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        復(fù)方苦參洗劑的安全性研究

        2020-05-30 01:22:10黃鳳嬌吳森王平慧周素文
        醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2020年5期
        關(guān)鍵詞:洗劑豚鼠苦參

        黃鳳嬌,吳森,王平慧,周素文

        (湖北省藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、湖北省藥品質(zhì)量檢測(cè)與控制工程技術(shù)研究中心,武漢 430054)

        復(fù)方苦參洗劑由苦參、蛇床子、地膚子、白蘚皮等組成,具有燥濕、防腐、殺蟲、止癢功效,用于肛門騷癢癥??鄥⒕哂星鍩嵩餄?、殺蟲、利尿功效,臨床常用于濕疹、皮膚瘙癢、滴蟲性陰道炎等皮膚瘙癢性疾病??鄥⒅苿┰陴W癥、接觸性皮炎、濕疹、特應(yīng)性皮炎、銀屑病等皮膚疾病中應(yīng)用廣泛[1-3]。蛇床子具有抗敏止癢的功效[4]。復(fù)方苦參洗劑為外用制劑,筆者研究其對(duì)皮膚的毒理反應(yīng),以評(píng)價(jià)該制劑的安全性。

        1 材料與方法

        1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 日本大耳白兔20只,雌雄兼用,體質(zhì)量2.0~3.0 kg,普通級(jí);豚鼠40只,雌雄各半,體質(zhì)量300~400 g,普通級(jí)。以上動(dòng)物均購于武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(鄂)2008-0003,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SYXK(鄂)2014-0009。動(dòng)物給予顆粒飼料喂養(yǎng),自由飲用凈化水,環(huán)境溫度20~25 ℃,濕度40%~70%,光照為12 h明暗交替。

        1.2藥品與試劑 擬臨床使用復(fù)方苦參洗劑(含生藥材量為0.37 g·mL-1,批號(hào):150101)及濃縮10倍的復(fù)方苦參洗劑(含生藥材量為3.7 g·mL-1),由湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供。2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB,天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所,批號(hào):20100617)。

        1.3方法

        1.3.1家兔皮膚給藥急性毒性實(shí)驗(yàn) 12只家兔,按隨機(jī)區(qū)組法分為兩組,給藥組(為濃縮10倍的樣品,含生藥材量為3.7 g·mL-1)和陰性對(duì)照組(純化水),每組6只,雌雄各半。于給藥前24 h將動(dòng)物背部去毛,去毛范圍180 cm2,將供試品或純化水4 mL涂于去毛區(qū)域,然后用一層稱樣紙覆蓋,用無刺激性膠布或繃帶固定,涂藥4 h后用溫水清洗給藥部位,同法再涂藥1次,末次涂藥24 h后用溫水清洗給藥部位。每天觀察1次,觀察給藥后動(dòng)物的全身反應(yīng)情況,包括動(dòng)物的外觀、行為、分泌物、排泄物、震顫、腹瀉、嗜睡和昏迷等癥狀以及涂敷部位有無紅斑和水腫等局部毒性反應(yīng),觀察至給藥后7 d[5-8]。

        1.3.2家兔直腸刺激實(shí)驗(yàn) 選擇兔肛門區(qū)域無異常、排便正常的8只家兔,按完全隨機(jī)化法分為兩組,給藥組和陰性對(duì)照組(純化水),每組4只,雌雄各半。將受試物或純化水2 mL在距肛門4 cm處注入家兔直腸,連續(xù)給藥8 d,每日飼喂之前給藥。每次給藥前檢查家兔肛門區(qū)域和肛門括約肌,給藥后臨床表現(xiàn)(如疼痛癥狀)和糞便(如血、黏液),給藥后動(dòng)物的死亡和尸檢情況,局部組織有無充血、水腫等現(xiàn)象。家兔處死后,分離直腸,縱向剖開觀察黏膜變化,并進(jìn)行直腸黏膜的病理組織學(xué)檢查[9]。

        1.3.3豚鼠皮膚過敏實(shí)驗(yàn) 豚鼠按隨機(jī)區(qū)組法隨機(jī)分為3組,即復(fù)方苦參洗劑組,陰性對(duì)照組(純化水)和DNCB組(陽性對(duì)照組),供試品組20只,其余各組10只,雌雄各半。致敏:實(shí)驗(yàn)前24 h將動(dòng)物背部左側(cè)去毛,去毛范圍為3 cm×3 cm。 將濃縮10倍的供試品0.5 mL涂布在豚鼠背部左側(cè)3 cm×3 cm的區(qū)域,然后用一層稱樣紙覆蓋,再用無刺激性膠布固定,持續(xù)6 h后用溫水洗去殘留物,第7天和第14天各重復(fù)1次,共3次。陰性對(duì)照組動(dòng)物背部左側(cè)脫毛處涂純化水,DNCB組動(dòng)物背部左側(cè)脫毛處涂敷1%DNCB溶液。激發(fā):在末次涂藥誘導(dǎo)2周時(shí),用臨床濃度的供試品0.5 mL涂布在豚鼠背部右側(cè)3 cm×3cm的區(qū)域,然后用一層稱樣紙覆蓋,再用無刺激性膠布固定,6 h后用水洗去受試物,DNCB組(涂抹0.1%DNCB)與陰性對(duì)照組用同法激發(fā)接觸并觀察。在致敏后1和24 h及激發(fā)后24和48 h觀察皮膚紅斑、水腫和其他異常反應(yīng),按標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分評(píng)價(jià)致敏程度,同時(shí)應(yīng)密切觀察動(dòng)物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性變態(tài)反應(yīng),測(cè)定開始及結(jié)束時(shí)動(dòng)物體質(zhì)量[10-13]。

        2 結(jié)果

        2.1家兔皮膚給藥急性毒性實(shí)驗(yàn) 給藥當(dāng)天及給藥后不同的時(shí)間與陰性對(duì)照組比較,動(dòng)物無全身反應(yīng)情況,動(dòng)物的外觀、行為正常,分泌物、排泄物無異常,未出現(xiàn)震顫、腹瀉、嗜睡和昏迷等癥狀,涂敷部位無紅斑和水腫等局部毒性反應(yīng),結(jié)果見圖1;實(shí)驗(yàn)開始及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),稱取動(dòng)物體質(zhì)量,結(jié)果給藥組與陰性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),體質(zhì)量結(jié)果見表1。

        圖1 家兔皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)局部反應(yīng)結(jié)果

        表1 兩組家兔給藥前后體質(zhì)量比較

        組別給藥前給藥后陰性對(duì)照組2.4±0.12.4±0.1給藥組2.4±0.22.4±0.2

        2.2家兔直腸刺激實(shí)驗(yàn) 各組動(dòng)物給藥后未見疼痛表現(xiàn),排便正常,未見糞便帶血等癥狀。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死家兔,觀察肛門局部組織及直腸黏膜,未見有充血、水腫及糜爛等現(xiàn)象。組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明,給藥組和陰性對(duì)照組未見明顯異常情況。病理圖片見圖2。

        圖2 2組家兔病理組織學(xué)檢查

        Fig.2Histopathologicexaminationintwogroupsofrabbits

        2.3豚鼠皮膚過敏實(shí)驗(yàn) 在各次致敏后1和24 h,給藥組、陰性對(duì)照組及DNCB組未見任何異常情況。復(fù)方苦參洗劑組豚鼠體質(zhì)量增長正常,與陰性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),結(jié)果見表2,激發(fā)后24和48 h觀察,復(fù)方苦參洗劑組及陰性對(duì)照組未見皮膚紅斑、水腫等異常反應(yīng),皮膚變態(tài)反應(yīng)分值為0,變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率為0%。而DNCB組激發(fā)給藥后24和48 h觀察,有明顯的皮膚紅斑和水腫現(xiàn)象,豚鼠皮膚過敏圖片見圖3,給藥后24和48 h皮膚變態(tài)反應(yīng)分值分別為4.6,2.6,變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率為100.0%。

        表2 3組豚鼠給藥前后體質(zhì)量比較

        組 別豚鼠/只給藥前給藥后陰性對(duì)照組10348±16475±17DNCB組10355±13468±14復(fù)方苦參洗劑組20342±13479±15

        圖3 豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)

        Fig.3Allergyreactionoftheskinofguineapigs

        3 討論

        肛門瘙癢癥在古代已有記載,中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,本病多因外感風(fēng)、濕、熱、蟲等外邪,內(nèi)因稟性不耐,情緒憂郁,以至濕熱內(nèi)生下注,阻于肛門周圍皮膚所致[14]。 清代高錦庭《瘍科心得集》載有苦參湯,由苦參、蛇床子、白芷、金銀花、菊花、黃柏、地膚子、大菖蒲組成,具有祛風(fēng)除濕,殺蟲止癢之效果[15]。復(fù)方苦參洗劑以此方為基礎(chǔ),方中重用苦參清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲;蛇床子溫腎助陽、祛風(fēng)殺蟲;地膚子清熱利濕、祛風(fēng)止癢;白蘚皮燥濕止癢、解毒殺蟲。諸藥合用,共奏清熱燥濕、殺蟲止癢之功效。

        本研究對(duì)復(fù)方苦參洗劑局部用藥可能引起的毒性、刺激性及變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行了研究,結(jié)果表明復(fù)方苦參洗劑是一種安全性較高的外用制劑。

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