闞麗娟，蔡欽泉，覃俊龍，莫云均，張麗軍，陳亞瓊，李 瑞，李 悅，張秀明，李育敏

(深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，廣東深圳 518001)

血紅蛋白(Hb)疾病是由于珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致的一組疾病，其中引起珠蛋白分子結(jié)構(gòu)改變稱為異常Hb疾病，肽鏈合成不足為珠蛋白生成障礙性貧血[1]。Hb Q-Thailand是由于α珠蛋白肽鏈α1基因N端第74位密碼子GAC→CAC突變，使該位點天門冬氨酸被組氨酸替代所致，屬于異常Hb疾病。但由于Hb Q-Thailand通常與-α4.2缺失型珠蛋白生成障礙性貧血連鎖遺傳，因此，臨床對電泳篩查陽性者，應(yīng)進(jìn)一步行珠蛋白生成障礙性貧血基因及DNA測序檢測以明確基因型，并進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血防控指導(dǎo)和優(yōu)生遺傳咨詢。莫宗平等[2]對我國廣東、廣西地區(qū)的異常Hb基因突變調(diào)查顯示Hb Q-Thailand在α鏈異常的Hb中分布最多。廣東省不同地區(qū)的研究也表明Hb Q-Thailand的人群攜帶率較高[3-5]。但是由于不同年齡段及性別的血液學(xué)參數(shù)不同，且大部分進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血篩查的成年女性處于妊娠期，存在生理性貧血的可能，因此，本研究分別對成人和新生兒Hb Q-Thailand的血液學(xué)特征進(jìn)行分析，并按性別分類統(tǒng)計成人的血液學(xué)參數(shù)指標(biāo)，為中國人群Hb Q-Thailand的遺傳學(xué)研究提供系統(tǒng)、詳細(xì)的臨床參考資料。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2019年5月本院門診和住院進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測的病例為研究對象，為連續(xù)性資料，共72 397例，分為成年男性、成年女性及新生兒。

1.2儀器與試劑 紅細(xì)胞參數(shù)分析采用血細(xì)胞分析儀，購自日本Sysmex公司，型號XN-1000；Hb分析采用全自動毛細(xì)管電泳儀，購自法國Sebia公司，型號Capillarys2，試劑均為廠家原裝配套試劑。珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測采用擴增儀，購自中國黑馬公司，型號T960；全自動凝膠成像分析儀購自美國Bio-Rad公司，型號ChemiDocTMMP；電泳儀購自中國北京六一儀器廠，型號DYY-6C；恒溫雜交儀購自中國深圳亞能生物技術(shù)有限公司，型號YN-H16，試劑購自中國深圳亞能生物技術(shù)有限公司；DNA測序采用遺傳分析儀，購自美國ABI公司，型號3730XL。

1.3方法

1.3.1血液學(xué)分析 采集乙二胺四乙酸二鉀抗凝的外周靜脈全血2 mL，2～8 ℃保存，用于紅細(xì)胞參數(shù)和Hb電泳分析。采用全自動血液分析儀進(jìn)行紅細(xì)胞參數(shù)分析；采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行Hb組分分析。

1.3.2珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測 標(biāo)本采集同血液學(xué)分析。采用跨越斷裂點PCR法檢測3種中國人群常見的缺失型α珠蛋白生成障礙性貧血基因(--SEA、-α3.7和-α4.2)；采用PCR結(jié)合反向點雜交法檢測常見的3種非缺失α珠蛋白生成障礙性貧血基因(αQS、αCS、αWS)和17種β珠蛋白生成障礙性貧血基因點突變類型(-28、-29、CD17、CD41-42、CD43、βE、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、-32、-30、CAP、Initiation condon、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、CD31)。

1.3.3珠蛋白基因序列分析 珠蛋白基因測序由中國深圳亞能生物技術(shù)有限公司檢測。采用Sanger雙脫氧鏈終止法進(jìn)行珠蛋白基因序列測定，于人類異常Hb和珠蛋白生成障礙性貧血數(shù)據(jù)庫(http://globin.bx.psu.edu)查找突變位點。

2 結(jié) 果

2.1基因型分析 經(jīng)DNA測序，檢出成人及新生兒共28例Hb Q-Thailand(GAC→CAC)雜合突變，發(fā)生率為0.039%，所有攜帶者均檢出-α4.2雜合缺失型珠蛋白生成障礙性貧血，其中27例為Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失，包括成人21例(男性2例，女性19例)，新生兒6例；1例為成人Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失和βIVS-Ⅱ-81雜合突變(C>T)。見圖1、2。

注:A表示成人；B表示新生兒；↓表示突變位點。

圖1 成人及新生兒的Hb Q-Thailand測序圖

注:A表示Hb Q-Thailand；B表示IVS-Ⅱ-81；↓表示突變位點。

圖2 Hb Q-Thailand合并IVS-Ⅱ-81雜合突變測序圖

2.2血液學(xué)表型分析 成人Hb Q-Thailand的Hb電泳分析均見Hb Q-Thailand和HbA2變異體條帶。成人Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失，以及合并βIVS-Ⅱ-81雜合突變的紅細(xì)胞參數(shù)分析均表現(xiàn)為Hb水平正常，平均紅細(xì)胞體積(MCV)和平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)輕度降低。1例成人男性Hb Q-Thailand合并IVS-Ⅱ-81雜合突變，Hb 120 g/L，MCV 68.0 fL，MCH 23.7 pg，HbA2+突異體2.4%，Hb Q-Thailand 28.3%。6例新生兒Hb Q-Thailand雜合子的Hb電泳結(jié)果均見Hb Q-Thailand和Hb Bart′s帶。6例新生兒平均HbA(13.7±4.1)%，HbF(64.9±4.1)%，Hb Q-Thailand(21.0±2.7)%，Hb Bart′s(0.4±0.1)%。見表1、2。

表1 成人Hb Q-Thailand的血液學(xué)表型

表2 6例新生兒Hb Q-Thailand雜合子的毛細(xì)管電泳分析(%)

3 討 論

Hb Q-Thailand是1958年由VELLA等[6]在東南亞1個華僑家庭中發(fā)現(xiàn)。曾溢滔等[7]于1983年在我國江西萍鄉(xiāng)首先發(fā)現(xiàn)Hb Q-Thailand攜帶者。我國廣東、廣西地區(qū)異常Hb以HbE、Hb Q-Tailand、Hb New York為主[2]。廣西南寧地區(qū)調(diào)查Hb Q-Thailand的發(fā)生率為0.130%[8]，柳州為0.078%[9]，而李友瓊等[10]的研究報道廣西地區(qū)為0.060%，均較高；廣東省調(diào)查顯示韶關(guān)為0.164%[3]，梅州為0.085%[4]，而廣州市針對育齡期夫婦的調(diào)查顯示為0.171%[5]。本研究納入深圳地區(qū)72 397例標(biāo)本進(jìn)行大規(guī)模的群體異常Hb疾病篩查，顯示Hb Q-Thailand的發(fā)生率為0.039%，低于以上所有地區(qū)，這可能跟深圳作為移民城市，受人口遷徙影響和基因構(gòu)成比例復(fù)雜等因素有關(guān)。

Hb Q-Thailand通常與-α4.2缺失型珠蛋白生成障礙性貧血連鎖遺傳有關(guān)，但是由于其突變位點天門冬氨酸是位于分子表面非功能位置的氨基酸，被組氨酸代替不影響Hb的功能，因此，其合并-α4.2缺失雜合子常無明顯貧血癥狀，血細(xì)胞分析表現(xiàn)為Hb水平正常，MCV和MCH輕度降低，少部分?jǐn)y帶者紅細(xì)胞參數(shù)可正常[8-10]。Hb Q-Thailand合并α珠蛋白生成障礙性貧血時，Hb Q-Thailand的量與α基因的缺失個數(shù)呈正相關(guān)，α基因缺失數(shù)量越多，Hb Q-Thailand的水平越高[2,8]。Hb Q-Thailand合并輕型α珠蛋白生成障礙性貧血時(如同時合并-α4.2缺失和-α3.7缺失，或合并-α4.2缺失純合子)的血液學(xué)表型同輕型α珠蛋白生成障礙性貧血[8-10]。但如Hb Q-Thailand合并中間型α珠蛋白生成障礙性貧血，則會引起Hb Q-H病。Hb Q-H病的主要基因型為α0/α+，即3個α基因失活，而剩下的1個α基因發(fā)生突變形成Hb Q-Thailand。因此，成人Hb Q-H病可無HbA和HbA2合成，而合成Hb Q-Thailand(αQ2β2)和Hb QA2(αQ2δ2)及過剩的β鏈形成的Hb H，電泳表現(xiàn)Hb以Hb Q-Thailand為主，然后為Hb H、Hb Bart′s和少量Hb QA2[11-12]；產(chǎn)前診斷臍帶血標(biāo)本表現(xiàn)為Hb Q-Thailand和Hb Bart′s及少量的Hb portland[13]。由于Hb Q-Thailand穩(wěn)定且有攜氧能力，大部分報道顯示Hb Q-H病與Hb H病的臨床癥狀相似[9,11]，但也有報道表明Hb Q-H病嚴(yán)重者可導(dǎo)致胎兒水腫[13]，可能與Hb Q-Thailand合并Hb H病加重缺氧有關(guān)，這提示臨床如夫妻一方為Hb Q-Thailand合并-α4.2缺失，另一方為α0基因(如--SEA和-THAI)攜帶者，母親在妊娠期有發(fā)生胎兒水腫的可能，必要時仍需進(jìn)行產(chǎn)前診斷。Hb Q-Thailand合并-α4.2缺失合并輕型β珠蛋白生成障礙性貧血的血液學(xué)表型同輕型β珠蛋白生成障礙性貧血，但Hb Q-Thailand水平低于Hb Q-Thailand合并-α4.2缺失雜合子，這可能是由于β鏈合成降低導(dǎo)致Hb Q-Thailand減少[10-14]。Hb Q-H病合并輕型β珠蛋白生成障礙性貧血，血液學(xué)表型與Hb Q-H病相似，表現(xiàn)為輕至中度小細(xì)胞低色素性貧血，Hb Q-Thailand明顯升高，但前者HbA2升高[8,15]； Hb Q-H病合并中間型β珠蛋白生成障礙性貧血也與Hb Q-H病相似，表現(xiàn)為輕至中度小細(xì)胞低色素性貧血，這可能是由于α鏈和β 鏈均合成降低，使α鏈/β鏈?zhǔn)Ш鉁p少[11]。偶有Hb Q-Thailand不與-α4.2缺失型珠蛋白生成障礙性貧血連鎖遺傳的報道，1例為Hb Q-Thailand合并--SEA缺失和βCD41-42雜合子，表現(xiàn)為輕型珠蛋白生成障礙性貧血，Hb Q-Thailand水平較Hb Q-Thailand合并-α4.2缺失雜合子低，HbA2升高，這與β鏈合成減少有關(guān)[8]；另外2例為單純Hb Q-Thailand雜合子，Hb Q-Thailand水平為(18.9±1.8)%[2]。

本研究檢出的Hb Q-Thailand均為雜合子，并與-α4.2缺失型珠蛋白生成障礙性貧血連鎖遺傳，其中成人攜帶者以女性居多，這是由于進(jìn)行產(chǎn)前Hb電泳篩查的妊娠期女性所占比例較高。鑒于妊娠期存在生理性貧血的可能，本研究首先按性別分別統(tǒng)計成人的各項血液學(xué)參數(shù)指標(biāo)，觀察到成年男性和女性Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失攜帶者均無明顯貧血癥狀，Hb水平在正常參考區(qū)間內(nèi)，僅表現(xiàn)為MCV和MCH輕度降低，這表明MCV和MCH在珠蛋白生成障礙性貧血篩查中的重要性；其中2例攜帶者紅細(xì)胞參數(shù)正常，與已有報道相符合[10]，這也提示臨床在珠蛋白生成障礙性貧血篩查時需要結(jié)合血常規(guī)和Hb電泳結(jié)果聯(lián)合分析，避免漏診。本研究還發(fā)現(xiàn)1例成人Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失和βIVS-Ⅱ-81雜合突變，其紅細(xì)胞參數(shù)特征同Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失。HbVar數(shù)據(jù)庫上記錄β珠蛋白基因IVS-Ⅱ-81(C>T)突變(HBB:c.315+81C>T)發(fā)生于印度人群，可能為中性多態(tài)性位點。筆者也曾報道1例Hb Queens合并IVS-Ⅱ-81雜合突變，其血液學(xué)表型正常，這表明IVS-Ⅱ-81雜合突變不影響β珠蛋白基因的功能[16]。新生兒珠蛋白生成障礙性貧血篩查也是珠蛋白生成障礙性貧血防控的重要環(huán)節(jié)之一，研究表明臍帶血Hb電泳分析在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血篩查中較傳統(tǒng)的紅細(xì)胞脆性試驗及血細(xì)胞分析更具篩查價值[17]，因此，新生兒通常采用臍帶血Hb電泳進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血篩查。本研究分析新生兒Hb Q-Thailand的Hb電泳特征，6例新生兒Hb Q-Thailand合并-α4.2雜合缺失的臍帶血均見Hb Q-Thailand和Hb Bart′s帶，平均水平分別為(21.0±2.7)%和(0.4±0.1)%。王繼成等[13]報道Hb Q-H病的產(chǎn)前診斷臍帶血標(biāo)本Hb Q-Thailand和Hb Bart′s的水平分別為(46.6±6.1)%和(32.7±6.7)%，其原因同成人外周血Hb合成，即3個α基因失活，只剩下1個帶Hb Q-Thailand的α1基因。

4 結(jié) 論

綜上所述，本研究按年齡段及性別分類統(tǒng)計成人及新生兒Hb Q-Thailand的血液學(xué)參數(shù)指標(biāo)，為珠蛋白生成障礙性貧血篩查提供了系統(tǒng)的臨床參考資料，并結(jié)合研究結(jié)果和文獻(xiàn)綜合分析了Hb Q-Thailand合并不同珠蛋白生成障礙性貧血的血液學(xué)特征，這對于Hb Q-Thailand的遺傳學(xué)研究具有重要的參考價值。