%RSD／%0.1 0 0.0.0 8862 1 0 21，，00.0.0 8836 1 4 21，，00.0.0 8895 2 4 16， 0.085 40 00.4.4 6453 9 9，，00.4.4 8835 1 1，，00.4.4 3756 4 9， 0.465 091.4 00.9.9 8323 6 6，，00.9.9 7838 5 7，，00.9.9 5323 2 8， 0.960 7 00.0.0 8813 8 2 24，，00.0.0 8836 6 5 62，，00.0.0 8884 7 8 19， 0.084 80 00.4.4 7463 3 6，，00.4.4 9712 2 1，，00.4.4 5689 1 4， 0.468 492.2 00.9.9 9912 2 8，，00..997825 1 4，，00.9.9 6794 1 8， 0.980 9 00.0.0 8803 7 3 52，，00.0.0 8826 5 5 95，，00.0.0 8851 6 6 49， 0.083 40 00.4.4 8551 2 6，，00.4.4 9609 3 5，，00.4.4 7683 9 4， 0.473 292.6 00.9.9 8796 3 3，，00.9.9 9825 6 8，，01.9.0 7764 4 0， 0.999 1 00.0.0 8991 9 2 86，，00.0.0 8982 7 5 51，，00.0.0 8891 9 6 69， 0.089 00 00.4.4 6788 9 4，，00.4.4 7807 8 6，，00.4.4 2696 9 9， 0.467 194.6 00.9.9 4998 9 4，，00.9.9 7688 5 8，，00.9.9 5816 2 0， 0.972 1嘧菌酯0.5 3.34 1.0 0.1 嘧菌胺0.5 2.48 1.0 0.1 苯氧菌胺0.5 3.17 1.0 0.1 醚菌酯0.5 4.29 1.0

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