王瓊仙

（昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，云南 昆明）

0 引言

骨康靈液是昆明醫(yī)學(xué)院科研中試中心的院內(nèi)制劑，其生產(chǎn)得到了云南省藥監(jiān)局的批準(zhǔn)。骨康靈液的主要藥物組成有續(xù)斷、桃仁、當(dāng)歸、三七等，將所有藥物進(jìn)行炮炙加工，并將其粉碎，并過篩120 目，之后使用濃度為70%-95%的酒精進(jìn)行浸泡過濾，將其中的有效成分進(jìn)行提取制備出，該藥是一種外用的藥液[1,2]。骨康靈液的制備充分顯示了傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的結(jié)合，將中西醫(yī)充分結(jié)合起來。其效果主要是接骨生新，能夠有效地促進(jìn)骨折的愈合，發(fā)揮出活血化瘀、消腫止痛、舒筋壯骨的作用，同時(shí)有清心安神及行氣止痛的功效[3,4]。該藥的適用范圍較廣，對(duì)于外傷性閉合骨折、跌打損傷、關(guān)節(jié)紅腫等癥狀均有顯著的效果，能夠有效地促進(jìn)筋絡(luò)的疏通，促進(jìn)骨組織生新[5,6]，骨康靈液的批準(zhǔn)文號(hào)為滇藥制字(z)05A02434 號(hào)。

骨折需要進(jìn)行骨修復(fù)治療，其修復(fù)與重建是需要新的毛細(xì)血管生成，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，能夠誘導(dǎo)血管的生成與生長(zhǎng)，其參與骨折后組織變化過程[7,8]。中醫(yī)經(jīng)典理論云：“肢體傷于外而氣血傷于內(nèi)”，發(fā)生骨折后局部的氣血出現(xiàn)瘀滯，從而導(dǎo)致全身血液運(yùn)行不暢，出現(xiàn)淤堵。骨康靈液的主要功能是活血化瘀、消腫止痛，對(duì)外傷性閉合骨折及跌打損傷、關(guān)節(jié)紅腫疼痛等有較好的療效。骨康靈液能夠促進(jìn)筋絡(luò)疏通，促進(jìn)骨折軟組織生新，利于骨折愈合[9,10]。為了探究骨康靈液在動(dòng)物骨折愈合中對(duì)VEGF 的影響，本研究展開了動(dòng)物分組實(shí)驗(yàn)的對(duì)照研究，從而總結(jié)出骨康靈液對(duì)VEGF 表達(dá)的影響及對(duì)骨折的修復(fù)作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品

儀器：本部門實(shí)驗(yàn)室或是本校校醫(yī)院提供的普通醫(yī)用診斷X 攝線機(jī)，以及手術(shù)需要的一些器械等。

藥品：本院原制劑室提供，骨康靈液的批準(zhǔn)文號(hào)為滇藥制字(z)05A02434 號(hào)。

1.2 動(dòng)物的分組

30 只成年SD 大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組。對(duì)照組(骨折+95%酒精)與實(shí)驗(yàn)組(骨折+骨康靈液)。所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均從昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部購(gòu)買取得，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SYSK( 滇)2005-0004，許可證號(hào)SCXK( 滇) 2011-0004。

1.3 大鼠動(dòng)物模型建立與藥物治療

骨折模型的制備：30 只SD 大鼠體重（200±20）g，隨機(jī)選擇右側(cè)股骨逆行穿克氏針固定后造模支架制造股骨中段骨折，以對(duì)側(cè)進(jìn)行對(duì)照，對(duì)患肢進(jìn)行X 線照射并觀察。對(duì)傷口進(jìn)行縫合，注意在手術(shù)后根據(jù)大鼠的體重進(jìn)行青霉素的注射，并進(jìn)行抗感染治療，連續(xù)治療3d。

分組及給藥：骨折造模成功后，將30 只模型大鼠隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組( 骨折+95% 酒精)15 只，實(shí)驗(yàn)組( 骨折+ 骨康靈液)15 只，骨康靈液治療組在患處使用藥棉或是紗布進(jìn)行包裹，之后使用小木板進(jìn)行固定處理，再使用骨康靈液將藥棉浸濕，每日的浸濕次數(shù)為4 次，保證骨折處的藥棉處于濕潤(rùn)狀態(tài)，這樣能夠?qū)⒚壮浞值卮蜷_，促進(jìn)藥物的吸收。分別于骨折給藥后第7、15、21、30、42d 各組每次處死動(dòng)物3只；對(duì)處死大鼠的雙側(cè)股骨進(jìn)行完整的解剖，并將骨折周圍的軟組織及骨痂取出，同時(shí)將對(duì)側(cè)同水平的股骨組織取出，使用10%甲醛固定，進(jìn)行組織學(xué)觀察。

1.4 觀察指標(biāo)

檢測(cè)VEGF 的表達(dá)情況，使用的方法為免疫組織化學(xué)方法，將切片的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行記錄。陽(yáng)性細(xì)胞胞漿呈棕色染色，計(jì)算高倍視野內(nèi)染色陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)骨痂組織VEGF 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞率，見表1、圖1。

表1 各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)骨痂組織VEGF 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞率

表1 各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)骨痂組織VEGF 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞率

注：*表示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較具有顯著性差異，P＜0.05

圖1 各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)骨痂組織VEGF 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞率

3 討論

3.1 骨康靈液中的血竭、三七、續(xù)斷、當(dāng)歸促進(jìn)骨折愈合的現(xiàn)代藥理研究

骨折愈合的修復(fù)過程較為復(fù)雜，且是一個(gè)連續(xù)的過程，同時(shí)在修復(fù)的過程中受到多種因素的影響。有相關(guān)的研究顯示，在骨折的修復(fù)過程中，在早期骨建單位的轉(zhuǎn)換周期縮小，有利于骨痂的再建，增加了骨痂量，從而促進(jìn)骨痂的生長(zhǎng)，在后期對(duì)骨細(xì)胞的活性有很大的提高作用，使得新的骨痂生成，其原因與其中含有豐富的錳元素及鋅元素有很大的 關(guān)系。當(dāng)歸在中醫(yī)接骨方藥中運(yùn)用得較多，在現(xiàn)代藥理學(xué)中證明其具有顯著的活血化瘀的效果，能夠改善骨折斷端的血液循環(huán)情況，加快局部血腫的吸收，從而促進(jìn)骨折的愈合。

本研究結(jié)果顯示，對(duì)兩組大鼠進(jìn)行X 線照射，分別在第15d、21d、30d、42d 出現(xiàn)差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在21d 時(shí)差異達(dá)到最大，這種差異隨著時(shí)間的延長(zhǎng)越來越大。這就表明，在骨折的中后期骨康靈液能夠促進(jìn)軟骨鈣化，促進(jìn)骨細(xì)胞的增殖，增加了骨痂量，提高了骨強(qiáng)度，對(duì)骨折的愈合有很好的促進(jìn)作用。

3.2 骨康靈液的中醫(yī)認(rèn)識(shí)

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，骨折需要經(jīng)過瘀去—新生—骨合的過程[11,12]。主要的理論支撐包括“腎主骨”和“有傷必有瘀”，與現(xiàn)代藥理研究相結(jié)合總結(jié)出該藥治療骨折的原則：以傳統(tǒng)的骨傷理論為指導(dǎo)思想，不斷篩選和優(yōu)化常用的藥物。骨康靈液使用的主藥為血竭、三七、續(xù)斷、當(dāng)歸，所要達(dá)到的目的為補(bǔ)中寓通、補(bǔ)而不滯，該組方注重補(bǔ)腎，同時(shí)還在活血上進(jìn)行調(diào)整。這一組方能夠充分體現(xiàn)出中醫(yī)學(xué)的整體觀念及標(biāo)本兼治的思想。其藥物組成簡(jiǎn)單，臨床療效肯定，符合臨床用藥特點(diǎn)。在臨床尤其是基層醫(yī)院中具有很大的應(yīng)用價(jià)值。