劉硯螢 趙巖巖 黃茗宣 謝佳欣 耿瑞瑩 張池 張燕

摘? 要：目的：包載DOX的納米粒子在SKOV3細(xì)胞內(nèi)累積的研究。方法：本實(shí)驗將人卵巢癌SKOV3細(xì)胞作為研究對象，在激光共聚焦顯微鏡觀測NPs、NPs-DOX熒光染料隨時間變化的累積情況。結(jié)果：NPs、NPs-DOX在體外培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。結(jié)論：隨時間的增加，細(xì)胞內(nèi)納米粒子的累積量逐漸增加，表現(xiàn)出時間依賴性。

關(guān)鍵詞：載藥納米粒子;DOX;SKOV3

中圖分類號：R318 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-2945（2020）15-0033-02

Abstract： Objective： To study the accumulation of DOX-loaded nanoparticles in SKOV3 cells. Methods： In this experiment， human ovarian cancer SKOV3 cells were used as the research object， and the situationthat NPs and NPs-DOX fluorescent dyes accumulated with time was observed by laser confocal microscope. Results： The fluorescence intensity of NPs and NPs-DOX increased gradually in SKOV3 cells cultured in vitro. Conclusion： with the increase of time， the accumulation of intracellular nanoparticles increased gradually， showing a time-dependent manner.

Keywords： drug-loaded nanoparticles; DOX; SKOV3

現(xiàn)如今，婦科惡性腫瘤種類繁多，卵巢癌所占的死亡率最高，其中大多數(shù)原發(fā)于卵巢，隨著目前臨床治療手段的完善，臨床上，應(yīng)用腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行篩查，可提前發(fā)現(xiàn)患者腫瘤，及早進(jìn)行治療。卵巢癌是以手術(shù)治療為主，輔以放化療[1]。但其療效仍相對局限，實(shí)際上，化療藥在對卵巢癌細(xì)胞造成傷害的同時，對機(jī)體各個系統(tǒng)和器官也造成不同程度的損害。臨床上的一線化療方案主要還是鉑類聯(lián)合紫杉醇，作用于細(xì)胞DNA，但在治療過程中，治療效果上仍相對有限，卵巢癌對這類藥物，產(chǎn)生阻滯及外排，在很大程度上影響著臨床腫瘤治療的效果。應(yīng)用化療藥物后，引起多種并發(fā)癥，降低患者的生活質(zhì)量，降低患者生存幾率[2-4]。阿霉素（adriamycin;又稱多柔比星，doxorubicin，DOX），目前多在實(shí)體腫瘤化療中發(fā)揮作用，它是一種廣譜蒽環(huán)類，可以抗腫瘤的藥物[5]。科技進(jìn)步，納米技術(shù)在多方面皆有應(yīng)用，其中納米藥物更是引起關(guān)注。多篇文獻(xiàn)報道，在抗腫瘤治療中，載體納米藥物有更好的療效。納米藥物，通過物理、化學(xué)等方式將傳統(tǒng)化療藥物負(fù)載到納米粒子上，得到納米化療藥。納米藥物載體粒徑小，通過腫瘤的特殊效應(yīng)，聚積于腫瘤內(nèi)部，改變了化療藥物難溶于水，對非腫瘤細(xì)胞有殺傷性等缺點(diǎn)[6，7]。將納米技術(shù)與醫(yī)學(xué)相結(jié)合，改變了化療藥物的溶解度和穩(wěn)定性，利用納米粒子的特性，減輕了化療藥物帶來的毒副作用。本實(shí)驗旨在研究包載DOX的納米粒子在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞內(nèi)的累積情況。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗材料

（1）實(shí)驗細(xì)胞與質(zhì)粒

SKOV3由佳木斯大學(xué)生命科學(xué)中心細(xì)胞庫惠贈;NPs、NPs-DOX由國家納米科學(xué)中心提供。

（2）試劑與耗材（見表1）

1.2 實(shí)驗方法

（1）載藥納米粒子在細(xì)胞內(nèi)的累積：于激光共聚焦專用平皿中，接種SKOV3細(xì)胞，置于培養(yǎng)箱中孵育24h，培養(yǎng)條件為37℃、5% CO2。

（2）加入250μg/mL的NPs、NPs-DOX，分別培養(yǎng)30min、60min、120min后。

（3）使用Olym-pus FV1000共聚焦顯微鏡，檢測細(xì)胞內(nèi)藥物的累積情況。

2 結(jié)果

觀察NPs-DOX在SKOV3內(nèi)累積的情況，結(jié)果如圖1所示，隨著時間的增加，細(xì)胞內(nèi)的NPs-DOX熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。反映了納米粒子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的量隨時間的增加而增加，呈現(xiàn)了時間依賴性。

3 討論

腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的內(nèi)外微環(huán)境有很大的差異，pH值、對熱敏感性、谷胱甘肽含量以及血管狀態(tài)等方面對腫瘤細(xì)胞均有影響[8]。納米粒子利用這種特點(diǎn)，使載藥納米粒子進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)釋放，從而可以大大減少正常組織對藥物副作用的影響。本實(shí)驗利用共聚焦顯微鏡，觀察載藥納米粒子隨時間增加，其在SKOV3細(xì)胞內(nèi)逐漸增加。由此可知，納米粒子包裹的DOX可進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，快速釋放DOX，并通過納米粒子的協(xié)同治療，發(fā)揮良好的體外抗腫瘤作用。

納米技術(shù)在腫瘤的治療中，得到廣泛關(guān)注。載藥納米粒子在抗腫瘤藥物中，通過加強(qiáng)有效遞送介質(zhì)發(fā)揮著重要作用。將靶向性和功能性納米藥物載體與機(jī)體的生理環(huán)境結(jié)合研究，在治療中發(fā)揮更大的作用，減輕了化療藥物帶來的毒副作用，更少的使用藥物，減少耐藥性。使藥物作用更有效地抑制腫瘤細(xì)胞。納米藥物載體的使用，結(jié)合化學(xué)療法，放療和成像技術(shù)等多種腫瘤治療方法，以及多種抗癌合作方式，可以提高腫瘤組織的敏感性，并且藥物的抗腫瘤作用是更有效地發(fā)揮作用。改善納米藥物載體的結(jié)構(gòu)和功能，研究和開發(fā)具有更好生物相容性的納米載體，進(jìn)一步促進(jìn)納米藥物載體的臨床研究將成為未來的重要研究領(lǐng)域。

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