李敏，周瀟瀟，肖金鵬，向曉雪，黃迪，李俐睿

（四川省成都市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

豬圓環(huán)病毒II 型（PCV2）主要引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）［1-2］，母豬繁殖障礙［3］、斷奶豬和育肥豬的呼吸道疾?。?］、豬皮炎和腎病綜合征［5］（PDNS）以及豬先天性震顫［6］等一系列疫病，被稱為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病（PCVAD）。在我國(guó)豬群中，圓環(huán)病毒感染普遍存在，豬群血清陽性率可達(dá)20%～80%［7］。2002 年，楊漢春［8］對(duì)北京、天津、廣東、深圳、山東、山西等地規(guī)?；i場(chǎng)的臨床發(fā)病情況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)合PCR 診斷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)11 個(gè)豬場(chǎng)發(fā)生了由PCV2 感染所致的PMWS，1個(gè)豬場(chǎng)表現(xiàn)為PDNS。近兩年來，成都地區(qū)夏季的病死豬呈一定程度的上漲趨勢(shì)。為詳細(xì)了解病死豬群中的PCV2 感染情況，筆者從成都地區(qū)三個(gè)無害化處理場(chǎng)采集了病死豬的淋巴結(jié)、脾臟和肝臟樣品，對(duì)圓環(huán)病毒II 型（PCV2）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 樣品采集于成都市3個(gè)無害化處理場(chǎng)，來源于15個(gè)區(qū)（市）縣。于2019年6月～9月每月在每個(gè)區(qū)（市）縣各采集5頭病死豬的淋巴結(jié)、脾臟和肝臟混合樣，共計(jì)236份。

1.1.2 主要試劑 磁珠法病毒DNA/RNA 提取試劑盒、豬圓環(huán)病毒（PCV2）單重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)有限公司。

1.2 PCV2熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法

1.2.1 樣品處理 向無菌的2 mL Lysing Matrix組織研磨管中加入1 mL PBS液，再加入適量組織混合樣品，置于FastPrep-24?5G 研磨儀中研磨30 s 后取出，再置于離心機(jī)以8 000 r/min 離心1 min，取上清備用。

1.2.2 DNA抽提 采用磁珠法病毒DNA/RNA提取法通過KingFisher DUO 自動(dòng)化提取儀對(duì)病毒DNA 進(jìn)行提取，執(zhí)行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序進(jìn)行DNA 抽提。程序執(zhí)行完畢，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 熒光定量RT-PCR反應(yīng) 從試劑盒中取出無菌無核酸酶水、PCR反應(yīng)液、熒光探針，振蕩混勻后，瞬時(shí)離心備用。向PCR反應(yīng)管內(nèi)依次加入無菌無核酸酶水5.9 μL、PCR 反應(yīng)液10 μL、熒光探針2.1 μL、DNA模板2 μL，配制成20 μL反應(yīng)體系，并設(shè)立陰、陽性對(duì)照。反應(yīng)條件如下：95 ℃2 min；循環(huán)95 ℃2 min，60 ℃35 s，共40個(gè)循環(huán)；在60 ℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)，報(bào)告基團(tuán)“FAM”，淬滅基團(tuán)“NONE”。

1.2.4 結(jié)果判定 若陽性對(duì)照Ct 值≤30，陰性對(duì)照無Ct值，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。如Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，判為PCV2陽性；如30＜Ct值＜37，需重新提取DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如仍為可疑，則判定為陽性；如Ct值≥37判為陰性。

2 結(jié)果

2019 年6 月至9 月，共檢測(cè)病死豬內(nèi)臟樣品236 份，其中豬圓環(huán)病毒II 型（PCV2）核酸陽性有160 份，平均陽性率達(dá)68%。具體測(cè)定結(jié)果見表1。

3 分析

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以看出，病死豬中豬圓環(huán)病毒II型（PCV2）的陽性率高達(dá)68%，說明豬群中豬圓環(huán)病毒II型普遍存在。而PCV2又常與多種病原混合感染，造成豬只消瘦、皮膚蒼白、腹瀉、呼吸障礙及輕度黃疸，還包括神經(jīng)癥狀、繁殖障礙、皮炎等臨床癥狀。成都市作為四川的養(yǎng)豬大市，必須對(duì)豬圓環(huán)病毒II型進(jìn)行重點(diǎn)防控。

2006年，北美廣泛使用PCVAD 疫苗，報(bào)道顯示，超過98%的豬只在斷奶前后免疫，提高了豬只的生產(chǎn)性能，降低了死亡率［9］。2007 年，有研究表明，對(duì)斷奶仔豬實(shí)施PCV2免疫，雖然能有效控制PCVAD 發(fā)生，降低血液中的病毒水平，降低育成豬的死亡率，但卻并不能根除感染發(fā)生［10］，PCV2 在主動(dòng)免疫的情況下依然可以感染豬只。通常4～11周齡的豬對(duì)PCV2較為易感，而哺乳仔豬的感染率較低［11］。實(shí)際生產(chǎn)中，育肥豬的PCV2 感染在各階段均存在，甚至高效價(jià)抗體的豬群也可感染PCV2，表明控制PCV2感染僅靠免疫無法解決，而且成年母豬可能是該病的重要傳染源［12］。

表1 2019年夏季成都市無害化處理場(chǎng)豬圓環(huán)病毒II型的檢測(cè)結(jié)果

4 防控建議

PCVAD 的發(fā)生往往不單是因?yàn)镻CV2 感染造成的，需要其他條件或共同因素才得以誘發(fā)臨床病癥，但其相互作用和致病的機(jī)制非常復(fù)雜，因此不能完全依賴免疫等特異性防制措施，只有同時(shí)采取有效的綜合防控措施，才能起到更好的效果。

4.1 做好相關(guān)疫苗免疫接種 同豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）有關(guān)的豬病往往是由PRRSV、豬流感病毒（SIV）、豬肺炎支原體、豬細(xì)小病毒（PPV）、多殺性巴氏桿菌等多種病原混合感染引起的。因此，除接種PCV2疫苗以外，豬場(chǎng)應(yīng)結(jié)合自身情況，做好PRRSV和PPV等相關(guān)疫病的疫苗接種。

4.2 做好飼養(yǎng)管理 本病的發(fā)生與豬群的日常管理密切相關(guān)，高密度的集中養(yǎng)殖方式本身就易引起疾病。故養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)應(yīng)制定規(guī)范和科學(xué)的養(yǎng)殖程序和飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)豬舍的通風(fēng)換氣和防暑降溫；注意飼料的營(yíng)養(yǎng)和質(zhì)量，保持清潔的飲水；及時(shí)清運(yùn)糞污，降低豬舍內(nèi)有害氣體濃度；做好驅(qū)蟲、防蚊、防鼠工作；加強(qiáng)生產(chǎn)母豬的產(chǎn)前和產(chǎn)后保健。一旦豬群感染PCV2 后，可適當(dāng)增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)，以降低發(fā)病率和病死率。

4.3 加強(qiáng)消毒工作 加強(qiáng)豬場(chǎng)內(nèi)外的環(huán)境衛(wèi)生與消毒工作，是防止感染的最有效措施。在進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的門口必須設(shè)立消毒池，配制有效消毒液，對(duì)來往車輛的輪胎和人的鞋底進(jìn)行消毒。禁止飼養(yǎng)狗、貓等小動(dòng)物，加強(qiáng)滅蚊蠅和滅鼠，控制疫病傳播。嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度，做好日常消毒工作，做到“全進(jìn)全出”，每批豬出欄后徹底清洗、消毒圈舍，并空欄1周以上。

4.4 做好無害化處理工作 一旦舍內(nèi)發(fā)生豬只死亡，應(yīng)將死豬裝入專用的防滲漏尸體袋中，聯(lián)系無害化處理公司對(duì)死豬收集處理，不得私自掩埋或高溫處理。同時(shí)，要對(duì)圈舍和尸體堆放地點(diǎn)進(jìn)行一次徹底的清洗消毒，防止病原微生物二次污染。