王麗芹 ，邢程 ，盧松巖

1.吉林省動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春 130062；2.吉林省磐石市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林磐石 132300

小鵝瘟，又稱鵝細(xì)小病毒感染，是由鵝細(xì)小病毒引起的一種急性或亞急性的敗血性傳染病[1]。主要經(jīng)消化道傳染，與病鵝直接接觸或接觸病鵝排泄物污染的場地、設(shè)備用具、飲水和飼料可感染。主要感染雛鵝和雛番鴨，雛雞和雛鴨等具有較強(qiáng)抵抗力[2]。1956年，方定一教授等人發(fā)現(xiàn)小鵝瘟，并于1961年成功分離病毒。此后，歐洲、亞洲等多個養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)達(dá)的國家相繼報道小鵝瘟流行，我國廣東、浙江、安徽、四川、內(nèi)蒙古、河北、吉林等多省份相繼報告小鵝瘟疫情，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重危害鵝養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康發(fā)展[3]。

2019年8月，吉林省磐石市某養(yǎng)鵝場引進(jìn)10日齡雛鵝5 000只，飼養(yǎng)至15日齡時，部分雛鵝精神萎靡，食量減少或不食，流漿液性鼻液，排灰白色水樣稀糞，個別出現(xiàn)抽搐、癱瘓等神經(jīng)癥狀，感染數(shù)量日益增多并不斷死亡。剖檢可見肝臟腫大、質(zhì)脆，小腸黏膜充血出血，腸腔內(nèi)有大量的纖維素性凝塊和碎片；未見小腸中下段明顯膨大，腸腔內(nèi)形成“臘腸狀”栓子等小鵝瘟典型病理變化。發(fā)病之初，養(yǎng)鵝場投放頭孢拉定進(jìn)行治療，癥狀無明顯改善。為進(jìn)一步明確病原，養(yǎng)鵝場采集病死雛鵝組織樣品進(jìn)行實驗室檢測。

1 檢測方法

1.1 材料及處理

采集病死雛鵝肝臟、脾臟、腸管等組織作為病料，1:5加入無菌PBS置入離心管，經(jīng)反復(fù)凍融后研磨制成細(xì)胞懸液，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑與儀器

無菌PBS，DNA提取試劑盒，PCR擴(kuò)增試劑盒，PCR產(chǎn)物回收試劑盒，PCR儀，電泳儀，凝膠成像系統(tǒng)。

1.3 核酸提取

使用DNA提取試劑盒，提取組織懸液DNA，按說明書步驟操作，洗脫產(chǎn)物-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 引物設(shè)計

根據(jù)GenBank中小鵝瘟B株VP3基因設(shè)計兩對引物，引物序列見表1。

表1 PCR引物序列

1.5 PCR擴(kuò)增

使用50 μL體系進(jìn)行反應(yīng)，體系中包含核酸提取液 2 μL，DNTP 2 μL，Buffer 2 μL，上、下游引物各 1 μL，Taq 酶 0.5 μL，ddH2O 38.5 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5min，94 ℃預(yù)變性1 min,51 ℃退火 1 min，72 ℃延伸2 min，30個循環(huán)后72 ℃ 10 min，4 ℃保存。經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果。

2 診斷

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示經(jīng)擴(kuò)增獲得大小為173 bp的產(chǎn)物，與預(yù)期大小相同，經(jīng)切膠回收鑒定，可判定鵝細(xì)小病毒核酸陽性。

通過臨床癥狀、病理變化和PCR方法檢測結(jié)果，確診為小鵝瘟。

3 治療

做好病死鵝無害化處理，對育雛舍、設(shè)備用具使用聚維酮碘和稀戊二醛消毒，健康雛鵝與發(fā)病雛鵝分群且隔離飼養(yǎng)，全部雛鵝一鵝一針頭地注射小鵝瘟精制蛋黃抗體，飲水中添加板藍(lán)根多糖、黃芪多糖，飼料中添加硫酸粘桿菌素，用以增加鵝群免疫力，控制繼發(fā)感染。經(jīng)過治療，雛鵝20日齡時，癥狀明顯改善，無新增發(fā)病，雛鵝群逐漸恢復(fù)健康，存活雛鵝4 500只。

4 討論

小鵝瘟預(yù)防重于治療。為種鵝注射疫苗，使得雛鵝具有母源抗體，切斷垂直傳播；對種蛋、孵化和育雛環(huán)節(jié)嚴(yán)格清潔消毒，切斷水平傳播；為雛鵝注射小鵝瘟精制蛋黃抗體，使之得到有效保護(hù)。

2018年12月13日，吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T 2941-2018《種鵝場小鵝瘟凈化技術(shù)規(guī)程》。有條件的種鵝場可應(yīng)用此標(biāo)準(zhǔn)開展小鵝瘟凈化工作，在種源環(huán)節(jié)凈化，切斷傳播途徑，最大程度降低發(fā)病率，對促進(jìn)養(yǎng)鵝業(yè)持續(xù)健康發(fā)展具有重要意義。