潘 紅

(海安市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇 海安 226600)

腦出血是非外傷性腦實(shí)質(zhì)出血疾病，具有較高的發(fā)病率、致殘率及死亡率[1]。腦出血導(dǎo)致的占位性損傷，可引起周圍腦組織循環(huán)障礙、代謝紊亂[2]，最終引起腦組織缺血缺氧[3]。免疫因子在腦出血發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。生理?xiàng)l件下，巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(Macrophage mobility inhibitor，MIF)在神經(jīng)細(xì)胞、腦脊液和血中表達(dá)穩(wěn)定，腦出血時(shí)，MIF表達(dá)失調(diào)，血中含量發(fā)生明顯變化[4]。高遷移率蛋白-1(high mobility group box-1,HMGB-1)作為一種炎性介質(zhì)，在患者組織損傷及修復(fù)過程中具有放大炎癥反應(yīng)的作用，不僅對(duì)多種疾病的發(fā)生抑制，且對(duì)外界刺激的敏感性低，穩(wěn)定性強(qiáng)[5]。近年來，在腦血管疾病中，組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)受到越來越多的學(xué)者關(guān)注。本研究擬動(dòng)態(tài)監(jiān)測腦出血患者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平的變化情況，并對(duì)其臨床意義進(jìn)行分析，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行。選取本院2017年1月至2018年1月收治的100例腦出血患者作為腦出血組，其中男55例，女45例，46～76歲，平均(58.3±4.6)歲。另選取同期來本院進(jìn)行體檢的100例健康者作為健康組，體檢無腦血管疾病相關(guān)癥狀，影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)腦出血病變，其中男58例，女42例，48～75歲，平均(57.9±4.7)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 腦出血組納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

腦出血組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合第四屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的腦出血診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確診為腦出血；②首次發(fā)病，且均于發(fā)病后24h內(nèi)入院；③既往無腦出血相關(guān)疾病；④近期(1個(gè)月內(nèi))未服用激素類、免疫抑制劑或抗生素藥物治療；⑤患者知情并簽署知情同意書。腦出血組排除標(biāo)準(zhǔn)：①外傷性顱內(nèi)出血、顱內(nèi)腫瘤、腦梗死、蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦血管畸形、混合性腦出血患者；②惡性腫瘤、心肝腎功能明顯異常者；③近期感染、肺栓塞、凝血功能障礙、下肢深靜脈血栓、意識(shí)障礙、自身免疫系統(tǒng)缺陷及合并神經(jīng)系統(tǒng)感染的患者；④有頭顱手術(shù)史的患者。

1.3 治療方法

腦出血組入院后，給予患者脫水、營養(yǎng)神經(jīng)及對(duì)癥治療等常規(guī)處理。腦出血后24 h內(nèi)、3天、5天、7天和14天，分別于采集空腹下的靜脈血5 mL，抽取對(duì)照組空腹靜脈血5 mL，先室溫下放置30 min，再于4 ℃、3 000 r/min下離心10 min后取上層血清，置于-80 ℃冰箱中保存待檢。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附法

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中HMGB-1、MIF和TIMP-1含量，檢測步驟按試劑盒說明書進(jìn)行操作，三種試劑盒均由美國R&D公司提供。動(dòng)態(tài)監(jiān)測腦出血患者入院后24 h內(nèi)、3天、5天、7天和14天的血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量，并與健康組比較。

1.5 出血量觀察

根據(jù)出血量大小進(jìn)行分組，出血量>30 mL者，記為大量腦出血；出血量為15～30 mL者，記為中量出血；出血量<15 mL，記為少量出血。出血量的計(jì)算均由一個(gè)人完成。

1.6 病情觀察

以病情嚴(yán)重程度為依據(jù)進(jìn)行分組，意識(shí)狀態(tài)清楚，且肌力III級(jí)以上者，記為輕型；若中等程度意識(shí)障礙，且肌力II～I(xiàn)II級(jí)者，記為中型；若重度意識(shí)障礙，且肌力0～I(xiàn)級(jí)，記為重型。

1.7 預(yù)后評(píng)分

對(duì)腦出血患者90天隨訪，采用改良Rankin評(píng)分(modifiedRankin scale，mRS)與格拉斯哥預(yù)后評(píng)分(Glasgowoutcome scale，GOS)進(jìn)行預(yù)后評(píng)價(jià)，mRS>2分與GOS<4分則判定為不良預(yù)后[7-9]。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量

與健康組比較，腦出血組患者入院后24 h內(nèi)、3天、5天、7天和14天的血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量均顯著升高(P<0.05)，腦出血患者入院后血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量先逐漸上升，至入院后5天達(dá)高峰，再逐漸降低，入院后14天的血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量與健康組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 腦出血患者和健康者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1含量比較

與健康組比較，aP<0.05(n=100)

2.2 腦出血患者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與出血量的相關(guān)性

發(fā)病24h時(shí)，出血量大的患者HMGB-1、MIF和TIMP-1水平最高，顯著高于中量和少量出血組(P<0.05)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與出血量大小呈正相關(guān)性(P<0.05)。具體見表2。

表2 腦出血患者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與出血量的相關(guān)性

2.3 腦出血患者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性

發(fā)病24h時(shí)，病情重型組患者的HMGB-1、MIF和TIMP-1水平最高，顯著高于病情中型和輕型組，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性(P<0.05)。詳見表3。

表3 腦出血患者血清HMGB-1、MIF和TIMP-1水平與病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性

2.4 腦出血預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

因變量為出院后90天不良預(yù)后，將HMGB-1、MIF、TIMP-1、出血量、病情嚴(yán)重程度及腦室出血作為自變量，經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示，HMGB-1、MIF、TIMP-1、出血量、病情嚴(yán)重程度與不良預(yù)后密切相關(guān)，可作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素。詳見表4。

表4 腦出血預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

腦出血是神經(jīng)系統(tǒng)一種常見的危急重癥，可形成局部血腫，直接破壞腦組織，出現(xiàn)繼發(fā)性腦損傷，影響機(jī)體微環(huán)境的形成[10-11]。腦出血后機(jī)體釋放炎癥因子，引起腦水腫而加重腦損傷[12]。MIF是一種重要的炎癥因子，使巨噬細(xì)胞遷移加速、粥樣斑塊形成加速、膽固醇樣物質(zhì)沉積和血管硬化[13]，并通過釋放溶酶體酶而對(duì)腦血管病變進(jìn)展起促進(jìn)作用。腦出血發(fā)生時(shí)，MIF的活性激活，增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞的炎性環(huán)境程度[14]。本文對(duì)腦出血患者入院后不同時(shí)間點(diǎn)的血清MIF含量進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)腦出血發(fā)病后血清MIF含量先上升后下降，在發(fā)病5天時(shí)達(dá)到高峰，并顯著高于健康組，且Pearson相關(guān)分析顯示血清MIF與出血量大小、病情嚴(yán)重程度呈顯著正相關(guān)，提示腦出血患者血清MIF的表達(dá)可一定程度上對(duì)病情程度和預(yù)后進(jìn)行預(yù)測。

HMGB-1廣泛存在于各種組織和器官中，腦出血患者神經(jīng)受損，壞死的細(xì)胞組織的細(xì)胞膜會(huì)被損壞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的HMGB-1向胞外釋放。HMGB-1具有多種作用，可參與機(jī)體炎癥反應(yīng)[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，腦出血過程中給予HMGB-1抗體治療，可抑制HMGB-1釋放，改善腦水腫。本研究發(fā)現(xiàn)，與健康者比較，腦出血發(fā)病后，血清HMGB-1水平有明顯升高的趨勢，且其含量與出血量、病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示血清HMGB-1可作為腦出血嚴(yán)重程度及預(yù)后預(yù)測的重要指標(biāo)。

有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等在缺血、缺氧等情況下可合成更多的MMP-9，高水平的MMP-9在應(yīng)激狀態(tài)下能破壞細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，損傷血-腦屏障，繼而導(dǎo)致血管源性水腫的發(fā)生[16]。TIMP-1是MMP-9的內(nèi)源性抑制劑，在機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)下呈高表達(dá)，通過結(jié)合MMP-9而抑制蛋白酶的活性，進(jìn)而減輕血腦屏障的損傷[17]。本研究結(jié)果顯示，腦出血組患者不同時(shí)間點(diǎn)血清TIMP-1含量均顯著高于健康組，血清TIMP-1含量在腦出血發(fā)病后逐漸升高，在發(fā)病5天后達(dá)到高峰。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，腦出血24h時(shí)，出血量大的患者血清TIMP-1水平最高，顯著高于中量和少量出血者；血清TIMP-1水平與出血量多少、病情嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)。推測可能是因?yàn)槟X血腫對(duì)病灶周圍組織血管產(chǎn)生壓迫，減少局部血流量，引起組織缺氧而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，使MMP-9表達(dá)升高，進(jìn)而正反饋調(diào)節(jié)TIMP-1的表達(dá)。本研究對(duì)腦出血預(yù)后的多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，HMGB-1、MIF、TIMP-1、出血量、病情嚴(yán)重程度是預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，血清HMGB-1、MIF和TIMP-1可作為腦出血預(yù)后額的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其聯(lián)合檢測對(duì)腦出血預(yù)后評(píng)估具有重要意義。