張居典，劉亞文，王喜泉，徐珒昭，徐境含，武明月，許曉曦,*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030;2.黑龍江省綠色食品科學(xué)研究院，黑龍江 哈爾濱 150028）

黃曲霉毒素（aflatoxin，AFT）主要由黃曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）產(chǎn)生，是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的二氫呋喃香豆素類衍生物[1-2]。AFT共有20多種結(jié)構(gòu)，最主要的4 種類型為AFB1、AFB2、AFG1和AFG2[3]，其中AFB1的致畸、致癌、致突變性及降低機(jī)體免疫功能的毒性最強(qiáng)，是誘發(fā)肝癌的主要原因之一[4-5]，其致癌作用是由肝臟細(xì)胞色素P450酶系經(jīng)過代謝產(chǎn)生AFB1-8,9-環(huán)氧化物導(dǎo)致[6-7]，對(duì)人體肝臟、腎臟等器官具有極強(qiáng)的損害作用。AFB1廣泛存在于玉米、花生和大豆等農(nóng)作物中，因此人體在日常飲食中與AFT的接觸很難避免，且長期低劑量攝入會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生不良的影響[8]。當(dāng)人體長期攝入低劑量AFB1時(shí)，AFB1會(huì)強(qiáng)烈抑制人體的免疫功能從而降低人體免疫力[9-10]。

目前對(duì)AFB1能起到有效控制的方法主要有物理法、化學(xué)法和生物降解法。物理法（如加熱、輻射和等離子降解[11-12]）雖方便高效，但成本較高;化學(xué)法（如臭氧、過氧化氫和酸處理）雖成本低，卻容易造成二次污染[13-15];生物降解法雖穩(wěn)定性差，卻幾乎無任何副作用，因此近年來研究的重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到微生物降解AFB1方面[16-18]。鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosu）是革蘭氏陽性菌，也是目前研究最深入的益生菌之一[19]，市場(chǎng)上已經(jīng)有許多與鼠李糖乳桿菌相關(guān)的成型產(chǎn)品，具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)、抑制癌癥和降低膽固醇等功效[20]。

已有體外研究表明，鼠李糖乳桿菌對(duì)AFB1具有較強(qiáng)的吸附能力，能夠降低飼料或農(nóng)作物中AFB1的含量，尤其是對(duì)鼠李糖乳桿菌進(jìn)行酸處理或熱處理后吸附效果更佳[21-22]。目前，一些體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鼠李糖乳桿菌可吸附動(dòng)物體內(nèi)的AFB1，結(jié)合后一起排出體外。但目前，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)大多采用先通過灌胃高劑量AFB1對(duì)動(dòng)物造成急性肝損傷或免疫缺陷，再給予鼠李糖乳桿菌對(duì)已患病動(dòng)物進(jìn)行治療，但這種模型建立的方式與日常人體AFB1暴露的方式不同。因此，本實(shí)驗(yàn)為達(dá)到模擬鼠李糖乳桿菌吸附人體內(nèi)AFB1的目的，采用對(duì)大鼠連續(xù)給予低劑量AFB1，并每日補(bǔ)充不同處理方式、不同菌體濃度的鼠李糖乳桿菌菌液的方法，通過測(cè)定大鼠血清生化及免疫等指標(biāo)，確定鼠李糖乳桿菌降低動(dòng)物體內(nèi)AFB1的作用程度及效果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

4 周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠（體質(zhì)量90～110 g，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006） 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

AFB1北京華安麥科生物技術(shù)有限公司;鼠李糖乳桿菌由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供;二甲基亞砜 美國Sigma公司;磷酸鹽緩沖液美國HyClone公司;免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）（IgA、IgG、IgM）質(zhì)量濃度檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所有限公司;白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-2、IL-4、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 上海江萊生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ACS30型電子秤 浙江風(fēng)華科技有限公司;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州丹瑞實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司;DHP-9162電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司;MHBS-1096A酶標(biāo)儀 南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;3K15高速冷凍離心機(jī) 德國Sigma公司;755B紫外-可見分光光度計(jì) 上海精密儀器公司;DSX-280B高壓滅菌鍋 上海申安公司;Cobas-c501自動(dòng)生化分析儀瑞士羅氏公司。

1.3 方法

1.3.1 鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)

將鼠李糖乳桿菌接種到MRS液體培養(yǎng)基中，于37 ℃培養(yǎng)18 h并連續(xù)活化3 次后，3 000 r/min離心10 min，收集上清液及菌體，所得上清液即為鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液。將菌體中加入生理鹽水洗滌3 次后，用生理鹽水重懸并按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法調(diào)整菌體濃度，即為鼠李糖乳桿菌活菌液。取鼠李糖乳桿菌活菌液用高壓滅菌鍋于121 ℃滅菌15 min，再用生理鹽水重懸并調(diào)整菌體濃度，即為熱滅活鼠李糖乳桿菌液。需確保實(shí)驗(yàn)中制得的滅活菌樣品涂布于MRS固體培養(yǎng)基中于37 ℃培養(yǎng)48 h后無菌落產(chǎn)生。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理及分組

將大鼠飼養(yǎng)在明暗交替、溫度（23±2）℃、相對(duì)濕度（32±2）%的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中，自由獲取食物和水。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合東北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)定。

將大鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下適應(yīng)5 d，適應(yīng)期間飼喂基礎(chǔ)飼料，自由進(jìn)水。適應(yīng)期結(jié)束后，將150 只大鼠隨機(jī)分為10 組，每組15 只，并保證各組間大鼠體質(zhì)量均無顯著差異（P＞0.05）：空白組;AFB1對(duì)照組;鼠李糖乳桿活菌高、中、低劑量組;熱滅活鼠李糖乳桿菌高、中、低劑量組;鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液高、低劑量組?？瞻捉M大鼠飼喂正常飼料，每日灌胃0.5 mL生理鹽水。除空白組外，其余各組大鼠均飼喂添加50 μg/kg AFB1的飼料;AFB1對(duì)照組每日灌胃0.5 mL生理鹽水，鼠李糖乳桿菌活菌高、中、低劑量組每日分別灌胃0.5 mL菌體濃度為1010、109、108CFU/mL的鼠李糖乳桿菌懸液。滅活鼠李糖乳桿菌高、中、低劑量組每日分別灌胃0.5 mL菌體濃度為1010、109、108CFU/mL的滅活鼠李糖乳桿菌懸液。鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液高、低劑量組每日分別灌胃0.5 mL菌體濃度為109、108CFU/mL的鼠李糖乳桿菌發(fā)酵上清液。連續(xù)灌胃4 周，每次取樣實(shí)驗(yàn)前1 d對(duì)大鼠禁食，分別于飼喂第0、7、14、28天記錄大鼠體質(zhì)量，并在每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取4～5 個(gè)發(fā)育正常的大鼠個(gè)體，麻醉后心臟取血，記錄肝、腎等內(nèi)臟質(zhì)量，按下式計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3.3 血清肝功能生化指標(biāo)的測(cè)定

于飼喂第0、7、14、28天每次隨機(jī)取4～5 只大鼠空腹稱體質(zhì)量，經(jīng)乙醚麻醉后心臟取血3 mL，放入4 ℃冰箱中靜置12 h，4 ℃、3 000 r/min離心10 min，收集血清。將制備好的血清用Cobas-c501自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）活力。

1.3.4 大鼠血清免疫因子質(zhì)量濃度的測(cè)定

按1.3.3節(jié)方法制備血清，將血清于-20 ℃冰箱保存。取保存的血清，解凍后按照試劑盒說明書測(cè)定大鼠細(xì)胞因子IL-2、IL-4、TNF-α、IgA、IgG、IgM質(zhì)量濃度。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均使用Statistix 8軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;組間顯著性差異分析采用單因素方差分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;用Origin 8.5軟件作圖;結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠體質(zhì)量的影響

表 1 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠體質(zhì)量的影響Table 1 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on body mass of rats with continuous low dose AFB1 intake g

大鼠體質(zhì)量是直接反映大鼠生長性能的指標(biāo)，同時(shí)可以間接反映大鼠其他生理機(jī)能是否正常。鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠體質(zhì)量的影響如表1所示。實(shí)驗(yàn)開始前各組大鼠體質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05）。飼喂1 周后，活菌高劑量組，滅活菌高、中、低劑量組以及發(fā)酵液高劑量組大鼠體質(zhì)量與AFB1對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），表明鼠李糖乳桿菌具有干預(yù)效果，但與空白組相比仍有顯著差異（P＜0.05）。飼喂2 周后，活菌高劑量組大鼠體質(zhì)量與空白組無顯著性差異（P＞0.05），預(yù)防大鼠體質(zhì)量下降的效果最為突出。飼養(yǎng)4 周后，除活菌高劑量組外，滅活菌高、中劑量組大鼠體質(zhì)量也與空白組大鼠體質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05）。

以上結(jié)果表明，處理方式及劑量對(duì)鼠李糖乳桿菌維持大鼠體質(zhì)量正常具有顯著影響。高劑量的鼠李糖乳桿菌活菌對(duì)維持大鼠體質(zhì)量正常的作用效果最快，飼喂2 周時(shí)即出現(xiàn)明顯干預(yù)作用，中、低劑量的鼠李糖乳桿菌活菌在飼喂4 周時(shí)仍無顯著效果。滅活鼠李糖乳桿菌在飼喂4 周時(shí)對(duì)維持大鼠體質(zhì)量正常有明顯效果，較活菌作用時(shí)間相對(duì)較慢，但高、中劑量均可維持大鼠體質(zhì)量正常，對(duì)鼠李糖乳桿菌濃度需求較低。

2.2 鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠臟器指數(shù)的影響

表 2 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠臟器指數(shù)的影響Table 2 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on visceral organ indexes of rats with continuous low-dose AFB1 intake

臟器指數(shù)是指內(nèi)臟鮮質(zhì)量與大鼠體質(zhì)量的比值，是初步反映大鼠健康情況的指標(biāo)[23]。由于AFB1有強(qiáng)烈的致癌及降低免疫功能的作用，因此，主要會(huì)引起肝臟、腎臟及脾臟的損傷。由表2可知，各組大鼠的脾臟指數(shù)無顯著差異（P＞0.05），而肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)差異顯著（P＜0.05）。AFB1對(duì)照組大鼠中肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)較空白組均顯著升高（P＜0.05），分別增加了44.32%和33.78%。這是由于AFB1造成大鼠肝臟及腎臟損傷，同時(shí)出現(xiàn)不同程度腫大。與AFB1對(duì)照組相比，活菌、滅活菌和發(fā)酵液高劑量組大鼠肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)均顯著降低（P＜0.05），肝臟指數(shù)分別降低了21.88%、20.92%、20.35%，腎臟指數(shù)分別降低了21.21%、18.18%、19.19%。以上結(jié)果表明，3 種處理方式的鼠李糖乳桿菌均可維持大鼠肝臟及腎臟指數(shù)穩(wěn)定，但與鼠李糖乳桿菌劑量有關(guān)，鼠李糖乳桿菌菌體濃度越高，維持大鼠肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)穩(wěn)定的效果越明顯。

2.3 鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清功能指標(biāo)的影響

圖 1 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠ALT（A）和AST（B）活力的影響Fig. 1 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on ALT (A) and AST (B) activity in rats with continuous low-dose AFB1 intake

大鼠血清中ALT及AST活力是反映大鼠肝功能的重要指標(biāo)，會(huì)在發(fā)生肝損傷時(shí)明顯升高。如圖1A所示，與空白組相比，飼喂28 d時(shí)，除活菌高劑量組外，其余各組大鼠血清ALT活力顯著升高（P＜0.05）;與AFB1對(duì)照組相比，僅活菌及發(fā)酵液高劑量組大鼠ALT活力顯著降低（P＜0.05），且與空白組差異不顯著（P＞0.05），其中活菌高劑量組大鼠ALT活力降低的效果最為明顯。如圖1B所示，飼喂28 d時(shí)，各組大鼠AST活力的變化趨勢(shì)與ALT類似。與AFB1對(duì)照組相比，除活菌與發(fā)酵液低劑量組外，其余各組大鼠ALT活力均顯著降低（P＜0.05），其中活菌中、高劑量組，滅活菌各劑量組及發(fā)酵液高劑量組的穩(wěn)定效果較為明顯，且與空白組差異不顯著（P＞0.05）。

不同處理方式、不同菌體濃度鼠李糖乳桿菌對(duì)大鼠血清ALT及AST活力有不同程度的影響。其中，高劑量的鼠李糖乳桿菌活菌和發(fā)酵液對(duì)ALT活力的降低效果顯著（P＜0.05），兩組大鼠與空白組大鼠血清ALT活力接近，特別是活菌高劑量組。同樣，中、高劑量的鼠李糖乳桿菌活菌，各劑量的滅活菌及高劑量的發(fā)酵液均對(duì)大鼠血清AST活力穩(wěn)定產(chǎn)生顯著效果（P＜0.05）;其中，高劑量的活菌和滅活菌穩(wěn)定效果最明顯。這與曾東等[24]采用同為革蘭氏陽性菌的植物乳桿菌F22對(duì)AFB1中毒小鼠血清中ALT與AST活力的改善效果基本一致。崔燕等[25]采用高劑量AFB1誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷模型，模型組大鼠AST及ALT活力均顯著升高。

2.4 鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠細(xì)胞免疫因子分泌的影響

2.4.1 鼠李糖乳桿菌對(duì)大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度的影響

細(xì)胞因子是一類多功能蛋白質(zhì)分子，主要由免疫細(xì)胞及其他參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞產(chǎn)生，包括IL、干擾素及TNF等，具有介導(dǎo)相關(guān)免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)炎癥、刺激造血功能及參與組織修復(fù)等功能[26]。IL-2的主要作用是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞增殖和遷移，是Th1細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子，IL-2水平上升表明免疫應(yīng)答向Th1方向移動(dòng)[27]。

圖 2 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度的影響Fig. 2 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on serum IL-2 in rats with continuous low dose AFB1 intake

由圖2可知，飼喂28 d時(shí)大鼠血清中IL-2質(zhì)量濃度存在差異。AFB1對(duì)照組大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05），說明AFB1對(duì)大鼠免疫功能有較強(qiáng)的抑制作用。給予鼠李糖乳桿菌后，各組大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度不同程度增大，活菌中、高劑量組和發(fā)酵液高劑量組大鼠血清IL2質(zhì)量濃度與AFB1對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），其中活菌和發(fā)酵液高劑量組與空白組差異不顯著（P＞0.05）。這表明鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度的穩(wěn)定效果與處理方式及菌體濃度有關(guān)。低劑量活菌、各劑量滅活菌和低劑量發(fā)酵液均對(duì)大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度的降低無明顯改善效果，給予中劑量活菌稍有改善，但與空白組相比仍有顯著差異（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，高劑量的活菌和發(fā)酵液對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清IL-2質(zhì)量濃度降低情況的改善效果顯著，接近空白組大鼠水平。

2.4.2 鼠李糖乳桿菌對(duì)大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度的影響

IL-4是一種功能性多樣的細(xì)胞因子，在免疫調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵性作用，其調(diào)節(jié)免疫的機(jī)制極為復(fù)雜，不同靶器官類型調(diào)節(jié)作用不同[28]。Th0細(xì)胞在受到抗原刺激后分化為Th1和Th2兩個(gè)細(xì)胞亞群，其中Th2主要分泌以IL-4為代表的細(xì)胞因子。由圖3可知，飼喂28 d時(shí)，各組大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度存在差異。AFB1對(duì)照組大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度與空白組大鼠相比顯著升高（P＜0.05），升高了202.13%。與AFB1對(duì)照組相比，僅活菌高劑量組大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05），僅比空白組大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度上升了12.92%，效果最佳。

圖 3 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清IL-4質(zhì)量濃度的影響Fig. 3 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on serum IL-4 in rats with continuous low dose AFB1 intake

大鼠血清IL-4水平異常表明大鼠血清免疫因子受到AFB1影響，而IL-4質(zhì)量濃度的增加說明AFB1會(huì)使大鼠免疫向Th2方向移動(dòng)，而給予鼠李糖乳桿菌后，各組大鼠血清IL-4水平出現(xiàn)不同程度的下降，表明不同處理方式、不同劑量的鼠李糖乳桿菌均具有維持血清IL-4水平穩(wěn)定的能力，但除活菌高劑量組外，其余各組大鼠血清IL-4水平維持效果不顯著。高劑量活菌維持連續(xù)攝入低劑量AFB1大鼠血清IL-4水平穩(wěn)定的能力最佳，低劑量發(fā)酵液幾乎無維持IL-4穩(wěn)定的能力。

2.4.3 鼠李糖乳桿菌對(duì)大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度的影響

圖 4 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度的影響Fig. 4 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on serum TNF-α in rats with continuous low-dose AFB1 intake

TNF-α主要由巨噬細(xì)胞以及某些T細(xì)胞分泌產(chǎn)生，TNF-α最主要的作用是直接殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖，TNF-α的特異性受體普遍存在于許多重要的活性代謝組織，如脂肪組織、肝臟和骨骼肌細(xì)胞[29]。由圖4可知，飼喂28 d時(shí)各組大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度存在差異。AFB1對(duì)照組大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度與空白組大鼠相比顯著降低（P＜0.05），降低了55.83%。與AFB1對(duì)照組相比，僅活菌和發(fā)酵液高劑量組大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度顯著升高（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂28 d時(shí)大鼠免疫功能受到AFB1影響，AFB1使大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度明顯降低。給予低劑量不同方式處理的鼠李糖乳桿菌均無法促使大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度趨于正常，僅高劑量的活菌和發(fā)酵液維持連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清TNF-α質(zhì)量濃度穩(wěn)定的效果顯著（P＜0.05），其中，高劑量活菌效果最佳。

綜上所述，長期攝入低劑量AFB1會(huì)對(duì)大鼠免疫功能產(chǎn)生抑制作用，其中血清IL-2、TNF-α質(zhì)量濃度均顯著降低（P＜0.05），IL-4質(zhì)量濃度顯著升高（P＜0.05）。隨菌體濃度的變化鼠李糖乳桿菌活菌對(duì)大鼠免疫系統(tǒng)的影響差異較大;高劑量活菌維持大鼠免疫系統(tǒng)功能穩(wěn)定的效果最佳，對(duì)實(shí)驗(yàn)中所測(cè)血清各項(xiàng)免疫因子均能發(fā)揮顯著改善作用（P＜0.05）;中劑量活菌僅對(duì)血清IL-2質(zhì)量濃度具有顯著穩(wěn)定作用（P＜0.05），對(duì)其他免疫因子幾乎無穩(wěn)定作用，而低劑量活菌對(duì)所測(cè)血清各項(xiàng)免疫因子均無顯著穩(wěn)定作用（P＞0.05）。滅活菌對(duì)免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定作用隨菌體濃度變化差異較小，各劑量滅活菌維持大鼠免疫系統(tǒng)穩(wěn)定的作用效果均不顯著（P＞0.05）。而Campagnollo等[30]研究發(fā)現(xiàn)，體外環(huán)境中冷凍干燥的鼠李糖乳桿菌與AFB1有較好的結(jié)合效果，這與本實(shí)驗(yàn)體內(nèi)環(huán)境中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，因此滅活后的鼠李糖乳桿菌對(duì)AFB1抑制免疫功能的預(yù)防作用值得進(jìn)一步討論。高劑量發(fā)酵液對(duì)維持大鼠免疫系統(tǒng)穩(wěn)定效果顯著（P＜0.05），而低劑量發(fā)酵液僅能夠維持大鼠血清TNF-α水平穩(wěn)定，對(duì)血清IL-2及IL-4水平均無顯著作用（P＞0.05）。

2.5 鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清Ig質(zhì)量濃度的影響

Ig是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，血清抗體水平的高低在一定程度上反映了機(jī)體對(duì)疾病的抵抗能力。IgA、IgG、IgM水平是所有Ig中具有代表性的3 項(xiàng)指標(biāo)，通常情況下，檢測(cè)這3 項(xiàng)指標(biāo)即可反映機(jī)體的免疫水平。IgA是動(dòng)物機(jī)體抗感染的最初屏障，具有十分重要的作用[31];IgG是血清中含量最高的Ig，具有抗菌、抗病毒等作用，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞之間的連接，可以殺傷腫瘤細(xì)胞等靶細(xì)胞[32];IgM是血清中一種分子質(zhì)量較大的Ig，有較強(qiáng)的殺菌、中和毒素和抗病毒等免疫功能。

由表3可知，飼喂28 d時(shí)，AFB1對(duì)照組大鼠血清IgA、IgG、IgM質(zhì)量濃度與空白組相比均顯著降低（P＜0.05），分別降低了41.25%、66.27%、49.33%?；罹鲃┝拷M與滅活菌中、高劑量組大鼠血清IgA質(zhì)量濃度均與AFB1對(duì)照組大鼠差異顯著（P＜0.05），分別比AFB1對(duì)照組提高了47.65%、34.34%、28.74%、37.89%、29.62%;表明鼠李糖乳桿菌活菌及滅活菌對(duì)維持連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清IgA水平穩(wěn)定有顯著作用（P＜0.05），且呈劑量依賴性，而鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液對(duì)維持大鼠血清IgA水平穩(wěn)定無顯著作用。

表 3 不同處理方式鼠李糖乳桿菌對(duì)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠Ig質(zhì)量濃度的影響Table 3 Effects of Lactobacillus rhamnosus and its cell-free culture supernatant on serum immunoglobulins in rats with continuous low-dose AFB1 intake

飼喂28 d時(shí)，與AFB1對(duì)照組相比，活菌和滅活菌中、高劑量組及發(fā)酵液高劑量組大鼠血清IgG質(zhì)量濃度均顯著升高（P＜0.05）;這表明鼠李糖乳桿菌活菌、滅活菌以及發(fā)酵液均有維持血清IgG水平穩(wěn)定的效果，且菌體濃度越高，維持穩(wěn)定的效果越好。

各組大鼠血清IgM水平變化與IgA類似，僅活菌和滅活菌高劑量組與AFB1對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05），分別升高了80.54%、76.22%，其余各組大鼠血清IgM水平均無顯著提升（P＞0.05）。鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液對(duì)維持大鼠血清IgM水平穩(wěn)定不能發(fā)揮顯著作用。以上結(jié)果表明，僅高劑量的鼠李糖乳桿菌活菌及滅活菌對(duì)AFB1抑制免疫系統(tǒng)有顯著改善作用。

3 結(jié) 論

鼠李糖乳桿菌能夠促進(jìn)連續(xù)低劑量攝入AFB1大鼠血清生化及免疫功能指標(biāo)趨于正常，且與鼠李糖乳桿菌處理方式及劑量有關(guān)。高劑量鼠李糖乳桿菌活菌對(duì)維持大鼠血清生化及免疫功能指標(biāo)正常的效果最好且有效作用時(shí)間最快。鼠李糖乳桿菌能夠維持大鼠血清生化及免疫功能正常的原因可能是鼠李糖乳桿菌能夠吸附大鼠體內(nèi)的AFB1，二者結(jié)合后促進(jìn)AFB1與鼠李糖乳桿菌一起排出體外，但是目前更深入的結(jié)合機(jī)理需要后續(xù)進(jìn)一步的研究與探討。