劉紫英，袁 斌，肖花美，吳永飛，劉小林，*，胡祥飛

(1.宜春學(xué)院 化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西 宜春 336000； 2.宜春學(xué)院 生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院，江西 宜春 336000)

馬鈴薯晚疫病是一種由致病疫霉引起的，能夠?qū)е埋R鈴薯塊莖腐爛和莖葉死亡的一種毀滅性真菌病害[1]。該病在各地普遍發(fā)生，尤其是多雨時危害更甚，發(fā)生嚴(yán)重時葉片萎蔫，直至整株死亡[2]。全球每年因馬鈴薯晚疫病造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)百億美元，我國約10億美元，占馬鈴薯總產(chǎn)值的15%[3]。另外，馬鈴薯晚疫病對馬鈴薯品質(zhì)也會構(gòu)成嚴(yán)重影響。馬鈴薯晚疫病的傳統(tǒng)防治方法主要有農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)防治[4]。近年來，由于傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)防治不能從根本上控制病害的發(fā)生，防治效果不穩(wěn)定；而化學(xué)農(nóng)藥長期使用會使病原菌產(chǎn)生抗藥性，過量使用農(nóng)藥還會破壞土壤，加重農(nóng)藥對環(huán)境的污染，造成過多的有毒有害物質(zhì)殘留在農(nóng)作物體內(nèi)。近年來，生物防治方法越來越受到人們的重視，通過利用微生物間的拮抗作用，選擇對農(nóng)作物不造成危害的微生物來抑制病菌生長[5]。李雙東等[6]研究發(fā)現(xiàn)，EB-28無菌體培養(yǎng)液對馬鈴薯晚疫病菌游動孢子釋放具有良好的抑制作用，抑制率達(dá)91.26%；在盆栽試驗中，其對馬鈴薯晚疫病的防效顯著高于離體葉片試驗。任興波等[7]分離得到了馬鈴薯晚疫病菌的高效拮抗菌株YR-35變綠色粘球菌Myxococcusvirescens，該菌株對馬鈴薯晚疫病菌菌絲生長有較高的抑制率。

本試驗旨在篩選馬鈴薯晚疫病病菌的拮抗菌，研究拮抗菌對致病疫霉游動孢子釋放、休止孢萌發(fā)、孢子囊直接萌發(fā)的抑制效果，為田間防治馬鈴薯晚疫病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

馬鈴薯晚疫病病株采集于江西省宜春市新坊鄉(xiāng)試驗基地。

燕麥培養(yǎng)基：燕麥50 g·L-1，胡蘿卜50 g·L-1，瓊脂粉20 g·L-1，pH=5.8。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g·L-1，酵母浸粉5 g·L-1，NaCl 10 g·L-1，瓊脂18 g·L-1，調(diào)pH至7.2±0.1。氨芐青霉素或鏈霉素200 mg·L-1。

1.2 方法

1.2.1 馬鈴薯致病疫霉的分離與篩選

采集患馬鈴薯晚疫病植株的莖葉病害標(biāo)樣，采用組織分離法分離病菌，接種于燕麥培養(yǎng)基。接種之前加入200 mg·L-1的氨芐青霉素，防止細(xì)菌感染。分離霉菌時，先將病葉用水沖洗干凈，再用滅菌水沖洗，然后將病斑剪成1.0 cm2大小的小塊，用75%乙醇浸泡30 s，取出，用無菌水洗凈。放置在不同燕麥培養(yǎng)基平板上，18 ℃培養(yǎng)5～6 d后，用打孔器把白色毛絨狀的致病疫霉接種到新鮮的燕麥培養(yǎng)基(鏈霉素200 mg·L-1)，然后通過打孔、接種菌餅的方法對致病疫霉進(jìn)行分離純化，通過鏡檢觀察致病疫霉孢子和生長形態(tài)，編號為PLB-2。

1.2.2 致病疫霉PLB-2的形態(tài)鑒定

取出18 ℃培養(yǎng)7 d左右的致病疫霉PLB-2。首先觀察其菌落特征，然后用顯微形態(tài)鑒定的方法，觀察其顯微結(jié)構(gòu)。運(yùn)用插片法制作蓋玻片，先將蓋玻片傾斜45°插入培養(yǎng)基中，然后將其放回18 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1 d，讓菌絲蔓延至蓋玻片上。繼而進(jìn)行鏡檢，用乳酸石碳酸棉蘭染色液染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察致病疫霉的菌絲、孢子囊和游動孢子形態(tài)結(jié)構(gòu)。

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1.2.3 致病疫霉的分子生物學(xué)鑒定

基因組DNA的提?。?00 mg致病疫霉，用液氮研磨成粉末，加入1.5 mL離心管中。依據(jù)真菌基因組DNA快速抽提試劑盒[生工生物工程(上海)有限公司]的操作說明提取DNA。采用核酸蛋白測定儀測定樣品的核酸濃度和純度。樣品D260/D280在1.8～2.0，這表明樣品中DNA含量很高。之后，對DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

致病疫霉PLB-2的ITS-rDNA擴(kuò)增。以致病疫霉基因組DNA為模板，選用ITS1和ITS4為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。正向引物ITS1：3′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-5′，反向引物ITS4：3′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-5′。PCR反應(yīng)體系20 μL：0.6 μL ITS1、0.6 μL ITS4、10 μL 2×TaqPCR MasterMin、1 μL DNA模板、7.8 μL ddH2O。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火60 s，72 ℃延伸90 s，30個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增結(jié)束后，對擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，用凝膠成像儀進(jìn)行觀察，并比較分析電泳圖譜。將目的條帶送生工生物工程(上海)有限公司進(jìn)行測序，利用經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫的BLAST工具進(jìn)行基因序列比對。用MEGA 10.0軟件制作進(jìn)化樹。

1.2.4 致病疫霉拮抗細(xì)菌的篩選

用試驗基地種植馬鈴薯的土壤制備土壤液，將10 g土壤溶于90 mL無菌水中，100 ℃水浴加熱10 min。再用無菌水依次稀釋至10-6梯度，涂布法接種到LB固體培養(yǎng)基上，每個濃度重復(fù)4次，37 ℃條件下倒置培養(yǎng)2～3 d。然后進(jìn)行分離純化，采用平板對峙法對有拮抗作用的細(xì)菌進(jìn)行復(fù)篩并編號。

制備拮抗細(xì)菌原液。選取WZ-406、WZ-502、WZ-503共3種拮抗細(xì)菌的純品，將其用接種環(huán)分別接種至LB培養(yǎng)基，200 r·min-1搖床37 ℃振蕩培養(yǎng)24 h。取D600為1.5左右(細(xì)菌濃度為3.65×107CFU·mL-1)的菌液放置在4 ℃冰箱備用。

抑菌效果。將上述細(xì)菌濃度為3.65×107CFU·mL-1的拮抗菌菌液稀釋為5個濃度：稀釋倍數(shù)分別為10×10-3、5×10-3、2.5×10-3、1.25×10-3、1×10-3，然后將不同濃度的菌液涂布于滅菌的燕麥固體培養(yǎng)基上，每處理重復(fù)3次。以不加入細(xì)菌原液為空白對照。將1塊生長10 d左右長勢相近的致病疫霉菌餅(直徑0.8 cm)放置在平板的中間，在18 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d左右后測量菌落直徑，并計算平均值。相對抑制率(%)=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-菌餅直徑)×100。

拮抗細(xì)菌對致病疫霉孢子囊釋放游動孢子的影響。將拮抗菌原液稀釋為5個濃度，稀釋倍數(shù)分別為10×10-3、5×10-3、2.5×10-3、1.25×10-3、1×10-3，將生長10 d左右的致病疫霉孢子囊放于無菌水中，制成孢子囊懸浮液，將其稀釋至300 mL(此時孢子囊濃度約為3.25×106個·mL-1)，分裝成3瓶，每瓶100 mL[8]。將不同濃度的細(xì)菌原液與孢子囊懸浮液等體積(3 mL)混合于滅菌的潔凈干燥培養(yǎng)皿內(nèi)，每個濃度重復(fù)3次，以LB液體培養(yǎng)基為空白對照，黑暗條件下4 ℃保存3 h[9]，促使孢子囊釋放游動孢子，統(tǒng)計50個孢子囊并計算游動孢子釋放率。游動孢子釋放率(%)=空孢子囊數(shù)/總孢子囊數(shù)×100。

拮抗細(xì)菌對致病疫霉孢子囊直接萌發(fā)的影響。制備300 mL孢子囊懸浮液，方法同上。運(yùn)用血球計數(shù)板法[10]將孢子囊濃度調(diào)至約1.5×106個·mL-1，將致病疫霉的孢子囊懸浮液與不同濃度菌液按體積比1∶1(3 mL∶3 mL)混合，與等體積無菌水混合作為對照。每處理重復(fù)3次，25 ℃暗培養(yǎng)5 h刺激孢子囊直接萌發(fā)。統(tǒng)計50個孢子囊，計算不同菌液濃度下孢子囊萌發(fā)的平均百分率。孢子囊萌發(fā)率(%)=孢子囊萌發(fā)數(shù)/孢子總數(shù)×100。

拮抗細(xì)菌對致病疫霉休止孢萌發(fā)的影響。使用上述配置的100 mL孢子囊懸浮液，4 ℃黑暗條件下放置3 h，促使孢子囊釋放出游動孢子，配制成游動孢子懸浮液，鏡檢游動孢子釋放數(shù)約為1.0×106個·mL-1。將游動孢子懸浮液與不同濃度菌液按體積比1∶1(3 mL∶3 mL)混合，以與等體積無菌水混合作為對照，每處理重復(fù)3次。10 ℃黑暗條件下放置3 h以刺激休止孢萌發(fā)。計算不同菌液濃度下休止孢萌發(fā)的平均百分率。休止孢萌發(fā)率(%)=休止孢萌發(fā)數(shù)/游動孢子釋放數(shù)×100。

拮抗菌WZ-502的形態(tài)和分子鑒定。拮抗菌的革蘭氏染色鑒定：將WZ-502經(jīng)多次平板劃線分離純化菌株，觀察每種菌株的形態(tài)結(jié)構(gòu)，革蘭氏染色后用顯微鏡進(jìn)行觀察。同時，參考《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》對其鑒定到屬。WZ-502的分子鑒定同1.2.3節(jié)，其16S rDNA擴(kuò)增檢測的引物為27 F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1541 R：5′-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3′[11]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用SPSS 21統(tǒng)計軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病疫霉及其拮抗菌的鑒定

2.1.1 形態(tài)鑒定

分離的致病疫霉PLB-2在燕麥培養(yǎng)基上呈現(xiàn)純白色(圖1-A)，菌絲分布均勻，呈白色絲狀，菌落呈現(xiàn)圓形。運(yùn)用插片法制作玻片進(jìn)行鏡檢，用乳酸石碳酸棉蘭染色液染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察，菌絲較細(xì)、無隔、有分支，大多數(shù)菌絲呈現(xiàn)多支形態(tài)，頂端有膨脹并著生孢子囊，孢子囊呈橢圓形(圖1-B、C)。

共篩選得到3株較好的拮抗菌，標(biāo)記為WZ-406、WZ-502、WZ-503(圖1-D、E、F)。WZ-502菌落呈黃色，表面含水量較高、光滑，黏性較高，菌落邊緣平整，短桿狀結(jié)構(gòu)。革蘭氏染色結(jié)果表明，WZ-502菌株革蘭氏染色呈藍(lán)紫色，說明此拮抗菌為革蘭氏陽性菌(圖1-I)；WZ-406、WZ-503呈暗白色，表面含水量較低，表面粗糙，菌落邊緣呈樹突狀結(jié)構(gòu)。

A，致病疫霉PLB-2菌落形態(tài)。B，致病疫霉菌絲形態(tài)；C，致病疫霉孢子囊形態(tài)；D，拮抗菌WZ-406；E，拮抗菌WZ-502；F，拮抗菌 WZ-503；G，拮抗菌WZ-406菌株革蘭氏染色(1 000×)；H，拮抗菌WZ-503革蘭氏染色(1 000×)；I，拮抗菌WZ-502革蘭氏染色(1 000×)。A， Colony charateristics of Phytophthora infestans stain PLB-2; B， Hypha charateristics of P. infestans; C， Sporangia morphological charateristics of P. infestans; D， Antagonistic bacterium WZ-406; E， Antagonistic bacterium WZ-502; F， Antagonistic bacterium WZ-503; G， Gram staining micrograph of the strain WZ-406 (1 000×); H， Gram staining micrograph of the stain WZ-503 (1 000×); I， Gram staining micrograph of the strain WZ-502 (1 000×).圖1 致病疫霉與拮抗細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)Fig.1 Morphological charateristics of Phytophthora infestans and its antagonistic bacteria

2.1.2 致病疫霉PLB-2的分子鑒定

核酸檢測結(jié)果顯示，致病疫霉PLB-2基因組DNA樣品的D260/D280在1.8～2.0，表明樣品中DNA含量較高。對DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果見圖2。PCR擴(kuò)增PLB-2的ITS-rDNA，結(jié)果顯示其條帶大小為546 bp。測序和BLAST比對結(jié)果顯示，其與Phytophthorainfestans同源性達(dá)到100%(圖3)。結(jié)合形態(tài)學(xué)分析，將馬鈴薯致病疫霉PLB-2鑒定為Phytophthorainfestans。

2.2 拮抗菌對致病疫霉生長的抑制效果

在相同培養(yǎng)條件下，不同濃度的拮抗細(xì)菌菌液對致病疫霉生長的抑制效果不同(表1)。本研究中，WZ-406對致病疫霉的抑制效果最差；WZ-502對致病疫霉的抑制效果最好，WZ-502菌液稀釋度為10.00×10-3時，致病疫霉菌落直徑最小，為(1.1±0.10)cm，幾乎未見生長，抑制效果顯著，相對抑制率高達(dá)87.36%；WZ-502菌液稀釋度為1.25×10-3時，致病疫霉菌落直徑為(5.1±0.60) cm，仍顯著小于對照。

2.3 拮抗菌對致病疫霉游動孢子釋放的抑制作用

3種拮抗細(xì)菌對致病疫霉孢子囊釋放游動孢子的抑制效果見表2，拮抗菌原液稀釋度為10.00×10-3、5.00×10-3、2.50×10-3、1.25×10-3、1.00×10-3時，3種拮抗細(xì)菌對致病疫霉游動孢子釋放均有顯著抑制效果；相同菌液濃度下，WZ-502的抑制作用最強(qiáng)，濃度越大，其抑制效果越好。細(xì)菌原液稀釋度為10.00×10-3時，WZ-502對致病疫霉的抑制作用最強(qiáng)，游動孢子釋放率只有15.38%，顯著低于對照組(46.15%)；WZ-503的抑制效果次之，WZ-406抑制效果最差。細(xì)菌原液稀釋度為1.00×10-3時，WZ-502處理的游動孢子釋放率在38.15%左右，仍顯著低于對照。

1和2為致病疫霉PLB-2基因組DNA；3為Taq 酶PCR擴(kuò)增ITS-rDNA序列；4為Pfu酶PCR擴(kuò)增ITS-rDNA序列。M，DNA標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)量。1 and 2， Genome DNA of PLB-2; 3， PCR production by Taq; 4， PCR production by Pfu; M， DNA marker.圖2 馬鈴薯致病疫霉PLB-2電泳圖Fig.2 Electrophoresis of Phytophthora infestans stain PLB-2

2.4 拮抗菌對致病疫霉孢子囊直接萌發(fā)的抑制作用

由表3可知，拮抗菌原液稀釋度為10.00×10-3、5.00×10-3、2.50×10-3、1.25×10-3、1.00×10-3時，3種拮抗細(xì)菌對致病疫霉孢子囊直接萌發(fā)的抑制作用均較顯著，隨著菌液濃度的增加，孢子囊萌發(fā)率逐漸降低。稀釋度相同時，WZ-502對致病疫霉孢子囊直接萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)。當(dāng)WZ-502稀釋度為10.00×10-3時，孢子囊萌發(fā)率為13.11%，顯著低于對照，相對抑制率達(dá)75.73%。當(dāng)WZ-502稀釋至1.00×10-3時，孢子囊萌發(fā)率依然顯著低于對照。

2.5 拮抗菌對致病疫霉休止孢萌發(fā)的抑制作用

由表4可見，拮抗菌原液稀釋度為10.00×10-3、5.00×10-3、2.50×10-3、1.25×10-3、1.00×10-3時，3種拮抗細(xì)菌處理的致病疫霉休止孢萌發(fā)率均顯著低于對照，拮抗菌菌液濃度越大，致病疫霉休止孢萌發(fā)率越低。WZ-502對致病疫霉休止孢萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，WZ-503次之。

2.6 拮抗菌WZ-502 16S rDNA鑒定

表1 不同濃度拮抗菌菌液處理的馬鈴薯致病疫霉菌落直徑

Table 1 Colony diameter ofP.infestanstreated by different concentration of antagonistic bacteria cm

稀釋度Dilution/10-3WZ-502WZ-406WZ-503對照Control10.001.1±0.10 d 7.2±0.26 b2.1±0.40 c8.7±0.40 a5.001.2±0.30 d 8.3±0.70 b2.5±0.50 c8.7±0.40 a2.504.0±0.17 d8.6±0.65 b6.1±0.30 c8.7±0.40 a1.255.1±0.60 c8.6±0.60 b8.6±0.55 b8.7±0.40 a

同行數(shù)據(jù)后無相同字母表示差異顯著(P<0.05)。

Data marked without the same letter in each row indicated significant differences atP<0.05.

表2 不同濃度拮抗菌處理的致病疫霉游動孢子釋放率

Table 2 Rate of zoospores release from sporangia ofP.infestansunder different concentration of antagonistic bacteria %

稀釋度Dilution/10-3WZ-502WZ-406WZ-503對照Control10.0015.38±0.35 d 23.08±0.79 b20.92±0.28 c46.15±0.05 a5.0023.38±0.43 c29.54±0.22 b23.08±0.25 c45.98±0.15 a2.5026.15±0.63 d33.23±0.32 b29.24±0.04 c46.85±0.69 a1.2530.77±0.18 d38.15±0.36 b35.08±0.63 c46.43±0.77 a1.0038.15±0.54 d44.31±0.58 b42.46±0.23 c46.05±0.05 a

圖3 馬鈴薯致病疫霉PLB-2和其他菌株的ITS-rDNA序列進(jìn)化樹Fig.3 Phylogenetic tree of ITS-rDNA of stain PLB-2 and other strains

表3 不同濃度拮抗菌處理的致病疫霉孢子囊的直接萌發(fā)率

Table 3 Sporangia germination ofP.infestansunder different concentration of antagonistic bacteria %

稀釋度Dilution/10-3WZ-502WZ-406WZ-503對照Control10.0013.11±0.26 d27.64±0.41 b15.27±0.75 c54.01±0.88 a5.0016.36±1.05 d27.27±0.72 b18.18±0.67 c55.38±0.54 a2.5026.18±0.86 d34.18±0.79 b32.00±0.73 c54.55±0.97 a1.2534.91±0.75 c45.09±0.77 b45.45±0.96 b53.55±0.65 a1.0045.45±0.54 c49.09±0.65 b49.45±0.96 b54.79±0.78 a

表4 不同濃度拮抗菌處理的致病疫霉休止孢萌發(fā)率

Table 4 Cystospore germination ofP.infestansunder different concentration of antagonistic bacteria %

稀釋度Dilution/10-3WZ-502WZ-406WZ-503對照Control10.0010±0.35 d22±0.51 b17±0.83 c51±0.76 a5.0014±0.35 d25±0.46 b23±0.78 c49±0.36 a2.5026±0.75 d36±0.69 b31±0.47 c50±0.47 a1.2532±0.06 d42±0.02 b38±0.06 c50±0.85 a1.0039±0.05 d45±0.04 b44±0.09 c52±0.23 a

上述抑制效果表明，拮抗菌WZ-502對致病疫霉生長、游動孢子釋放、孢子囊直接萌發(fā)、休止孢萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)。為進(jìn)一步開發(fā)利用拮抗菌WZ-502，在分子水平對其進(jìn)行了分類鑒定。PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，拮抗菌WZ-502的16S rDNA全長1 424 bp。BLAST比對顯示，WZ-502與副凝聚短狀桿菌Brachybacteriumparaconglomeratumstrain LMG 19861(NR022502)同源性達(dá)100%。采用NJ法構(gòu)建了13個菌株(選BLAST同源性最高12個菌株)的系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示，WZ-502菌株與副凝聚短狀桿菌NR025502處于同一分支，且同源性為99%(圖4)。Renske等提出序列相似性在95%～99%，可鑒定為相同屬[12]，故鑒定WZ-502為短狀桿菌Brachybacteriumsp.。

圖4 基于16S rDNA序列的拮抗菌WZ-502與其他菌株進(jìn)化樹Fig.4 Phylogenetic tree of antagonistic bacterium WZ-502 and other bacteria based on 16S rDNA

3 結(jié)論與討論

近年來，植物病害生物防治以其無污染、無殘留、無生態(tài)毒性和安全性好等優(yōu)點在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到廣泛的認(rèn)同。其中，利用拮抗微生物抑制馬鈴薯致病疫霉進(jìn)而防治馬鈴薯晚疫病也受到越來越多的關(guān)注[13]。李玉峰等[14]研究發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌代謝物在稀釋度10-2時對馬鈴薯致病疫霉菌菌絲生長、游動孢子釋放、休止孢萌發(fā)相對抑制率為49.79%、85.76%、77.29%，對游動孢子釋放、休止孢萌發(fā)有明顯的抑制效果，而對菌絲生長抑制性相對較弱。本研究篩選出的拮抗菌WZ-502菌液濃度為3.65×107CFU·mL-1、稀釋度為10.00×10-3時，對馬鈴薯致病疫霉菌絲生長的抑制率為87.36%，對孢子囊直接萌發(fā)相對抑制率為75.73%。張笑宇等[15]發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌稀釋度為10-1時，對馬鈴薯致病疫霉菌絲生長的抑制率達(dá)86.11%，對游動孢子釋放抑制率達(dá)78.1%。張亞輝等[16]運(yùn)用對峙培養(yǎng)法、打孔法和離體組織切片法，研究了菌株Sy11、M15和A5295對馬鈴薯致病疫霉的抑菌效果，發(fā)現(xiàn)細(xì)黃鏈霉菌Sy11菌株對馬鈴薯晚疫病的防治效果最好，對疫霉菌絲生長抑制率為88.4%。Lamsal等[17]研究表明，7株根際細(xì)菌對馬鈴薯致病疫霉的抑制率均在60%以上。劉治會等[18]研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌屬細(xì)菌265ZY1、265ZY3和265XY6對茄鐮孢菌具有較強(qiáng)的拮抗能力，其抑菌率均接近75%。Zegeye等[19]發(fā)現(xiàn)，木霉菌比熒光假單胞菌對馬鈴薯晚疫病的防效好，抑制率達(dá)到100%。綜上比較，本研究篩選的拮抗細(xì)菌短狀桿菌WZ-502對馬鈴薯致病疫霉的抑制效果與已報道的放線菌Sy11、地衣芽孢桿菌防效相當(dāng)，有希望應(yīng)用于馬鈴薯晚疫病的防治。

本研究從試驗基地種植馬鈴薯的土壤中篩選出3株對馬鈴薯致病疫霉具有顯著抑制效果的拮抗細(xì)菌(WZ-406、WZ-502、WZ-503)，其中，WZ-502對致病疫霉的抑制效果最好，其對致病疫霉游動孢子釋放、休止孢萌發(fā)和孢子囊萌發(fā)均有較好的抑制作用。16S rDNA序列比對顯示，WZ-502為短狀桿菌Brachybacteriumsp.。WZ-502濃度為3.65×107CFU·mL-1、稀釋度為10×10-3時，對致病疫霉的抑制效果最顯著，其對致病疫霉菌菌絲生長、休止孢萌發(fā)和孢子囊萌發(fā)有相對較好的抑制作用，相對抑制率為87.36%、80.39%、75.73%。今后需要進(jìn)一步對短狀桿菌WZ-502菌株的防病機(jī)理和實際利用潛能進(jìn)行深入研究，以加快該菌株的開發(fā)利用，并進(jìn)一步通過盆栽試驗和大田試驗驗證其對馬鈴薯晚疫病的防治效果。